Занятие 1 пед фак -17г

Тема: Простые и сложные белки

Теоретические вопросы:

1. Аминокислоты – структурные элементы белков и пептидов. Классификация АМК, их строение.

2. Общие свойства АМК: амфотерность, стереохимия, L и d-изомеры. Заменимые и незаменимые.

3. Функциональная классификация белков, привести примеры.

4. Механизм образования пептидной связи на примере образования трипептида.

5. Природные пептиды, их роль, привести примеры.

6. Электрофореграмма белков сыворотки крови, их фракции и функции.

7.Структурная организация белков: первичная, вторичная, третичная, четвертичная структура. Химические связи, стабилизирующие структуры белков.

8.Молекулярные масса и формы белковых молекул: глобулярные и фибриллярные белки, привести примеры.

Практическая работа:

№	Наименование реакции и употребляемые реактивы.	Исследуемые материалы	Окрашивание	Чем обусловлено
1	Биуретовая реакция: 5капли раствора белка+ 5кап 10% -NaOH + 2кап 1%-CuSO4	Белок, задача	фиолетовое	-СО-NH- Пептидной связью
2	Нингидриновая реакция: 5капли раствора белка+ 5кап 0,5%-нингидрина -2минуты 1000 кип.	Белок, задача	сине-фиолет.	альфа-АМК
3.	Ксантопротеиновая реакция: 5капли раствора белка +3капли HNO3конц - при 1000кип.	Белок, задача	желтое	Ароматич. АМК
4	Реакция Фоля: 5кап. раствора белка+ 5кап.реактива Фоля при 1000 кип.	Белок, задача	черно-бурое	Серосодер.АМК
5.	Реакция на гистидин: 5капли раствора белка+ 5кап10% Na2CO3+ 10кап диазореактива	Белок, задача	оранжево-красное	гистидин

После выполнения работы студентам выдается задачи, и на основании результатов качественных реакций, студенты должны сделать вывод: содержится ли в этой задаче белок или АМК и доказать этот вывод. Если в задаче нет белка, то студент должен доказать на основании чего он сделал этот вывод (сравнения результаты реакций с раствором белка и задачей).

Выводы:

Литература:

1. Лекции

2. Т.Т Березов , Б.Ф Коровкин.

3. А.А Николаев 2004, с 24- 48

4. Махмудова Ж А., Бозумова К.А. «Метаболизм АМК и белков» 2007, с 14-32.

Занятие 2 пед. фак- 17год

Тема: Физико-химические свойства белков. Методы разделения и количественного определения белков.

Теоретические вопросы:

1.Физико-химические свойства белков.

2.Изоэлектрическая точка белков, их определение.

3.Денатурация белков. Ренатурация и тепловая денатурация, их применение.

4.Методы разделения белков: высаливание, электрофорез, ультрацентрифугирование, гель-фильтрация, аффинная хроматография, принципы и их применение в медицине

5.Методы очистки белков. Диализ применение в медицине.

6.Принципы методов количественного определения: рефрактометрический, колориметрический (биуретовая реакция).

7.Контрольная работа по занятиям № 1, 2.

Определение изоэлектрической точки казеина. Работу проводить по схеме. В пяти пронумерованных пробирках готовят буферные растворы с различными значениями рН по схеме, указанной таблице:

Реактивы в мл	Номера пробирок
	1	2	3	4	5
СН3СООН-0,2М	1	2	5	8	9
СН3СООNa-0,2М	9	8	5	2	1
рН буферной смеси	5,7	5,35	4,75	4,15	3,8
Интенсивность помутнения растворов

Растворы в пробирках перемешивают и в каждую пробирку отмеривают по 1мл раствора казеина 0,1%. Содержимое каждой пробирки перемешивают и отмечают в таблице интенсивность помутнения знаком: +++ наиболее сильное, ++ менее сильное, + слабое, - Отсутствие помутнения.

Выводы:

2. Разделение альбуминов и глобулинов яичного белка методом высаливание.

