- •Глава 1 Обзор и анализ литературных источников 7
- •Глава 2 Объекты и методы исследования 23
- •Глава 3 Экспериментальные данные и их анализ 35
- •Глава 4 Экономическое обоснование 41
- •Глава 1 Обзор и анализ литературных источников
- •Характеристика и способы получения покрытия
- •Бактерицидные покрытия
- •Бактерицидные свойства тяжелых металлов
- •Влияние тяжелых металлов на микроорганизмы
- •Ингибирование роста культур микроорганизмов
- •Физиолого-биохимические параметры микроорганизмов при действии металлов
- •Влияние тяжелых металлов на энергетические и биосинтетические процессы
- •1.4 Предельно допустимые концентрации для тяжелых металлов
- •1.4.1 Санитарно-гигиеническая характеристика тяжелых металлов
- •Глава 2 Объекты и методы исследования
- •2.1 Объекты исследования
- •2.2 Используемые материалы и реактивы
- •2.3 Метод получения бактерицидного покрытия
- •2.4 Определение бактерицидной активности чашечным методом
- •Методы стерилизации
- •Приготовление сред и растворов
- •2.4.3 Тестирование на бактерицидные свойства
- •Смыв исследуемых посаженных бактерий
- •2.5 Определение фунгицидной активности чашечным методом
- •Глава 3 Экспериментальные данные и их анализ
- •3.1 Выбор состава для нанесения покрытия и его методики напыления
- •3.2 Фунгицидные свойства покрытий на примере Mucor Mucedo
- •3.3 Бактерицидная активность по отношению к Escherichia coli
- •Глава 4 Экономическое обоснование
2.4.3 Тестирование на бактерицидные свойства
Бактерии должны быть обработаны в стерильных условиях, и внимание должно быть обращено на загрязнение тестирующего персонала, аппарата и рабочей среды с бактериями. Ламинар бокс должен использоваться при необходимости.
Предварительная инкубация бактерий. Используя платиновую петлю, перенесите одну платиновую петлю с бактериями на скошенную питательную среду из 2.4.2.6 и культивируйте при температуре (35±1) °C в течение 16-24 ч. Далее, из этого посадочного материала, перенесите одну платиновую петлю с бактериями в новую скошенную питательную среду и культивируйте при температуре (35± 1) °C в течение 16-20 ч.
Подготовка опытного образца. Подготавливайте 6 частей необработанных опытных образцов и 3 антибактериальных опытных образцов. Все используемые в опытах чашки Петри заворачивайте в два слоя бумаги и стерилизуйте в сушильном шкафу при температуре 180°С один час. Остывшие опытные образцы разворачивайте в стерильных условиях в ламинар боксе.
Подготовка испытательного посадочного материала. Растворите питательный бульон из 2.4.2.1 в очищенной воде к 500-кратному объему, отрегулируйте pH к значению 6,8-7,2 раствором гидроокиси натрия или раствором соляной кислоты, стерилизуйте паром высокого давления и используйте его в качестве 1/500 NB. Размешайте одну платиновую петлю испытательных бактерий, предварительно выведенных в пункте 1 в небольшом количестве 1/500 NB равномерно, и оцените число бактерий прямым микроскопическим наблюдением или другим соответствующим методом. Разбавьте этот посадочный материал 1/500 NB так, чтобы число бактерий соответствовало 2,5-10∙105 клеток/мл, и используйте это разведение в качестве испытательного посадочного материала. Если испытательный посадочный материал сразу не используется, то охладите его на льду (0 °C) и используйте его в течение 4 ч после начала хранения.
Инокуляция исследуемого посадочного материала. Поместите каждый опытный образец в стерильную чашку Петри, исследуемой поверхностью вверх. Возьмите точно 0.4 мл испытательного посадочного материала пипеткой и прилейте его на каждый опытный образец в чашке Петри.
Инкубация опытного образца посаженным инокулятом. Культивируйте чашку Петри, содержащую опытный образец, зараженный испытательным посадочным материалом (3 необработанных опытных образца и 3 антибактериальных опытных образца) при температуре (35±1) °C и относительной влажностью не меньше чем 90 % в течение 24±1 ч.
Смыв исследуемых посаженных бактерий
Смыв с опытного образца сразу после нанесения испытательного посадочного материала
Для 3 необработанных опытных образцов сразу после нанесения испытательного посадочного материала. Добавьте 10 мл бульона SCDLP из 2.1.2.4 пипеткой в чашку Петри. Сразу считаем жизнеспособные бактерии в смывах.
Смыв с опытного образца после инкубации
Для опытного образца после инкубации смойте испытательные бактерии как в 2.4.3.1. Продолжайте считать жизнеспособные клетки бактерий в смывах.
Жизнеспособное количество клеток бактерий агаровым чашечным методом культивирования
Возьмите точно 1 мл смыва из 2.4.3.2 пипеткой и поместите его в пробирку, содержащую 9,0 мл физиологического раствора с буфером фосфата из 2.4.2.4, и смешайте его хорошо. После этого возьмите новой пипеткой 1 мл из этой пробирки и поместите, его в другую пробирку, содержащей 9,0 мл физиологического раствора с буфером фосфата, и смешайте его хорошо. Повторите эти процедуры, чтобы подготовить 10-кратные последовательные разбавления. Распределите 1 мл каждого смыва и каждого его растворения в 2 стерильные чашки Петри. К каждой чашке Петри добавьте от 15 мл до 20 мл агара для определения количества бактерий посевом из 2.4.2.3, нагретого до 46- 48 °C, и хорошо его размешайте. Поместите крышки на чашки Петри и позвольте им стоять при комнатной температуре. После укрепления питательной среды переверните чашки Петри и инкубируйте их в температуре (35±1) °C в течение 40-48 ч. После инкубации, подсчитайте количество колоний в последовательно разбавленных чашках Петри, в которых появляются 30- 300 колоний. Если нет никаких формирований колонии ни в какой агаровой пластине, то делают запись «<1». Далее, если количество колоний не обратно пропорционально к степени разбавления, считается, что формирование колоний сдерживается эффектами бактерицидной добавки, затем определите количество жизнеспособных клеток бактерий, используя метод, который образует колонии.