3.1.2.3.2.Идентификация микроорганизмов.

Идентификация микроорганизмов проводилась традиционными методами с использованием элективных питательных сред, морфологических особенностей микроорганизмов и особенностей ферментативных систем объектов исследования. В данном разделе приводится пример методологии последовательности и спектра питательных сред для идентификации бактерий сем. Еп1егоЬас1епасеае.

Идентификация бактерий сем.Еп1егоЬа^епасеае.

Пробу приготовленную методом разведения чистой культуры согласно стандарту мутности 10² - 10³ КОЕ / см³ в количестве 10 см³ вносят в 50 см³ питательной Среды №3 , перемешивают и инкубируют при температуре 32°С в течение 24-48 часов. При наличии роста делают пересев на чашки со средой № 4 и № 5 . Посевы инкубируют при температуре 32° С в течение 24 -48 часов.

Морфологические характеристики бактерий сем.Еп!егоЬас1епасеае на диагностических средах.

Диагностическая среда Среда№4 Среда №5

Колонии круглые , Черные колонии с малиновые с характерным

металлическим блеском металлическим блеском или без ,участки Среды под

него,розовые,бесцветны колониями окрашены в е , блестящие , черный цвет ,

выпуклые ,диаметром зеленовато -бурые 2-4 мм. колонии, светло-

зеленые , бурые.

Окраска по Грамму Грамотрицательные неспорообразующие

Палочки

Если после инкубации на средах №4 и №5 не будет колоний , соответствующих морфологическим характеристикам,данной таблице , считают, что в пробе нет бактерий ceM.Enterobacteriaceae.

Колонии ,подозрительные по морфологии , пересевают на скошенную среду №1. Инкубируют при температуре 32°С в течение 19-24 часов. Культуру проверяют на чистоту и делают пересевы на Среды №6 и №7. После посевов в половине пробирок со средой №6 вносят по 0,5 стерильного вазелинового масла. Высевы инкубируют при температуре 32°С в течение 19-24 часов. При наличии роста , ферментацию глюкозы устанавливают по изменению цвета Среды №6 из красного в желтый в пробирках с маслом и без него. О наличии нитратов в среде №7 судят по появлению красного окрашивания при внесении в среду реактива Грисса . Параллельнор исследуют чистые культуры на наличие фермента цитохромоксидазы.

Тест на наличие нитритов.

К суточной исследуемой культуре на среде №7 приливают 0,2-0,3 см³ реактива Грисса , погружая пипетку до дна пробирки. Появление красного окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.

Тест на наличие цитохромоксидазы.

Полоску бумаги смачивают реактивом и наносят , бактериальной петлей или стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий со скошенной Среды №1. Синее окрашивание , появляющиеся через 2-5 мин., свидетельствует о положительной оксидазной реакции.

Выявление и идентификация бактерий родов Pseudomonas и Staphylococcus.

Приготовленную пробу в количестве 10 см³ вносят в 50 см³ питательной Среды №8, перемешивают и инкубируют при температуре 32° С в течение 24­48 часов. При наличии роста делают пересевы петлей на Среды №9 и № 10 , разлитые в чашки Петри. Посевы инкубируют при температуре 32°С в течение 24-48 часов.Морфологическая характеристика рода Pseudomonas на диагностической среде №9.

Характерная морфология колоний Окраска по Граму

Зеленоватые , как правило , Грамотрицательные флюоресцирующие колонии, неспорообразующие палочки

голубые в ультрафиолетовом свете

Морфологическая характеристика рода Staphylococcus на диагностической среде №10.

Характерная морфология колоний Окраска по Граму

Золотисто-желтые колонии , Грамположительные кокки окруженные желтыми зонами расположенные грозями

При наличие на среде №9 характерных для Pseudomonas колоний грамотрицательных неспорообразующих палочек , обладающих специфическим запахом и выделяющих сине-зеленый

пигмент пиоцианин в питательный агар , культуру проверяют на наличие фермента цитохромоксидазы. Для этого , подозрительные по морфологии колонии отсеивают на скошенную среду №1 и инкубируют при температуре 32°С в течение 19-24 часов.

Наличие на среде №10 золотисто-желтых колоний грамположительных кокков , окруженных желтыми зонами , свидетельствует о ферментации маннита. Подозрительные колонии отсевают на скошенную питательную среду №1 и на чашки с кровяным агаром. Чистую культуру стафилококка исследуют на наличие фермента цитохромоксидазы.

Тест на наличие цитохромоксидазы.

Для проведения реакции используется сухая кроличья плазма промышленного производства, которую разводят согласно наставлению по применению.

Если в образце обнаружены грамположительные кокки , которые ферментируют маннит , дают положительную реакцию плазмокоагуляции и

обладают гемолитичекой активностью проба контаминирована бактериями рода Staphylococcus.

В данном подразделе приведен методологический подход по идентификации микроорганизмов .Полный набор питательных сред и методик более детально изложен в рамках литера-туры, посвященной данному направлению исследования.(Берджи,1997)