4107

УДК 575 Колесникова, Е. О. Процессы и приборы в биотехнологии растительных

культур Текст: Методические указания к лабораторным работам для студентов по направлению подготовки 19.03.01 - Биотехнология, профиль Промышленная экология / Е.О. Колесникова; ВГЛТУ. – Воронеж, ВГЛТУ, 2017. – ЭБС ВГЛТУ. – 32 с.

2

Лабораторная работа № 5 Вентиляция в лаборатории. Вытяжные шкафы…………….. 26

3

Техника безопасности при выполнении лабораторных работ

Правила работы в биотехнологической и химической лаборатории

Перед лабораторной работой изучите теоретический раздел и описание лабораторной работы. Покажите преподавателю конспект теоретической и практической части лабораторной работы. Сдайте преподавателю допуск для проведения лабораторной работы.

Ознакомьтесь с методикой выполнения лабораторной работы.

В соответствии с техникой безопасности запрещается:

-брать реактивы больше требуемого количества;

-неизрасходованные или взятые в избытке реактивы возвращать обратно в склянки (их надо сдать лаборанту);

-загромождать рабочее место (во время работы на лабораторном столе должны находиться только необходимые приборы, реактивы и лабораторная тетрадь);

-уносить приборы, реактивы общего пользования на свое рабочее

место;

-путать пробки от склянок;

-принимать пищу в лаборатории;

-работать в лаборатории в неаккуратно застегнутой одежде, с распущенными волосами;

-нагревать на открытом огне горючие жидкости;

-сливать горячие растворы в толстостенную посуду.

Необходимо выполнять следующие требования.

Перед началом работы следует ополоснуть чистую посуду дистиллированной водой над раковиной, затем при необходимости высушить еѐ.

После окончания работы следует тщательно вымыть посуду.

Склянки и реактивы должны находиться в определенном месте, их нельзя переносить на другие столы.

Следует работать без лишней торопливости, не проливать и не просыпать реактивы, если все же это случилось, нельзя сливать загрязненный реактив обратно в склянку с чистым реактивом, а следует собрать его и передать лаборанту; стол (или другой запачканный предмет) нужно вымыть и вытереть.

4

Бросать бумагу, бытовое стекло и другие предметы можно только в специальные сосуды и ящик для мусора.

Если во время работы будет пролита в большом количестве кислота или другой раствор, нужно тотчас сообщить о случившемся лаборанту.

Удалять растворы нужно быстро, так как эти реактивы портят стол и другие предметы, и осторожно, чтобы не прожечь одежду и не повредить руки.

При всех несчастных случаях необходимо тотчас обращаться к лаборанту или преподавателю.

Внимательно наблюдать за ходом опыта, отмечая и записывая каждую его особенность (выпадение и растворение осадков, изменение окраски, температуры и т.д.).

Расходовать для осуществления химических реакций то количество реактивов, которое рекомендовано в указаниях по выполнению опыта, а если нет специальных оговорок – минимальное.

Работы с вредными веществами проводить только под тягой. Концентрированные кислоты и щелочи наливать осторожно в вытяжном шкафу; не уносить их на свои рабочие столы.

Если случайно прольете кислоту или щелочь, то быстро смойте их интенсивной струей воды из водопроводного крана, а потом обратитесь к дежурному лаборанту и по его указанию приведите в надлежащий порядок свое рабочее место.

Не выливать в раковину отработанные концентрированные кислоты и щелочи, а пользоваться для этого специально отведенной посудой, установленной под тягой. Отработанные металлы складировать в специальную емкость. Бумагу и остатки твердых веществ бросать в урну.

При работе постоянно следить за тем, чтобы реактивы (особенно кислоты, щелочи) не попадали на лицо, руки, одежду.

При нагревании реактивов или жидкостей не наклоняться над сосудом во избежание попадания брызг на лицо, одежду, обувь.

При нагревании жидкостей в колбе не держите ее отверстием к себе или в сторону соседа.

Не нюхайте выделяющиеся газы, близко наклоняясь к сосуду. Если нужно понюхать газ, то следует сделать это осторожно, слегка направляя рукой поток воздуха к себе.

5

В случае ожога (пламенем горелки или горячим предметом) обожженное место смочить крепким раствором марганцовокислого калия. Можно приложить ватку, смоченную жидкостью от ожога.

При разбавлении щелочей, кислот и т.п. веществ, а также при мытье посуды с веществами, разъедающими кожу рук, обязательно надевать резиновые перчатки.

В конце работы уберите рабочее место, выключите воду, электроприборы.

При работе с электроприборами необходимо соблюдать

следующие правила.

Работу с приборами можно начинать только после тщательного ознакомления с инструкцией по их эксплуатации.

Включать приборы только в сеть переменного тока с напряжением

220 В.

Электроприборы должны располагаться на лабораторном столе таким образом, чтобы химические реактивы не попадали на них, а также в электрическую розетку.

Если произошло замыкание электроустановки или возник пожар, необходимо немедленно обесточить прибор. Тушить пожар следует песком и огнезащитной тканью.

Приборы должны иметь рабочую изоляцию, элемент для заземления.

В электроприборах имеются элементы, находящиеся под напряжением, поэтому запрещается самостоятельно вскрывать и ремонтировать их, а также работать с неисправными приборами.

После окончания работы необходимо отключить прибор от сети.

6

Лабораторная работа № 1

Правила техники безопасности при работе в лаборатории биотехнологии растений

Цель работы: ознакомиться с правилами, обеспечивающими безопасность при работе в биотехнологической лаборатории.

Общие сведения.

Необходимые условия для работы с культурой изолированных тканей: Необходимым условием работы с культурой изолированных тканей

является соблюдение строгой стерильности. При работе в стерильном помещении лаборатории все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений:

1.Все лица, находящиеся в лаборатории, должны быть в халатах, сменной обуви (либо бахилах), белой шапочке или косынке.

2.В помещении запрещается прием пищи и курение, хранение продуктов питания.

3.Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи.

4.Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее платье на халат.

5. Каждый работник должен пользоваться только своим рабочим местом.

6. Все операции должны производиться с соблюдением правил стерильности: все стерильные работы проводят вблизи пламени горелки, переливание зараженных жидкостей производят над лотком с дезинфицирующим раствором и т. п.

7.Нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с заразным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют.

8.Весь инвентарь, находившийся в контакте с заразным материалом, подлежит стерилизации или уничтожению. Биотехнологическую лабораторию необходимо содержать в чистоте. Следует регулярно проводить гигиеническую уборку помещений лаборатории. Обеспечить полную стерильность лаборатории очень трудно и это не всегда необходимо, но значительно снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях в лабораторных помещениях возможно. Это достигается путѐм применения на практике методов дезинфекции, то есть уничтожения возбудителей инфекционных болезней на объектах внешней среды.

7

Для стерильных пересадок при работе с культурой тканей используется ламинар-бокс, оснащеные УФ лампами. рабочую поверхность нужно протерать 70 %-ным этанолом. Чистую посуду, инструменты стерилизуют сухим жаром в сушильном шкафу при температуре 160 С в течение 1,5–2 ч. Стерильный инструмент используют только для одноразовой манипуляции.

Питательные среды для культивирования растительных тканей стерилизуют автоклавированием под давлением 0,5–1 атм.

Материалы и оборудование: оборудование лаборатории культуры тканей.

Ход работы.

1.Под руководством преподавателя ознакомиться с устройством биотехнологической лаборатории.

2.Освоить правила техники безопасности при работе в лаборатории биотехнологии растений.

5. Заполнить таблицу «Требования техники безопасности при работе в лаборатории биотехнологии».

Вопросы и задания для самоконтроля

1.Как устроена биотехнологическая лаборатория?

2.Каковы основные требования по охране труда в лаборатории биотехнологии?

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №2

Понятие стерилизации, дезинфекции. Приборы, обеспечивающие стерильность материалов

Цель: Изучить основные принципы стерилизации и дезинфекции, научиться стерилизовать материалы.

