МИНОБРНАУКИ РОССИИ

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего образования

«МИРЭА – Российский технологический университет»

РТУ МИРЭА

Институт тонких химических технологий им. М.В. Ломоносова

(наименование Института)

Кафедра биотехнологии и промышленной фармации

(наименование кафедры)

Лабораторная работа №4

«Анализ анионов методом капиллярного электрофореза»

Работу выполнила

Студентка группы ХББО-02-16

Иванова Елена Анатольевна

Руководитель работы

Тюкова Виктория Сергеевна

Москва, 2019

Оглавление

Вывод 5

Цель работы: изучить теоретические основы метода капиллярного электрофореза, его преимущества и недостатки по сравнению с другими методами анализа; освоить систему фармацевтического анализа PA 800 Plus; получить в ходе работы электрофореграмму и определить по ней время миграции для различных анионов органических кислот.

Реактивы, оборудование и их характеристика:

Лабораторная работа проводится с использованием набора для анализа анионов The SCIEX Anion Analysis Kit, который содержит все необходимые материалы, для разделения и количественного определения анионов в системе фармацевтического анализа PA 800 Plus.Раствор для покрытия капилляра

• Буфер для разделения

• Раствор для кондиционирования Na

• Раствор для промывки капилляра

• Раствор для промывки* (килота)

• Внутренний стандарт (I.S.)

• Смесь для анализа органических кислот

Посуда, необходимая для выполнения анализа:

• Универсальные виалы, вместимостью 2 мл

• Крышки для универсальных виал

• Микровиалы

• Виалы для ПЦР

• Крышки для ПЦР виал

• Держатель для ПЦР виал

• Автоматическая пипетка

• Наконечники для автоматической пипетки

Ход работы

Работу начали с заполнения универсальных виал водой (В), раствором для промывки капилляра (П), раствором для покрытия капилляра (П_к), буфером для разделения (Р) и раствором для кондиционирования Na (Na). При заполнении руководствовались основными правилами:

• Используемые крышки для виал должны быть чистыми и совершенно сухими.

• Никогда не используйте крышки от виал повторно.

• Не переполняйте виалы, не залевайте в виалу более 1,7 мл жидкости. Иногда переполнение виал вызывает появление гидростатического давления, выталкивающего жидкость в напорную линию, что может привести к повреждению системы нагнетания давления.

• Не допускайте недозаполнения виал или слишком низкого падения уровня жидкости. Низкий уровень жидкости в разделительных виалах может привести к плохому разделению.

Потому все виалы заполнили 1,5 мл необходимого раствора, кроме виалы, предназначенную для отходов (О), поместив в нее 0,6 мл раствора для промывки капилляра.

Заполненный виалы расположили в штативы как показано на рис. 1

Рис. 1. Расположение универсальных виал в штативах для буферов:

П – раствор для промывки капилляра, П_к – раствор для покрытия капилляра, Р – буфер для разделения, Na – раствор для кондиционирования Na, О – отходы, В – вода.

Также каждая подгруппа взяла по 1 образцу для исследования (4 органических кислоты: щавелевая, яблочная, кофеиновая, аминокапроновая и 1 тестовая смесь), заполнила виалы 200 мкл пробы и разместила виалы во входном штативе в положениях А3-Е3.

Далее при помощи преподавателя запустили последовательные методы:

• Кондиционирование капилляра

• Разделение аналитов

• Выключение

В результате были получены электрофореграммы. На рис. 2 представлена электрофореграмма для раствора щавелевой кислоты. Результат анализа электрофореграммы

Время миграции оксолат-иона 3.769 мин (при значении тока 43.7-45 мкА)

Рис. 2. Электрофореграмма раствора щавелевой кислоты

Вывод

В ходе работы освоена система фармацевтического анализа PA 800 Plus; получена электрофореграмма щавелевой кислоты и определено по ней время миграции, равное 3.769 мин.