Определение группы крови
Определение группы крови по системе АВ0 заключается в выявлении антигенов (агглютиногенов) А и В, находящихся в эритроцитах, стандартными антителами. В качестве последних в настоящее время используются цоликлоны анти-А и анти-В.
Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины, направленные против группоспецифических антигенов А и В человека. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов человека.
Цоликлоны анти-А и анти-В в жидкой форме выпускаются во флаконах или в ампулах и имеют соответствующую окраску: анти-А – розовую, анти-В – синюю. В каждой ампуле содержится от 20 до 200 доз. Срок хранения цоликлонов 2 года при температуре от +2 до +8° С.
Реакция агглютинации и ее выраженность при соединении антигенов А и В с цоликлонами анти-А и анти-В наступает очень быстро.
Для того чтобы определить группу крови больного (или донора), необходимо иметь: 1) цоликлоны анти-А и анти-В, разлитые в специальные флаконы-пипетки; 2) белую тарелку или специальную плоскость; 3) стеклянные палочки или предметные стекла; 4) спирт; 6) иглу Франка (рис.20).
Готовя набор для определения группы крови, необходимо обратить внимание на следующие моменты. Прежде всего надо проверить срок годности используемых цоликлонов и установить их серию. Цоликлоны, срок годности которых истек, и не имеющие серийной принадлежности для определения группы крови использоваться не должны.
Плоскость, на которой будет производиться смешивание эритроцитов исследуемой крови с цоликлонами, должна быть тщательно вымыта, высушена и также промаркирована. Это позволит избежать ошибки при определении группы крови.
Помещение, где проводится определение группы крови, должно иметь хорошее освещение и температуру от +15 до +25° С.
Техника определения группы крови сводится к следующему.
В каждую часть тарелки наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлона анти-А и анти-В (соответственно маркировке частей тарелки). Рядом с каплями цоликлонов помещают каплю исследуемой крови (кровь берут из пальца после прокола кожи или из ампулы) (рис.21). Капля крови по
объему должна быть в 10 раз меньше капли цоликлона. С помощью чистой и сухой стеклянной палочки или уголка предметного стекла смешивают каплю крови с каплей цоликлона и наблюдают за ходом реакции в течение 2-2,5 мин.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается агглютинацией (склеиванием) эритроцитов, содержащих соответствующий агглютиноген (А или В), с антителом определенного цоликлона (анти-А или анти-В). Группа исследуемой крови будет соответствовать полученному результату в каждой капле цоликлона (рис. 22).
Если реакция агглютинации произошла с обоими цоликлонами (исследуемая кровь принадлежит IV группе), необходимо провести контрольное исследование данной крови с изотоническим раствором поваренной соли. Для этого большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора поваренной соли смешивают с маленькой каплей крови. Отсутствие при этом реакции агглютинации подтверждает, что исследуемая кровь относится к IV группе. При наличии во время контроля спонтанной агглютинации надо провести определение группы исследуемой крови по стандартным сывороткам, содержащим известный набор - и -агглютининов.
В составе цоликлонов отсутствуют высокомолекулярные добавки, способные вызывать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов. Поэтому нет необходимости проводить контроль с растворителем.
Результаты манипуляции по определению группы крови оформляются протоколом определения группы крови (рис.23). Данный протокол вклеивается в историю болезни больного и является документом, позволяющим в дальнейшем выявить причину ошибочного определения групповой принадлежности исследуемой крови.
