- •Тема № 1 Правила работы и техники безопасности на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии
- •Устройство бактериологической лаборатории
- •Оборудование бактериологической лаборатории
- •Взятие и пересылка исследуемого материала для проведения бактериологического исследования
- •Методы диагностики инфекционных болезней рыб
- •Методы лабораторных исследований
- •Устройство биологического светового микроскопа и правила работы с ним
- •Порядок работы с иммерсионной системой
- •Тема № 2 Приготовление прижизненных препаратов
- •Определение подвижности у микробов
- •Прижизненная окраска микробов
- •Жгутики и механизмы движения
- •Контрольные вопросы:
- •Тема№3 Изучение микроорганизмов в окрашенных, фиксированных мазках
- •Методы фиксации мазков
- •Приготовление красящих растворов
- •Морфология микроорганизмов
- •Многоклеточные бактерии
- •II. Величина микроорганизмов.
- •IV. Особенности внутренней структуры.
- •V. Подвижность микроорганизмов.
- •Тема № 4 Простые и сложные методы окраски
- •Окраска мазков по Граму
- •Окраска кислото-спирто-щелочеустойчивых микроорганизмов
- •Люминесцентная микроскопия
Многоклеточные бактерии
Многоклеточный организм должен отвечать следующим условиям:
его клетки должны быть агрегированы, между клетками должно осуществляться разделение функций, между агрегированными клетками должны устанавливаться устойчивые специфические контакты.
Многоклеточность у прокариот известна, наиболее высокоорганизованные многоклеточные организмы принадлежат к группам цианобактерий и актиномицетов. У нитчатых цианобактерий описаны структуры в клеточной стенке, обеспечивающие контакт двух соседних клеток — микроплазмодесмы. Доказана возможность обмена между клетками веществом (красителем) и энергией (электрической составляющей трансмембранного потенциала). Некоторые из нитчатых цианобактерий содержат помимо обычных вегетативных клеток функционально дифференцированные: акинеты и гетероцисты. Гетероцисты осуществляют фиксацию азота и интенсивно обмениваются метаболитами с вегетативными клетками.
II. Величина микроорганизмов.
Величину измеряют в микрометрах. Размеры микробов могут колебаться в значительных пределах от 150 мкм (гиганты) – кристиспиры (свободно живущие в сточных водах и открытых водоемах), 10-12 мкм - крупные (лептоспиры, клостридии), 2-3 мкм - средние (молочнокислые бактерии) и до 0,5 мкм - мелкие (бруцеллы).
III. Взаимное расположение микроорганизмов в мазке может быть:
а) беспорядочное, “россыпью” - микрококки, сальмонеллы;
б) кучками, скоплениями – микобактерии туберкулеза;
в) в виде частокола ( ///// ) - листерии, возбудитель псевдотуберкулеза;
г) в виде римской цифры V - листерии;
д) в виде “летящей чайки” ~~ кампилобактерии;
е) цепочками, длинными нитями – стрептококки, железобактерии.
ж) нитчатые совбодноживущие бактерии могут быть объединены в трихомы (см.выше).
IV. Особенности внутренней структуры.
У некоторых микробов может отмечаться наличие биполярности, спор, капсул.
V. Подвижность микроорганизмов.
Движение микроорганизмов чаще происходит благодаря наличию жгутиков, которые представляют собой тончайшие извитые нити, отходящие от тела бактерий. Однако существуют и другие механизмы подвижности.
Контрольные вопросы:
1. Красители, применяемые в бактериологической практике.
2. Принцип приготовления спиртовых, спиртово-водных и водных растворов красок.
3. Основные морфологические признаки микроорганизмов.
4. Механизмы движения. Таксис.
Тема № 4 Простые и сложные методы окраски
При простых методах окраски применяют только один краситель, чаще всего фуксин Пфейфера, метиленовый синий. Раствор красителя наносят на препарат и выдерживают 2-3 минуты, затем краску смывают водой, препарат высушивают фильтровальной бумагой и рассматривают под иммерсионным объективом микроскопа. Простая окраска позволяет обнаружить в материале бактерии, быстро определить их морфологию и иметь представление о разнообразии видов.
Сложные методы окраски основаны на физико-химических различиях состава микробных клеток, их применяют для дифференциации (отличия) одних бактерий от других. Сущность этих методов заключается в последовательном воздействии на мазок двух красящих растворов, из которых один является основным, другой - контрастным. Кроме красящих растворов, применяют различные обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты. В результате разные виды микробов или отдельные структуры внутри микробной клетки окрашиваются в контрастные и разные цвета.
Окрашенные препараты имеют следующие преимущества:
а) они не опасны, т.к. все манипуляции проводят с фиксированным (обезвреженным) материалом;
б) в них легко различимы отдельные детали структуры микробной клетки, не выявляющиеся в неокрашенном препарате;
в) могут хорошо храниться длительное время и, следовательно, являются доказательством проведенных исследований, кроме того, их можно использовать для учебных целей;
К недостаткам окрашенных препаратов следует отнести:
а) невозможность изучения физиологии микробов (подвижность, характер деления и т.д.)
б) деформацию микробных клеток после фиксации физическим методом и воздействия красящих растворов.
