5. Определение протеолитической активности.

Протеолитическая активность бактерий определяется их способностью разжижать желатину, свернутую сыворотку крови, образовывать при расщеплении белков индол, сероводород, аммиак.

6. Определение сахаролитической активности. Сахаролитические свойства бактерий выявляются в способности ферментировать углеводы с образованием различных кислых продуктов и газообразных веществ. Для этого используют короткий и длинный «пёстрый» ряд. Первый включает в себя среды Гиса с моно-дисахаридами (глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой) и с шестиатомным спиртом – маннитом. В длинный «пёстрый» ряд вводят дополнительно среды с моносахаридами, полисахаридами и спиртами. В качестве индикатора во все среды добавляют реактив Андраде (щелочной раствор кислого фуксина).

Чистую культуру исследуемых бактерий засевают на среды «пёстрого» ряда. Если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды; при разложении углевода до кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляются пузырьки газа. При отсутствии ферментации цвет среды не меняется.

7. Определение антиоксидантной активности.

Антиоксидантная активность бактерий заключается в способности разлагать активные формы кислорода, секретируемые активированными макрофагами. Основную роль играют: фермент каталаза (разлагающий перекись водорода) и супероксиддисмутаза (разрушающая супероксиданион радикал).

8.Постановка метода Бухнера.

На поверхность агара в чашке Петри налить 1 мл бульонной культуры, равномерно распределить по поверхности, остаток удалить пипеткой. Кружочки стерильной бумаги поместить на поверхность агара и осветить открытую чашку прямыми солнечными лучами в течение 1–2 часов, после чего чашку закрыть крышкой и поставить в термостат.

9.Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Метод дисков

На поверхность агара в чашке Петри вылить 1 мл взвеси бактерий и распределить её по поверхности. Остаток культуры убрать пипеткой. После высыхания поверхности чашки на её сектора нанести пинцетом диски с антибиотиками. Выдержать чашки в течение 30 минут, после чего поместить в термостат.

Метод разведений

Взять два ряда пробирок: 1 ряд –7 пробирок по 1 мл физиологического раствора; 2 ряд –8 пробирок по 2 мл бульона. В первую пробирку первого ряда внести 1 мл пенициллина, содержащий 160 единиц. Содержимое пробирки перемешать и 1 мл перенести во вторую пробирку. Из второй пробирки 1 мл перенести в третью и т.д. Таким образом, в пробирках будет 80, 40, 20, 10, 5 единиц и т. д. пенициллина в 1 мл физ. р-ра.

В каждую пробирку второго ряда (кроме восьмой) внести по 0,2 мл разведения пенициллина из соответствующей пробирки первого ряда. Получаем разведения пенициллина – 8, 4, 2, 1 и т.д. в 1 мл бульона. В каждую пробирку засеять одну петлю суточной бульонной культуры испытуемого микроба.

Результат учитывается через сутки пребывания пробирок в термостате. Отметить наименьшую концентрацию антибиотика (наибольшее его разведение), при которой отсутствует рост микроба (бактерицидная концентрация), а также ту концентрацию при которой лишь наблюдается задержка роста культуры (бактериостатическая концентрация) по сравнению с контрольной восьмой пробиркой.