Общие сведения.

Дезинфекция – это комплекс мер, используемый для уничтожения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Выделяют четыре основных метода проведения дезинфекции. Механический метод подразумевает механическое удаление частиц с

поверхностей и из воздушной среды путем проветривания, очистки поверхностей, стирки, вентиляции. К механическому способу дезинфекции также относят фильтрацию воздуха, воды, удаление зараженного грунта. Невозможно удалить все патогенные организмы механическим методом,

8

поэтому он обычно используется в сочетании с физическим или химическим методом дезинфекции.

Химические методы дезинфекции заключаются в использовании дезинфицирующих средств, губительно воздействующих на болезнетворные организмы и разрушающих токсины. Часто для проведения химической дезинфекции используются хлорсодержащие и спиртовые препараты, перекись водорода, формалин.

Физические методы дезинфекции основаны на принципах физического воздействия. Применяется высокотемпературная обработка материалов, а также ультрафиолетовое излучение. Данный метод считается эффективным и экологически безопасным.

Биологический метод дезинфекции основан на взаимодействии различных микроорганизмов. Применяется в основном для канализационных и сточных вод, для очистки септиков и сливных сооружений.

Комбинированные методы дезинфекции представляют собой сочетание двух и более основных способов проведения обеззараживания для повышения эффективности результата. Чаще всего сочетается первичная механическая обработка с использованием химических средств или физического метода.

Средства дезинфекции различаются по назначению и форме выпуска. Среди основных требований к современным средствам дезинфекции выделяют следующие:

-высокую эффективность, обеспечивающую целевое специфическое воздействие агента в короткий срок;

-безопасность; -совместимость и безвредность для материалов обрабатываемых

поверхностей и изделий; -специализированное очищающее действие для органических и

неорганических видов загрязнения; -стабильность при использовании;

-возможность контроля концентрации средства дезинфекции в растворе;

и т. п.

К типам основных действующих веществ при химическом виде дезинфекции относятся спирты (этиловый, изопропиловый и другие), галогены (самый распространенный – хлор), альдегиды, пероксиды (на основе атомарного кислорода, например, в составе перекиси водорода), фенолы, гуанидины, амины (обладают также моющими свойствами). Департаментом Госсанэпиднадзора Министерства Здравоохранения на

9

территории Российской Федерации разрешены к использованию в лечебнопрофилактических учреждениях около 250 средств дезинфекции, имеющих соответствующие сертификаты.

Стерилизация (от латинского слова sterilis — бесплодный) — обеспложивание, освобождение от всего живого. В лабораторной практике стерилизации подвергают инструменты, посуду, питательные среды и другие материалы, применяемые в работе.

Стерильность может быть достигнута при помощи физических и химических методов.

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Гарантию стерильности обеспечивает не только сами процессы дезинфекции и стерилизации, но и соблюдение правил предстерилизационной очистки, упаковки, хранения и использования обработанного инструмента. Критерием эффективности процесса считается необратимая потеря микроорганизмами способности к размножению, оцениваемая в лабораторных условиях.

Самыми распространенными являются методы тепловой стерилизации (физические). К ним относят:

-стерилизацию сухим жаром или горячим воздухом, проводимую в специальных сушильных шкафах. Температура процесса 160-170 градусов, время выдержки 60-90 минут. Подобный способ подходит для обработки лабораторной посуды, инструментов;

-прокаливание на огне, эффективный метод для дезинфекции и стерилизации металлических и стеклянных изделий, применяемый ограниченно ввиду воздействия на материалы;

-стерилизацию кипячением проводят чаще всего в сочетании с химическим методом, для повышения эффективности добавляя в воду 2% раствор карбоната натрия. Подобный метод используется для обработки инструментов, резиновых трубок, наконечников;

-автоклавирование, наиболее эффективный и быстрый метод физической стерилизации с использованием насыщенного пара под высоким давлением в автоклавах. Высокая эффективность достигается за счет возможности достижения паром под давлением более высоких температур, чем у воды и водных растворов. В автоклавах стерилизуют расходные

10