Ход работы: к 20 кап. белка +20 кап. полунасыщенного (50%)раствора (NH₄)₂SO₄- сульфата аммония и перемешивают. Через 5 мин. осадок отфильтровывают фильтровальной бумагой. На фильтр. бумаге остаются глобулины, в фильтрате остается альбумин. Для осаждения альбумина фильтрату добавляют порошок (NH₄)₂SO₄ до полного насыщения. Осадок фильтруют. С фильтратом проделывают биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белка.

Вывод: Полунасыщ(50%)р-ром (NH₄)₂SO₄ выпадают - глобулины, насыщ. р-ром (NH₄)₂SO₄ выпадают – альбумины.

3.Осаждение белка при кипячении.

	исследуемый материал	употребляемые реактивы по 1кап /строго/|	реакции среды	результат. налич. ост
1	р-р белка 1%	-	нейтральная
2	------	СН3СООН 1%	слабокислая
3	------	СН3СООН 10%	сильнокислая
4	-----	СН3 СООН 10% +NaCI насыщ	электролит
5	----	NaOH 10%	щелочная

Выводы:

4.Осаждения белков солями тяжелых металлов

а) CuSO4 -10% б) Pь(CH₃COOH)₂-5%

Выводы:

Литература:

1. Лекции Т.Т Березов, Б.Ф Коровкин. 1998, с.19- А.А Николаев, 2Махмудова Ж.А., Бозумова А К. «Метаболизм АМК и белков» 2007,с.14- 32.

Занятие 3 ПЕД-2017г

Тема: Классификация простых и сложных белков, их строение и биологические функции.

Теоретические вопросы:

1. Классификация простых белков. Протамины, гистоны, проламины, глютелины.

2. Электрофореграмма белков сыворотки крови, их фракции и функции

3. Протеинемия (гипо-, гипер-), их причины.

4. Классификация сложных белков. Хромопротеины их строение и биороль.

5. Гемопротеины, их виды и функции. Нормальные виды гемоглобина: НbА, НbА₂, НbF их строение и свойства.

6. Производные гемоглобина: нормальны HbO₂, HbCO₂, патологические: HbCO, HbOH (метгемоглобин) причины образования и свойства.

7. Аномальные гемоглобины: HbS, HbH. Гемоглобинозы: гемоглобинопатии и талассемии,

их причины и нарушения.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА:

1. Количественное определение кон-ции белка биуретовым методом.

Принцип метода: белки реагируют в щелочной среде с серно-кислой медью с образованием комплекса, окрашенного в фиолетовый цвет (биуретовая реакция). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации белка. РАСЧЕТ ведут по калибровочному графику.

Ход работы:

а) ПОСТРОЕНИЕ калибровочного графика: от исходного р-ра 10% белка готовят рабочие растворы согласно таблице:

№	стандартный 10 % раствор белка в мл	0,9% р-р NaCl в мл	раб. р-ры конц белка в %	Экстинкция (оптическая плотность) Е
1	0,2	0,8	2
2	0,5	0,5	5
3	0,8	0,2	8

Из каждого рабочего раствора берут по 0,2 мл в другие три пробирки и прибавляют по 5 мл биуретовой раствора из бюретки. Через 15 мин измеряют на ФЭКе против контрольного раствора.

Приготовление контрольного раствора: 0,2 мл 0,9% NaCl + 5 мл биуретового раствора.

По полученным данным строят калибровочный график, откладывая на оси абцисс концентрацию белка, а на оси ординат – экстинцию Е (оптическая плотность).

б) Приготовление опытного раствора.

ХОД работы: 0.2мл сыворотке крови+5мл биуретового раствора, смешивают, избегая образования пены. Через 15 мин измеряют экстинкцию на ФЭКе (зеленый светофильтр, длина волны540-560нм, кюветы на 1мл) против контрольного расвора. Пользуясь калибровочным графиком по экстинкции определяют концентрацию белка в сыворотке и записывают результаты.

Выводы: