Тема 2. Питательные среды. Приготовление питательных сред. Требования, предъявляемые к ним.

2.1. Питательные среды для разных групп микроорганизмов. По консистенции различают :

Жидкие: используются для изучения физико-биохимических особенностей микроорг., для хранения, накопления биомассы, для микробов которые плохо развиваются на плотных питательных средах. МПБ

Полужидкие: обычно используют для хранения культур. 0,5 -0,7% агара-агара.

Плотные: используют для выделения чистых культур, изучения морфологии, диагностики, хранения, количественного учета.

Плотные питательные среды готовят из; жидких посредством прибавления к ним клеевых вещество агара или желатина. Агар-агар (по малайски – желе)—про­дукт растительного происхождения, добываемый из морских водорослей. В воде агар-агар растворяется при температуре 80—86°С, застудневает при 36—40°С. Применение агаровых сред благодаря их способности сохранять плотность при тем­пературе 37°С дало возможность выращивать патогенных микробов при оптимальной для большинства из них темпера­туре на плотных средах.

По составу питательные среды для культивирования микроорганизмов делятся на

- натуральные (естественные) среды состоят из продуктов растительного и животного происхождения и имеют неопределенный химический состав. К таким средам относят овощные и фруктовые соки, животные ткани, молоко, яйца, желчь, сыворотка крови, отвары экстракты.

Недостаток: непостоянный химический состав, что не позволяет учитывать потребление

Используют для накопления и хранения микроорганизмов.

МПБ, МПА, Желточная или молочная среда , кровяной агар.

- полусинтетические среды (вещество с известной хим. природ. + в-во неопред. состава.)

МПБ+ глюкоза, ЭНДО, Сабуро, среда химич.прир + органическое в-во.

-синтетические содержат чистые хим. в-ва в указанных пропорциях. Для экспериментального изучения метаболизма.

По назначению среды подразделяются: на среды общего назначения (универсальные) и специальные.

К средам общего назначения отно­сятся мясо-пептонные: агар, бульон, питательный желатин. Среды общего назначения используют для выращивания мно­гих патогенных микробов и применяют в качестве основы для приготовления обогащенных сред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко, сыворотку и другие ингредиенты, необходи­мые для размножения того или иного вида микроба.

К специальным питательным средам относятся (предлож. Виноградским):

Элективные (избирательные) среды. Эти среды обеспечивают преимущество развития одного вида или группы микроорганизмов. Избирательность достигается путем создания оптимальных условий (РН, Еh, состава солей и пит. в-в.)-положит. селекция. Либо добавлением в среду веществ (ингибиторов) угнетающих рост других микроорг. (желчь, азид, теллурит, антибиотики)-отриц.селекция. При посеве на них материала, содержащего смесь раз­личных микроорганизмов, раньше всего будет проявлять­ся рост того вида, для которого данная среда будет электив­ной.

Молочно-солевой агар-стафилококки, Среда Шустовой, Мюллера, Кауфмана- для сальманелл, Казеино угольный агар-бордетелл

Дифференциально-диагностические (индикаторные) питательные среды применяются для изучения биохимических свойств и дифференцировки одного вида (рода) от другого по характеру их ферментативной активности (особенностях его обмена веществ). По своему назначению дифференциально-диагности­ческие питательные среды подразделяются следующим об­разом:

• Среды для выявления протеолитической и гемолитической способности микробов, содержащие в своем составе бел­ковые вещества: кровь, молоко, желатин, свернутую кровя­ную сыворотку и т. д.

• Среды с индифферентными химическими веществами, которые служат источником питания для одних видов микро­бов и не усваиваются другими видами.

• Среды с углеводами и многоатомными спиртами для обнаружения соответствующих ферментов.

• Среды для определения редуцирующей способности микробов.

В состав дифференциально-диагностических сред, пред­назначенных для выявления сахаролитических и окислитель­но-восстановительных ферментов, помимо ингибиторов, вводят индикаторы: ней­тральную красную, метиленовый синий, лакмусовую настой­ку, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой краситель и розоловую кислоту. Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на нали­чие или отсутствие расщепления, окисления или восстанов­ления введенного в среду ингредиента. Однако индикатор не является обязательной составной частью сред, предназначен­ных для выявления ферментов. Так, наличие желатиназы и других протеолитических ферментов в культуре определяют по разжижению желатина, свернутого яичного или сыворо­точного белка.

Среды Гиса, Среда Эндо, Левина, Плоскирева

Среды накопления (обогащения) – применяются для подращивания микроорганизмов находящихся в продукте в незначительном количестве. Селенитовая среда Лейфсона, среда Мюллера для сальмонелл, бульон Фрейзера для выделения листерий.

2.2. Приготовление питательных сред. Стерилизация питательных сред. Требования, предъявляемые к ним.

Тема 3. Техника посева микроорганизмов на плотные жидкие и полужидкие питательные среды. Методы получения чистой культуры микроорганизмов.

3.1.Техника посева микроорганизмов на плотные жидкие и полужидкие питательные среды.

3.2.Методы получения чистой культур микроорганизмов- аэробов и анаэробов.

Тема 4. Микроскопические методы исследования микроорганизмов.

4.1. Определение тинкториальных свойств и органоидов микробной клетки.

4.2.Определение подвижности.

Тема 5. Антибиотики, методы определения антибиотикорезистентности микроорганизмов.

5.1. Метод серийных разведений в жидких и плотных питательных средах.

5.2. Ускоренные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

5.3. Определение концентрации антибиотиков в жидкостях и тканях организма.

Тема 6. Определение активного хлора в хлорных препаратах. Приготовление дезинфицирующих растворов из хлорных препаратов.