15_Test_lekarstvennoy_chuvstvitelnosti_mikobakterii_tuberkulyoza__opisanie_metodov_preimuschestva_nedostatki_ogranichenia
.pdf15.Тест лекарственной чувствительности микобактерии туберкулёза – описание методов, преимущества, недостатки, ограничения.
ВИДЫ ЛУ.
Первичная(истинная, природная) лекарственная устойчивость – устой-чивость, обнаруженная у микобактерий, выделенных от пациента, никогда не принимавшего противотуберкулезные препараты или принимавшего их менее 1 месяца. В данном случае подразуме-вается, что больной заразился лекарственно-устойчивым штаммом микобактерий туберкулеза. Первичная ЛУ – это постоянный видовой признак штамма, возникший в результате спонтанных мутаций в геноме.
Вторичная(приобретенная, индуцированная) лекарственная устойчивость – это устойчивость МБТ у больных, ранее не принимавших ПТП более 1 месяца. Вторичная лекарственная устойчивость является косвенным показателем качества проводимой химиотерапии и формируется при нарушении ее правил (нерегулярное лечение, заниженные дозы противотуберкулезных препаратов, неправильно подобранная схема лечения и др.причины). Вторичная ЛУ - это свойство отдельных штаммов сохранять жизнеспособность в присутствии ПТП, возникающее в результате различных адаптационных механизмов.
Методы определения лекарственной устойчивости
Существует много различных методов определения лекарственной устойчивости. В качестве основных рекомендуется использовать непрямые фенотипические методы исследований, т.е. исследование культуры МБТ в присутствии противотуберкулезных препаратов (ПТП):
•метод абсолютных концентраций на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена;
На плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена проводят определение лекарственной чувствительности (ЛЧ) МБТ методом абсолютных концентраций к ПТП первого ряда (стрептомицин, изониазид, рифампицин, этамбутол) и к ПТП второго ряда (канамицин, капреомицин, циклосерин, офлоксацин, этионамид, аминосалициловая кислота, амикацин). Результат оценивают через 21 день после добавления препаратов.
Метод основанный на добавлении в культуральную среду определенных стандартных концентраций противотуберкулезных препаратов, которые принято называть критическими при расчете на мкг/мл. Критическая концентрация – это самая низкая концентрация, которая подавляет рост 95% «диких» штаммов МБТ. Для каждой среды или системы культивирования подобраны соответствующие критические концентрации препаратов. Культура МБТ считается чувствительной к той или иной концентрации противотуберкулезного препарата, которая содержится в среде, если число колоний МБТ, выросших в одной пробирке с тем или иным ПТП, не превышает 20, а посевная доза соответствует 107 микробных тел.
При массовых исследованиях этот метод менее трудоемок, однако он более продолжителен по времени получения результата. В плотных средах во время свертывания может несколько уменьшаться содержание некоторых термолабильных препаратов, например, стрептомицина. Определение лекарственной чувствительности на жидких средах более трудоемко, требует микроскопии препаратов, но результат можетбыть получен в более короткие сроки. Недостатком этого способа является то, что больные, леченные антибактериальными препаратами, могут выделять микобактерий, лишенные корд-фактора, не дающие при размножении жгутов или паукообразных микроколоний, наличие которых служит критерием устойчивости к препарату.
метод пропорций на среде Левенштейна-Йенсена или на среде Миддлбрука 7Н10 Метод пропорций. Метод основан на сравнении числа микобактерий выделен-ной культуры, выросших в отсутствии препарата и в его присутствии в крити-ческих концентрациях. Для этого приготовленную, суспензию микобактерий разводят до концентрации 10-4 и 10-6. Оба разведения суспензии засевают на питательную среду без препарата и на набор сред с разными препаратами. Если на среде с препаратом вырастают колонии, составляющие более 1% от числа выросших на среде без препарата, культура считается устойчивой к
данному препарату. Если количество КОЕ, устойчивых к данному препарату, менее 1%, культура считается чувствительной.
•модифицированный метод пропорций в жидкой питательной среде в системе с автоматизированным учетом роста микроорганизмов, нитратредуктазный метод индикации роста МБТ на основе метода абсолютных концентраций на плотной питательной среде с использованием реактива Грисса;
Модифицированный метод пропорций в жидкой питательной среде в системе с автоматизированным учетом роста микроорганизмов типа BACTEC MGIT 960. В процессе определения происходит сравнение скорости роста МБТ - в контрольной пробирке и в пробирках с лекарственными препаратами. В первую пробирку не вносится лекарственный препарат - контрольную, в остальные пробирки добавляются известные концентрации тестируемых лекарственных препаратов, рост в которых сравнивается с ростом в контрольной пробирке.
• модифицированный метод определения минимальных ингибирующих концентраций в жидкой питательной среде.
На жидких питательных средах проводят определение ЛЧ МБТ к ПТП первого ряда (изониазид, рифампицин, этамбутол, стрептомицин, пиразинамид) и к ПТП второго ряда (амикацин, канамицин, офлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, этионамид, протионамид, капреомицин, аминосалициловая кислота, линезолид).
Плюсы: На плотных средах можно получить более четко сравнимые результаты. Определение лекарственной чувствительности на жидких средах более трудоемко, требует микроскопии препаратов, но результат может быть получен в более короткие сроки. Недостатком этого способа является то, что больные, леченные антибактериальными препаратами, могут выделять микобактерий, лишенные корд-фактора, не дающие при размножении жгутов или паукообразных микроколоний, наличие которых служит критерием устойчивости к препарату.