1.Качественные реакции на субстраты цикла Кребса.
Ход работы: в пробирку вносят несколько кристаллов лимонной кислоты, во вторую – несколько кристаллов янтарной кислоты /сукцината/ в каждую пробирку + по 1кап. дист. воды, затем в каждую пробирку + по 10-12 кап Н2SO4 концентрированной
после чего + несколько кристаллов резорцина, пробирки осторожно нагреть на водяной бане – появляются окрашенные продукты, к охлажденным растворам + по 10кап. дист. воды и наблюдаем флюоресценцию в ультрафиолетовых лучах: лимонная кислота дает голубое свечение, янтарная- зеленое.
Литература:
1. Алдащев А.А. и соавторы. Биохимия человека, Бишкек, 2013. С.141-171.
2. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия. – М.: Дрофа, 2008. стр.239-271
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: «Медицина»,
1990,стр. 177-191, 222-267, 2007,стр. 319-359
4. Николаев А.Я. Биологическая химия.- М., 2004, с. 225-234, 1989, стр.232-299
5. Лекции
Занятие-16 пед- 2017год.
Тема: Глюконеогенез. Пентозофосфатный путь окисления глюкозы -6фосфат.
Лактатный и глюкозоаланиновый циклы. Регуляция и патология углеводного обмена.
1. Пентозо - фосфатный путь окисления глюкозы (реакции окислительной стадии).
Биологическое значение пентозного окисление.
2. Взаимосвязь между процессами гликолиза в мышцах и глюконеогенеза в печени
лактатный и глюкозо – аланиновый циклы, их значение.
3. Регуляция углеводного обмена.
4. Патология углеводного обмена.
5. Контрольная работа по окислению пирувата и ц. Кребса.
Практическая работа:
Качественные реакции на пентозы.
1. Рибозу / дезоксирибозу / - дифениламин с d- рибозой дает синее окрашивание, а с рибозой -
зеленое
Ход раб:10 кап. раствора пентозы + 20 кап раствора орцина и кипятят в водяной бане в
течение 15 мин.- образуется сине- зеленое окрашивание.
2. Реакция с альфа- нафтолом/
Ход раб: к 10 кап. раствора пентозы + 5кап. 0,2% спиртового раствора альфа - нафтола + 20 кап.
H2SO4 конц. (осторожно наслаивать ) – появляется розово-фиолетовое
окрашивание (кольцо)
3. Качественная реакция на молочную кислоту (лактат).
Ход работы: в пробирку внести 10 кап молочной кислоты + 3-4кап. FeCI3 1% +фенола
3-5 кап развивается желто- зеленое окрашивание.
Литература:
1. Алдащев А.А. и соавторы. Биохимия человека, Бишкек, 2013. С.141-171.
2. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия. – М.: Дрофа, 2008. стр.239-271
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: «Медицина»,
1990,стр. 177-191, 222-267, 2007,стр. 319-359
4. Николаев А.Я. Биологическая химия.- М., 2004, с. 225-234, 1989, стр.232-299
5. Лекции
ВОПРОСЫ МОДУЛЯ 2. пед-2016г
1.Механизм действия глюкокортикоидов на углеводный обмен.
2. Схема окислительного декарбокисилирования пирувата.
3.Напишите реакции. Кребса с участием кофермента НАД.
4.Включение фруктозы в гликолиз в мышцах.
5.Конечные продукты аэробного и анаэробного гликолиза, их строение.
6. Спиртовое брожение, реакции образования этанола из пирувата.
7.Схема гликогенолиза.
8.Схема гликолиза.
9.Состав альфа – кетогглутаратдегидрогеназного полиферментного комплекса в процесс ЦТК напишите
реакцию.
10.Биологическое значение анаэробного гликолиза.
11.Роль инсулина в регуляции углеводного обмена.
12.Механизм действия флавиновых ферментов в тканевом дыхании.
13.Схема цикла Кребса, конечные продукты.
14. Этапы аэробного гликолиза, клеточная локализация ферментов.
15. Назовите углеводы пищи ,их биороль.
16.Сахарный диабет, его виды и причины.
17.Кортикостероиды, их классификация, строение и влияние на обмен углеводов, белков, жиров.
18.Напишите реакции окислит стадии пентозного цикла
19.Механизм распада гликогена в печени и мышцах.
