8. Семейный амилоидоз, влияние генетических факторов на развитие. Роль генетического анализа в диагностике af.

Семейный амилоидоз – патологическое состояние, которое характеризуется выпадением амилоидных отложений в тканях организма, связанное с генетической патологией.

До внедрения в практику методов генетической диагностики и установления причин патологии регистрировались схожие случаи амилоидоза, не имеющие четкой систематики. В результате такого процесса в клинику внедрились понятия: «португальский тип амилоидоза», «японские случаи амилоидоза», «английский амилоидоз», «датский амилоидоз» и др.

В дальнейшем с накоплением случаев амилоидоза в разных странах, предположительно носящих наследственный характер, была сформирована клиническая классификация наследственных патологий, связанных с отложение амилоида в тканях:

• Тип I (ANDRARE)

• Тип II (RUVINA)

• Тип III (VAN ALLEN)

• Тип IV (MERETOJA)

Однако такая классификация наследственных амилоидозов столкнулась с двумя существенными проблемами – невозможностью классифицировать отдельные случаи патологии и непригодностью ее для патоморфологов вследствие ее основания только на клинических симптомах.

В настоящее время с развитием генетического анализа была сформирована классификация амилоидоза, основанная на определении гена, вовлеченного в развитии того или иного вида патологии:

• AF, ассоциированный с геном транстеритина (TTR-ген)

• AF, ассоциированный с геном аполипопротеина А-I (AApoAI-ген)

• AF, ассоциированный с геном аполипопротеина А-II (AApoAII-ген)

• AF, ассоциированный с геном гельзолина (Agel-ген)

• AF, ассоциированный с геном фибриногена (AFIB-ген)

• AF, ассоциированный с геном лизоцима (Alys-ген)

Такой подход к классификации амилоидной патологии дает возможность четко отграничить один случай амилоидоза от другого и существенно упрощает диагностику заболевания, что соответственно ведет к назначению рационального лечения.

Наиболее часто семейный амилоидоз, связан с нарушением в гене TTR, расположенном в 18 хромосоме и состоящем из 4 экзонов. Этот ген отвечает за синтез транстиренина, который отвечает за транспорт тироксина и ретинола. Точный патогенез развития заболевания в настоящий момент не установлен. Однако имеется предположительная схема развития заболевания:

Повреждение гена TTR (в настоящее время выявлено больше 80 видов повреждений) →синтез аномального TTR-белка→ формирование амилоидных фибрилл

В результате замены одного нуклеотида в гене TTR (кроме мутации Vall22 – деление целого кодона) наблюдается синтез аномального TTR-белка, который обнаруживается в составе фибрилл амилоида.

Случаи амилоидоза, ассоциированного с другими мутациями (мутации в генах AApoAI, AApoAII и др.) имеют ограниченное количество.

9. Диагностика амилоидоза. Принцип окраски конго рот. Понятие о «классическом» и ахроматичном амилоиде. Другие методы диагностики.

Для диагностики амилоидоза в практической медицине используют окраску препаратов азокрасителем конго рот (красный), а так же их исследование в поляризационном свете.

Конго рот, являясь азокрасителем, реализует свой окрашивающий эффект, благодаря взаимодействию с аминокислотами в белковых молекулах, в частности с тирозином:

Совершенно ясно, что интенсивность окрашивания таким красителем зависит от аминокислотного состава белковой молекулы, чем больше концентрация аминокислот, способных взаимодействовать с азокрасителями, тем интенсивнее окраска. При пониженном содержании тирозина в отложениях окраска может вовсе не проявляться. Сам же аминокислотный состав белков, входящих в амилоидные отложения, можно определить путем использования электрофореза, гель-фильтрации с последующим проведением бумажной хроматографии.

Для более точного морфологического исследования амилоидной патологии возможно применение трех стандартных реакций, определяющих амилоидные отложения:

• Реакция с йодом и йодом; серной кислотой – при обработке люголевским раствором йода ткани амилоидные отложения приобретают красно-бурый цвет; при дальнейшем воздействии 10% раствором серной кислоты на препарат отложения становятся синими, а в последующем грязно-зелеными.

• Реакция с метилвиолетом и генцианвиолетом – при обработки тканей данными красителями амилоидные отложения приобретают красный цвет на розовом фоне.

• Реакция с йодгрюном – амилоид окрашивается в красный цвет, а подлежащие ткани в зеленый.

В редких случая результаты реакций не совпадают из-за непостоянного химического состава амилоида, в таких случаях говорят о ахроматичных амилоидных отложениях.

Особенности связывания некоторых белковых молекул красителя конго рот послужили разработки реакции с раствором перманганата калия для отличия разных форм амилоидоза. Так амилоидные отложения при реактивном амилоидозе и DRA удерживают непрочно молекулы красителя, в результате чего происходит их обесцвечивание при обработке KMnO4. При других формах патологии такого эффекта не наблюдается.

Одним из передовых методов диагностики амилоидоза служит исследование препаратов в поляризационном свете. При «классическом» варианте амилоидоза отложения амилоида приобретают яблочный цвет. Однако в ограниченных случаях этого не наблюдается.

Такое отсутствие света связывают с конформацией белков амилоида и прохождением луча света. В «классическом» варианте конформация белковых молекул, входящих в состав амилоидных фибрилл , дают возможность красителю ложиться параллельно оси фибриллы, следовательно возможность прохождения через него луча света. При изменении конформации амилоидных белков и самого F-компонента молекулы красителя не располагаются параллельно оси фибриллы и прохождение луча света становится невозможным, следовательно, зеленое свечение не наблюдается. Именно этот процесс не позволяет исследовать большое количество фибриллярных белков по такой методике, например эластин.