Культуральные свойства возбудителя дифтерии

Наиболее характерные колонии на среде Клауберга II с добавлением теллурита калия или натрия (элективная среда для выращивания С. diphtheriae). Они вырастают в виде почти черных колоний, выделяющихся на красном фоне среды. Цвет колоний обусловлен способностью С. diphtheriae в процессе роста восстанавливать теллуристый калий до элементарного теллура.

Микробы дифтерии не являются однородными по своим культурально - биохимическим свойствам и подразделяются на биовары gravis, mitis и intermedius. На среде Клауберга II через 48 часов бактерии биовара gravis вырастают в виде круглых (d 1,5- 2 мм) колоний с неровными краями, часто имеют приподнятый центр и радиальную исчерченность. Колонии серовато-черного цвета, напоминают маргаритки. Вариант mitis дает круглые выпуклые колонии черного цвета (d 1- 1,5 мм) с ровными краями. Вариант intermedius занимает промежуточное положение. Дает черные выпуклые с блестящей поверхностью колонии.

к работе № 3

Дифференциация коринебактерий

С. Diphtheria дифференцируют от дифтероидов по морфологическим свойствам, ферментации углеводов, способности продуцировать цистиназу и уреазу, токсигенности и антигенным признакам.

Способность бактерий продуцировать токсин устанавливают в реакции преципитации в агаре. Для этого в чашку Петри с питательным агаром, содержащим 15-20% лошадиной сыворотки, 0,3% мальтозы и 0,03% цистина, помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой. Исследуемые культуры подсевают в виде перпендикулярных к бумажке штрихов на расстоянии 0,6-0,8 см. Посевы инкубируют при 37⁰С 24 часа. Если культуры токсигенны, то в месте соединения токсина с антитоксином в агаре образуется преципитат в виде белых линий.

Для определения цистиназы (проба Пизу) в столбик агара с цистином и ацетатом свинца уколом засевают исследуемую культуру. Посевы инкубируют при 37⁰С 24 часа. Истинные дифтерийные палочки вызывают почернение по ходу укола, вокруг которого появляется зона коричневого цвета. В результате расщепления цистина ферментом цистиназой выделяется свободная сера, которая вступает в реакцию с ацетатом свинца, образуя сульфид свинца черного цвета.

Для определения уреазы (проба Закса) используют среду с мочевиной и индикатором – феноловым красным. Исследуемую культуру петлей растирают по стенке пробирки со средой, инкубируют 20-30 мин при 37⁰С. Истинные дифтерийные палочки не имеют фермента уреазы, поэтому цвет среды не изменится. Другие коринебактерии выделяют уреазу, которая расщепляет мочевину, рН среды меняется, и среда приобретает красный цвет.

Проводится реакция агглютинации с агглютинирующей дифтерийной сывороткой.

к работе № 4

Серодиагностика дифтерии

Антитела к С. diphtheriae определяют в крови больных, начиная с первых дней болезни и повторно через 10-14 дней. Обязательным условием является определение специфических антител в динамике болезни в парных сыворотках. Диагностическое значение имеют результаты серологических исследований при нарастании титра антител не менее чем в 3-4 раза.

Для определения уровня дифтерийного антитоксина в сыворотке человека применяют несколько реакций: