biotechnology-2012-03
.pdf
Сайт-специфический мутагенез
ПЦР для клонирования в вектор
ПЦР в реальном времени
(Real-time PCR)
•одновременная амплификация и измерение количества продукта
•наличие флюоресцентного красителя в смеси
•наличие оптического блока в амплификаторе
линейный |
lg |
33
Системы детекции
1.Неспецифичные
–интеркалирующие красители (SYBR Green и др.)
2.Специфичные
–линейные разрушаемые пробы (TaqMan)
–«молекулярные маячки» (beacons)
–примыкающие пробы
SYBR Green
Метод TaqMan
(линейные разрушаемые зонды)
флуоресцентные зонды и гашение флуоресценции
флуоресцентный
краситель
гаситель
флуоресценции
зонд
специфический фрагмент ДНК
FRET – Fluorescence Resonance Energy Transfer
FRET – Fluorescence Resonance Energy Transfer
Резонансный перенос энергии флуоресценции
Принцип метода TaqMan
• 5`-3` экзонуклеазная активность Taq-полимеразы
Принцип метода TaqMan
• 5`-3` экзонуклеазная активность Taq-полимеразы
Принцип метода TaqMan
• 5`-3` экзонуклеазная активность Taq-полимеразы