20. Строение кофермента ФАД, его биороль.
21. Тропные гормоны гипофиза, их строение и функции, перечислить.
22. Реакции окислит стадии ПФП, конечные продукты. Значение пентозного окисления глюкозы.
23. Организация и функционирование дыхательной цепи.
24. Условия для непрерывного функционирования цикла Кребса, конеч, продукты, их роль.
25. Роль гликогена печени и мышц в организме.
26. Синтез катехоламинов /адреналина, норадреналина/ регуляция секреции.
27. Схема дыхат, цепи начиная с комплекса II
28. Глицерофосфатный челночный механизм, его роль
29.Включение фруктозы в процесс гликолиза в печени. Фруктозурия, ее причины схема.
30. Механизмы всасывания глюкозы в кишечнике, роль АТФ, Na+.
31. Гормональная регуляция углеводного обмена: влияние инсулина.
32. Глюконеогенез его биологическое значение, источник, глюкозы, обходные реакции, ферменты.
33. Ферменты и коферменты пируватденедрогенозного комплекса.
34. Энергетический выход анаэробного гликолиза, его биологическое значение.
35.Особености расщепления гликогена в кишечнике.
36.Гормоны, классификация, по структуре, привести примеры.
37.Напишите реакции цикла Кребса с участием кофермента НАД
38.Полный энергетический эффект окисления глюкозы до СО2 и Н2О в печени
39.Включение галактозы в процесс гликолиза. Роль фермента галл- 1- фосфатуридилтрансферазы. Галактоземия.
40. Ферментативное расщепление лактозы в кишечнике.
41. Глюкоза – лактатный цикл Кори его значение.
42.Половые гормоны, регуляция секреции, биороль, применение в медицине.
43. Схема расщепления мальтозы в кишечнике
44. Энергетический эффект при полном окислении глюкозы в мышцах.
45. Цикл Кребса, роль оксалоацетата, конечные продукты, их связь с тканевым дыханием.
46. Гликогенозы: б-ни Гирке и Мак- Ардля, их причины.
47. Какая энергия непосредственно трансформируется а АТФ.
48.Малатаспартатный челночный механизм, его роль.
49.Гормоны щитовидной железы, их строение и биороль. Гипо – гиперфункции.
50. Строение кофермента НАД, биороль.
51. Схеме расщепления сахарозы в кишечнике.
52. Основные этапы переваривания углеводов в ЖКТ.
53. Механизм всасывания моносахаридов роль Na и АТФ.
54.Механизм окислит декарбоксилирования пирувата.
55.Характериска ферментов и коферментов биологическиого окисления, их клеточная локализация.
56. Механизм действия гормонов, роль специфический белков рецепторов и ц-АМФ.
57.Гормональная регуляция обмена Са и Р.Гипофункция паратгормона,ее причины.
58.Взаимосвязь между процессом гликолиза в мышце и глюконеогенеза в печени глюкоза –аланиновый цикл,его биологическое значение. Цитрохромы: понятие об их строении, механизм действия.
Цитохромоксидазы, роль.
59.Внутриклеточная локализация ферментов гликолиза, регулирующие ферменты гликолиза, их
положительные и отрицательные модулятор.
60.Реакции расщепления крахмалав ЖКТ.
61.Регуляция секреции гормонов: участие ЦНС, консантрации метаболизма в крови и гипоталамус-
гипофизарной системы.
62.Механизм действия кофермента НАД в процессе биологического окисления.
63.Строение кофермента.ТПФ, в каких реакциях участвует.
64.Гипо - гипер и нормогликемии, их величины. Глюкозурия, кетонурия, причины.
65.Ключевые реакции гликолиза, роль фермента гексокиназы, глюкокиназы, фосфофруктокиназы.
66.Гормоны поджелудочной железы, понятие о строении, регуляция секреции и механизм действия на обмен углеводов и жиров.
67.Схема каскадной регуляции распада гликогена. Роль ц - АМФ и фосфорилазы «а»
68.Напишите комплекс ферментов дыхательной цепи сопряженное с фосфорилированием – образование. АТФ.
ЗАНЯТИЕ -17 пед-2017г
Тема: Обмен липидов.
Теоретические вопросы:
1.Классификация и химическое строение липидов, их биологическая роль.
2.ВЖК: стеариновая, пальмитиновая, олеиновая, их строение и функции.
3.Триглицериды /ТГ/: строение трипальмитата, тристеарата и смешанного жира, их функции.
4.Фосфолипиды /ФЛ/: фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, их биороль.
5.Холестерол /ХЛ/ и его эфиры, их биороль в синтезе стероидов и витаминов.
6.Переваривание ТГ, ФЛ, ХЛ в жкт. Механизм всасывания продуктов гидролиза липидов. Образование хиломикронов и транспорт липидов.
7.Внутриклеточный липолиз, роль липопротеидлипазы крови аденилатциклазы и ц- АМФ (схема).
8.Бета - окисление ЖК. Связь с циклом Кребса и тканевым дыханием.
9.Баланс энергии при полном окислении 1 моля пальмитата.
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА.
Кинетика действия липазы.
ХОД работы: 2 табл. панкреатина растирают в ступке 5-6 мин с 5 мл дист. воды, затем в две колбы отмеривают по 50,0 мл прокипяченого молока +50,0 мл дист. воды добавляем в обе колбы по 2 мл раствора фермента, в одну + 3мл желчи, в другую + 3 мл дист. воды и ставят в вод. баню при 400С
В две колбы для титрования отбирают по 10 мл смеси и оттитровывают 0,1 н щелочью с индикатором фенолфталеином по кап. до розовой окраски. Пробы берут через каждые 10 мин, результаты титрования проб вносят в таблицу. Сравнить скорость ферментативной реакции в колбах с желчью и без желчи и сделать вывод.
время инкубирования |
количество 0,1 н щелочи, пошедшей на титрование |
|
|
проба без желчи |
проба с желчью |
0 мин 10 мин 20 мин 30 мин 40 мин |
|
|
В конце опыта на основании полученных данных вычерчивают график, где на оси абсцисс откладывают время в мин., а на оси ординат количество миллилитров.
раствор щелочи
время
в мин.
Выводы.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Алдащев А.А. и соавторы. Биохимия человека, Бишкек, 2013. С. 11-28.
2. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия. – М.: Дрофа, 2008. Стр.4-53
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: «Медицина», 1983 с. 5-76.
4. Лекции
пед-2017г
Занятие – 18
Тема: Биосинтез липидов.
Теоретические вопросы:
1.Пути использования глицерина в тканях:
а) включение в гликолиз – окисление до СО2 и Н2О, АТФ.
б) глюконеогенез – образование глюкозы при голодании.
в) при синтезе эндогенных триглицеридов и фосфоглицеридов.
2.Биосинтез ЖК. Транспорт ацетил - КоА через митохондриальную мембрану. Роль ацилсинтазного
мультиферментного комплекса /НS – АПБ/.
3.Биосинтез триглицеридов. Два пути образования фосфоглицерина:
а) из продуктов глтколиза – фосфодиоксиацетона б) из глицерина. Последовательность реакций синтеза Т.Г
4.Биосинтез фосфолипидов, роль ЦТФ и S-аденозилметионина:
а)синтез фосфатидилэтаноламина;
б) Образование фосфатидилхолина;
в) Образование фосфатидилсерина;
5. Контрольная работа №1 (по обмену липидов)
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА:
1.Определение содержания бета - липопротеинов низкой плотности /ЛПНП/ в сыворотке крови.
ХОД РАБОТЫ: в пробирку вносят 2 мл раствора хлорида Са и 0,2 мл сыворотки крови, определяют оптическую плотность /Е1/ на ФЭКе против 0,27% раствора хлорида Са красный светофильтр, длина волны 630 нм, кюветы на 5 мм /. Раствор из кюветы переливают в пробирку, добавляют микропипеткой 0,04 мл гепарина 1% и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность /Е2/ тех же условиях.
РАСЧЕТ: Х = /Е2-Е1/ х 10
в норме содержание бета – ЛП составляет 3-4,5 г/л
КЛИНИКА– диагностическое значение: содержание бета- ЛП колеблется в зависимости от возраста и пола.
УВЛИЧЕНИЕ набл. при атеросклерозе, гепатите, сахарном диабете, ожирении, гипертонии.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Алдащев А.А. и соавторы. Биохимия человека, Бишкек, 2013. С. 11-28.
2. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия. – М.: Дрофа, 2008. Стр.4-53
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: «Медицина», 1983 с. 5-76.
4. Лекции
пед -2017г.
ЗАНЯТИЕ -19
Тема: Биосинтез липидов /продолжение/.
ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ:
1.Биосинтез холестерина.
а) последовательность реакций до образования мевалоновой кислоты, далее – схема
б) регуляция синтеза холестерина, роль фермента ОМГ- КоА - редуктазы.
2.Метоболизм кетоновых тел, их строение и функции:
а) синтез кетоновых тел, роль бета- окси- бета- метилглутарил –КоА.
б) механизм распада кетоновых тел , использование ацетил –КоА.
3. Обмен липопротеидов и их биороль.
4. Регуляция липидного обмена, роль гормонов: адреналина, инсулина, тироксина,
соматотропина, тестостерона.
5. Патология липидного обмена:
а) нарушение переваривания и всасывания жиров.
б) кетонемия и кетонурия
в) роль ЛПНП в развитии атеросклероза.
г) ожирение
6.Контрольная работа № 2( по синтезу липидов)
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА:
1.Качественные реакции
на ацетон: в пробирку наливают 1 кап мочи +1кап NaOH 10% + 1 кап раствора нитропруссида натрия появляется оранжево- красное окрашивание, если добавить 3 кап лед СН3СООН то появляется вишнево-красное окрашивание.
На ацетоуксусную кислоту: в пробирку наливают 5-10 кап мочи +по каплям
FeCI3 5% и при наличии ацетоуксусной кислоты появляется - красное окрашивание, при стоянии бледнеет.
ЛИТЕРАТУРА:
1.Лекции.
2.Т.Т.Березов,Б.Ф. Коровкин, 1983, с.390-424, 1990,с 298-316, 1998,с 379-406.
3.А.Я.Николаев, 1989, с 270-299, 2004,с 308-324.
Занятие-20 пед-2017 г.
Тема: Переваривание белков в ЖКТ.
Образование ядовитых продуктов распада
АМК и их обезвреживание.
Анализ желудочного сока.
ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ:
1.Роль белков в жизнедеятельности человека, их функции.
2.Полноценные и неполноценные белки, норма белка в питании. Азотистый баланс:
положительный и отрицательный. Резервные белки.
3.Переваривание белков в желудке и кишечнике. Расщепление белков под действием
эндопептидаз и экзопептидаз ЖКТ. Роль HCI в желудке и бикарбонатов панкреатического сока.
4.Механизм активации проферментов- пепсиногена, трипсиногена, химотрипсиногена.
5.Превращение АМК под действием микрофлоры кишечника, Механизм
обезвреживания ядовитых продуктов гниения АМК в печени. Роль УДФ-
глюкуроновой кислоты (УДФГК), 3- фосфоаденозин -5- фосфосульфата (ФАФС) и
глицина.
6.Судьба всосавшихся АМК, пути использования их в организме.
7.Типы дезаминирования аминокислот в тканях.
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА.
1.Количественное определение кислотности желудочного сока:
определить свободную и общую кислотность желудочного сока в одной пробе с
двумя индикаторами.
Ход работы: в колбу отмеривают 5мл желудочного сока + по 2кап. индикатора
парадиметиламиноазобензола +2кап. фенолфталеина, титруют NaOH 0,1н. до
1-го изменения окраски - свободная кислотность (2-3,5мл);
2-е изменение - соломенно- желтое окрашивание (не учитывать).
3-е розовое изменение до окрашивания общая кислотность( 4-6мл).
РАСЧЕТ по формуле: U-обьем
U щелочи х100 У щелочи х100
Хсв.HCI=------------------------ Х общ HCI = -----------------------------
5 5
Результаты внести в таблицу:
пункты титр |
наименование индикатора |
количество NaOH 0,1 н пошедшей на титр 5мл жел.сока. |
окрашивание |
св.HCI в кл.ед. |
общ HCI в кл. ед. |
1.парадиметила миноазобензол 2. не учитывать 3.фенолфталеин. |
|
|
|
|
|
Работу повторить с задачей. Норма кислотности желудочного сока: свободная кислотность =20-40 кл. ед.
Общ. кислотность = 40-60 кл ед; менее 20- гипохлоргидрия, более 60- гиперхлоргидрия, отсутствие
HCI- ахлоргидрия.