- •Основы биотехнологии и биомедицины
- •Трансгенез: введение генов в эукариотический организм путем генетической трансфекции или переносом ядер соматических
- •Три способа получения трансгенных животных
- •Трансфекция
- •Получение трансгенных мышей путем микроинъекции ДНК
- •Прямая инъекция ДНК в пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки мыши
- •Ретровирусные
- •Строение ретровирусной частицы
- •Цикл размножения ретровирусов
- •Строение генома ретровируса и продуктов его экспрессии
- •Синтез кДНК
- •Схема получения и интеграции ретровирусного вектора (MuLV)
- •Упаковка ретровирусного вектора в вирусные частицы
- •Трансгенные игрунки (Callithrix jacchus), экспрессирующие EGFP в конечностях. Использован ретровирусный вектор
- •Технологии,
- •Самообновление и дифференцировка эмбриональных стволовых клеток
- •Раннее предимплантационное
- •Раннее предимплантационное развитие мыши (продолжение)
- •Перемещение развивающегося зародыша мыши по яйцеводу
- •Этапы технологии, основанной на использовании эмбриональных стволовых клеток
- •эмбрион
- •Получение генного нокаута у мышей с использованием гомологичной рекомбинации в ES-клетках
- •Генные нокауты с использованием энхансерных, промоторных и генных ловушек (gene trapping)
- •Направленная инактивация генов животных методом генных ловушек (Gene trapping)
- •Принцип действия системы сайт-специфической рекомбинации Cre/lox
- •Влияние взаимной ориентации loxP-сайтов на результат действия рекомбиназы Cre
- •Индуцируемый генный нокаут с использование м Cre- рекомбиназы
- •Индуцируемая сверхэкспрессия трансгенов с использованием системы Cre/lox
- •Индуцируемый необратимый генный нокаут с использованием системы Cre/lox
- •Тканеспецифич еский промотор
- •Индуцируемая сверхэкспрессия трансгенов с использованием тетрациклиновой системы
- •Клонирование
- •Первый «клон», полученный путем пересадки ядра соматической клетки
- •Стадии процесса клонирования млекопитающих
- •Стадии клонирования млекопитающих вручную (Handmade cloning - HMC)
- •Клоны поросят, полученные вручную и традиционным методом
- •У Сук Хван приносит извинения
- •Основные патологические фенотипы, отмеченные у клонированных животных
- •Программирование генома в нормальном развитии
- •Перепрограммирование генома соматических клеток после пересадки ядер
- •Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPS) и их трансплантация в целях терапии
- •Нерепродуктивное (терапевтическое ) клонирование человека
- •Репродуктивное клонирование человека
Индуцируемая сверхэкспрессия трансгенов с использованием тетрациклиновой системы
Клонирование
животных
Первый «клон», полученный путем пересадки ядра соматической клетки
Овца Долли (1997-2003) и ее первый ягненок Бонни (1998)
Рослинский институт в Шотландии близ Эдинбурга
Стадии процесса клонирования млекопитающих
Энуклеация |
Традиционный метод |
|
переноса ядер |
|
соматических клеток |
Активация SrCl2 или
экстракт
спермы
Дробление бластомеров
Зарод
ыш
Перенос
ядра
соматическ ой клетки
Приемн ая мать
Кло
н
Стадии клонирования млекопитающих вручную (Handmade cloning - HMC)
•Сбор яичников,
•Выделение ооцитов из
фолликулов,
• Созревание,
•Отделение сопутствующих
клеток,
•Разрушение zonae pellucidae |
микр трубочек |
•Фитогемагглютинин, |
|
проназой |
индивидуал. |
•Ядро в выпячивании удаляется |
прикрепление к |
лезвием |
цитопласту |
• Кариопласт удаляется, |
•Электрослияние |
Клоны поросят, полученные вручную и традиционным методом
HMC |
HMC |
TC |
У Сук Хван приносит извинения
за допущенные фальсификации и прощается с Сеульским университетом
Хван У Сук с клонированным Снаппи (афганская борзая)
За последние годы в Южной Корее удалось клонировать корову, кота, свинью, волка и койота
Основные патологические фенотипы, отмеченные у клонированных животных
Organ |
Cattle |
Sheep |
|
Goats |
Pigs |
Mice |
Cloning |
0–5 |
0.4–4.3 |
|
0.7–7.2 |
0.1–0.9 |
0.2–5.8 |
efficienc |
|
|
|
|
|
|
y (%) |
|
Reduced |
|
– |
– |
Placentomeg |
Placenta Impaired development, |
|
|||||
|
oedematous |
vascularity |
|
|
aly |
|
|
cotyledons, enlarged |
|
|
|
|
|
|
umbilical vessels, |
|
|
|
|
|
BW |
hydrallantois |
– |
|
– |
Lower |
– |
Higher |
|
|||||
Heart |
RV enlargement |
Hypertrophy |
– |
RV |
– |
|
|
|
|
|
|
enlargem |
|
Lungs |
Hypertension¶ |
Hypertensio |
Pneumon |
ent |
Pneumonia |
|
– |
||||||
CNS |
– |
n, MPV |
|
ia |
– |
– |
Pathology |
– |
|||||
Kidneys |
Abnormalities |
Defects, |
|
– |
– |
– |
|
(including size |
hydronephro |
|
|
|
|
HLS |
abnormalities) |
sis |
|
– |
– |
Immune |
Lymphoid hypoplasia, |
– |
|
||||
|
anaemia |
– |
|
– |
– |
impairment |
Endocrin Diabetes |
|
– |
||||
e |
Fibrosis, fatty liver |
Enlargement |
– |
– |
Hepatic |
|
Liver |
||||||
|
|
, |
BDP, |
|
|
necrosis |
MS |
Limb deformities |
fibrosis |
|
– |
– |
– |
Body-wall |
||||||
|
|
defects |
|
|
|
|
Программирование генома в нормальном развитии
Перепрограммирование генома соматических клеток после пересадки ядер
Oct4, Sox2, Klf4 and c-Myc
Получение
индуцированных
эмбриональных стволовых клеток
Ингибитор
ыДНК метил- трансфераз ы, деацетилаз
ыгистонов и др.