Практическое занятие № 2. Тема: патогенные диплококки. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых патогенными стрептококками и нейссериями.

СДАЧА МОДУЛЯ ПО ТЕМЕ: «ПАТОГЕННЫЕ КОККИ»

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:

1. Изучить морфологические и культуральные свойства патогенных грамположительных и грамотрицательных стрепто- и диплококков (нейссерий).

2. Освоить основные методы лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых патогенными диплококками.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1.Морфологические, культуральные и биохимические признаки диплококков;

2.Факторы патогенности, антигенную структуру;

3.Чувствительность к антибиотикам;

4.Основные методы исследования: бактериоскопический, бактериологический, серологический, биопробы, экспресс-диагностик;

5.Профилактика и лечение гонококковых инфекций.

Студент должен уметь:

1.Световая микроскопия препаратов из чистых культур менингококков, гонококков, пневмококков, окраску по Граму.

2.Проведение бактериологического исследования: спинномозговой жидкости на подозрение менингококковой инфекции; слизи из верхних дыхательных путей больного на пневмонию; отделяемое с уретры на гонорею (по схеме).

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Морфологическая характеристика пневмококка (Streptococcus pneumoniae), менингококка, гонококка.

2. Сравнительная характеристика биохимической активности и потребности в питательных средах для диплококков разных видов.

3. Дифференциально-диагностические признаки (отличия) патогенных и непатогенных нейссерий.

4. Факторы вирулентности патогенных диплококков.

5. Источник инфекции, пути передачи, входные ворота при заболеваниях, вызванных диплококками.

6. Исследуемый материал и основные методы диагностики при патологических процессах, вызываемых диплококками.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

1. Изучение морфологии пневмококков (Str. pneumoniae) в мазках- отпечатках из органов белой мыши, зараженной внутрибрюшинной мокротой больного пневмонией. Окраска по Граму (таблица).

2. Изучение биохимической активности пневмококков с целью дифференциации их от стрептококков. Посев на среды с инулином и желчью.

3. Микроскопический метод диагностики острой гонореи: микроскопия мазка гнойного отделяемого уретры больного острой гонореей. Окраска метиленовым синим.

4. Серологический метод диагностики хронической гонореи: оценить демонстрационную реакцию связывания комплемента (по Борде-Жангу), поставленную с целью обнаружения антител в сыворотке больного гонореей.

1. Оформление протокола исследования.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При заражении белой мыши мокротой больного пневмонией, мышь погибает от пневмококкового сепсиса. Из органов погибшей мыши готовят мазки-отпечатки. Красят по Граму. На розовом фоне, образованном клетками ткани, обнаруживаются грамположительные диплококки слегка вытянутой формы, напоминающие контуры пламени свечи или ланцета, окруженные бесцветной капсулой.

2. Характерным признаком пневмококков, отличающим их от большинства других видов стрептококков, является отношение к желчи и желчно-кислым солям. Желчь не только убивает, но и растворяет пневмококки. Напротив, в отличие от зеленящих (S.faecalis, S.sanguis) и гемолитических стрептококков (S.pyogenes), пневмококки разлагают инулин.

3. Диагноз острой гонореи ставят с помощью микроскопического метода исследования. Из исследуемого материала делают два мазка, один окрашивают по Граму, другой - метиленовым синим. При наличии в мазке гонококков видны грамотрицательные диплококки, расположенные внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз).

4. Так как при хронической гонорее гонококки находятся вне клеток, имеют атипичную форму в виде шаров или очень мелких образований, использовать бактериоскопический метод для постановки диагноза нельзя. Поэтому для диагностики хронической гонореи применяют: бактериологический, серологический методы исследования.

Серологический диагноз гонореи ставят с помощью РСК. Реакция ставится для обнаружения антител в сыворотке крови больного, с помощью известного антигена, который представляет собой взвесь убитых гонококков.

Схема постановки РСК

Компоненты реакции	1-я (опыт)	2-я (контроль АГ)	3-я (контроль AT)
1. Исследуемая сыворотка (1:5)	0,5	-	0,5
2. Антиген в рабочей дозе	0,5	0,5	-
3. Комплемент в рабочей дозе	0,5	0,5	0,5
4. Физиологический раствор	-	0,5	0,5

на 45 минут в термостат

5. Гемолитическая система

1,0

1,0

1,0

на 45 минут в термостат

Учет результатов

гемолиз

гемолиз

Учет результата реакции начинают с контрольных пробирок. При наличии гемолиза в контрольных пробирках, о результатах реакции судят но опытной пробирке.

ИНФОРМАЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ К ТЕМЕ:

Менингококки (Neisseria meningitides)- грамотрицательные диплококки бобовидной формы, жгутиков и спор не имеют, в организме образуют капсулу.

Культуральные свойства. Очень требовательны к условиям культивирования. Растут на плотных и жидких питательных средах, содержащих 20-25% сыворотки (сывороточный агар, сывороточный бульон). На плотной среде образуют мелкие гладкие прозрачные колонии. Строгий температурный оптимум - 37° С (при других температурах менингококки погибают) необходимо создать как при культивировании, так и при транспортировке материала от больного в лабораторию.

Среди представителей рода Neisseria есть условно-патогенные виды, обитатели слизистых оболочек носоглотки – N. Sicca, N.mucosa и др. У людей с ослабленной резистентностью они могут вызывать заболевания клинически сходные с менингококковой инфекцией.

Антигенная структура. N meningitides имеет родовые антигены общие для всех видов. Внутри вида по капсульным полисахаридным антигенам различают серогруппы N meningitides-A,B,C,D,Y.Z и др.

Эпидемиологические вспышки чаще вызывают возбудители серогрупп A,B,C.

Факторы патогенности менингококков:

1.Пили – обеспечивают адгезию на клетках цилиндрического эпителия носоглотки.

2.Ig А- протеазы- расщепляют молекулы SIg А, снижая тем самым местную защиту слизистых оболочек носоглотки;

3.Капсула- защищает от фагоцитоза;

4.Ферменты патогенности: гиалуронидаза, нейроминидаза и др.

5.Эндотоксин (ЛПС клеточной стенки)- вызывает поражение кровеносных сосудов, что проявляется кровоизлияниями во внутренние органы и геморрагической сыпью на коже.

Источником инфекции являются больной человек, либо бактерионоситель. Чаще (в 70-80% случаев) болеют дети первых трех лет жизни.

Пути заражения – воздушно-капельный. Входные ворота инфекции – слизистая оболочка носоглотки. Менингококковая инфекция может протекать в нескольких клинических формах, которые разделяют на локализованные и генерализованные.