The replication of DNA in Escherichia Coli.
СДЕЛАНО С ЛЮБОВЬЮ И СТРАДАНИЯМИ
Важные определения
Плавучая плотность — плотность макромолекулы, выраженная через плотность растворителя, численно равна плотности раствора, при которой она перестает седиментировать или флотировать в этом растворе в процессе центрифугирования.
Нативная ДНК — природная двухцепочечная молекула ДНК с ненарушенными водородными связями между всеми комплементарными парами оснований двух цепей, находящаяся в биологически активной форме.
Попытайтесь понять
Метод
равновесного
центрифугиров ания в градиенте плотности CsCl.
Аликвоту бактериального лизата, содержащую приблизительно 108 лизированных клеток, центрифугировали при 31 410 в растворе CsCl.
Расстояние от оси вращения увеличивается вправо. Число рядом с каждой фотографией дает время, прошедшее после достижения 31 410 оборотов в минуту.
Метод равновесного центрифугирования в градиенте плотности CsCl.
ДНК разделяется не по молекулярным массам, а по удельной плотности.
1.Меченая радиоактивным азотом N15 ДНК («тяжелым азотом») имеет плотность 1,724 г/ см3
2.ДНК клеток, выращенных на среде с N14 («легким азотом»), – 1,710 г/см.
Экспериментальная часть
Escherichia coli B выращивали при температуре 360°С с аэрацией в среде солей глюкозы, содержащей хлорид аммония в качестве единственного источника азота.
Происходил подсчет клеток и анализ колоний.
Ультрафиолетовы е фотографии поглощения.
Области одинаковой плотности занимают одинаковое положение на каждой фотографии.
Смещение ручки микроденситометра над базовой линией прямо пропорционально концентрации ДНК.
Степень маркировки вида ДНК соответствует относительному положению между полосами полностью меченой и немеченой ДНК, показанной в самом нижнем кадре, который служит в качестве эталона плотности.
Проверка вывода о том, что ДНК в полосе промежуточной плотности только наполовину мечена, обеспечивается рамкой, показывающей смесь поколений 0 и 1.9.
Полосы ДНК из лизата бактерий после центрифугирования
Время после добавления субстратов N14
Измеряется в единицах времени генерации
|
20 |
часов |
|
центрифугирования при |
|
Мы сами не понимаем |
44 |
770 об/мин |
|
|
|
Выводы
Обсуждение результатов:
1.Азот в молекуле ДНК делится поровну между двумя субъединицами, которые остаются неизменными на протяжении многих поколений.
2.После репликации каждая дочерняя молекула получила одну родительскую субъединицу.
3.Реплицирующий акт приводит к молекулярному удвоению.
Азот в молекуле ДНК делится поровну между двумя субъединицами, которые остаются неизменными на протяжении многих поколений.
После репликации каждая дочерняя молекула получила одну родительскую субъединицу.
