государственное бюджетное образовательное учреждение высшего

профессионального образования

«Северо-Осетинская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

КАФЕДРА МИКРОБИОЛОГИИ

СБОРНИК МЕТОДИЧЕСКИХ РАЗРАБОТОК

ПО МИКРОБИОЛОГИИ, ВИРУСОЛОГИИ И ИММУНОЛОГИИ

ДЛЯ СТУДЕНТОВ ЛЕЧЕБНОГО ФАКУЛЬТЕТА

ОСЕННИЙ СЕМЕСТР

Владикавказ 2012

Под редакцией доктора медицинских наук, профессора, зав. каф. микробиологии ГБОУ ВПО СОГМА Минздравсоцразвития Российской Федерации Л.Я. Плахтий.

Авторский коллектив: асс.к.м.н. Черткоева М.Г., асс.к.м.н. Гатиева Е.И.

Основное назначение разработок – методическая помощь студентам к каждому практическому занятию в осеннем семестре. Указания составлены в соответствии с Федеральным государственным образовательным стандартом Высшего и профессионального образования (2011г.)

РЕЦЕНЗЕНТЫ:

Л.В. Бибаева –д.м.н., профессор, зав.кафедрой биологии и гистологии ГБОУ ВПО СОГМА Минздравсоцразвития Российской Федерации .

А.Р.Кусова–д.м.н.,профессор, зав кафедрой гигиены и физического воспитания ГБОУ ВПО СОГМА Минздравсоцразвития Российской Федерации.

Методические рекомендации утверждены на заседании ЦУКМС ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ» от _____________201 г., протокол №

Практическое занятие № 1. Тема: стафилококки. Микробиологическая диагностика стафилококковых заболеваний.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ:

1. Изучить биологические свойства стафилококков.

2. Изучить методы микробиологической диагностики стафилококковых заболеваний.

Студент должен знать:

1.Морфологию, культуральные, тинкториальные свойства стафилококков и стрептококков.Ферментативная активность.

2.Факторы патогенности и токсины. Их роль в патогенезе стафилококковых инфекций.

3. Основные заболевания вызываемые стафилококками, Патогенез, особенности иммунитета при стафилококковой инфекции. Источники и пути передачи инфекции.

4. Принципы микробиологической диагностики, основной метод исследования, схема идентификации выделенной чистой культуры, фаготипирование.

5.Специфическая профилактика и терапия стафилококковых инфекций.

Студент должен уметь:

1.Проведение бактериологического исследования (по схеме). Учет и интерпритация результатов.

2. Приготовление мазка и окраска по Граму.

3. Световая микроскопия препаратов из чистых культур стафилококков, стрептококков.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ:

1. Морфология, культуральные и биохимические свойства стафилококка.

2. Факторы вирулентности стафилококка.

3. Антигены стафилококка.

4. Заболевания, вызываемые стафилококком.

5. Методы диагностики и исследуемый материал при стафилококковых заболеваниях.

6. Препараты для специфической профилактики и лечения стафилококковых заболеваний.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ:

1. Изучить морфологию стафилококка в мазке из чистой культуры, описать, зарисовать.

2. Дать макроскопическую характеристику колоний на молочно-солевом агаре (бактериологический метод диагностики, 1-й этап исследования).

3. Идентифицировать культуру стафилококка по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, определить факторы вирулентности (2-й этап бактериологического метода):

а) учет результатов посева культуры стафилококка на кровяной агар с цель определения гемолизина.

б) учет результатов посева в цитратную плазму для определения плазмокоагулазы.

в) учет результатов посева на желточно-солевой агар с целью определения лецитиназы.

г) учет результатов посева на среду с маннитом.

4. Описать препараты для специфической терапии и профилактики стафилококковых заболеваний (стафилококковый анатоксин, антистафилококковая плазма, противостафилококковый иммуноглобулин, стафилококковый бактериофаг).

5. Оформление протокола исследования.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Основной метод диагностики стафилококковых заболеваний - бактериологический. Для выделения чистой культуры исследуемый материал засевают на желточно-солевой, кровяной или молочно-солевой агары. Выросшие изолированные колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры.

Идентификацию чистой культуры проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, затем определяют факторы вирулентности.

I. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

БАКТЕРИЙ.

На чашку с кровяным агаром сделан посев культуры стафилококка. Чашки оставляют в термостате на 24 часа при температуре 37 градусов.

При оценке результатов обращают внимание на зоны гемолиза, т.е. просветление среды вокруг выросших колонии. Гемолитические свойства бактерий связаны с наличием гемолизина (экзотоксина).

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛЕЦИТИНАЗЫ

На чашку с желточно-солевым агаром сделан посев стафилококка. Чашки оставляют в термостате на 24 часа.

При оценке результатов учитывают наличие венчиков помутнения вокруг колоний, что свидетельствует об образовании стафилококком фермента лецитиназы.

2. ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ФЕРМЕНТА ПЛАЗМОКОАГУЛАЗЫ

Производят посев культуры стафилококка в цитратную плазму. Пробирки ставят в термостат. Результаты учитывают через 24 часа. При наличии фермента плазмокоагулазы происходит коагуляция плазмы с образованием сгустка фибрина. Наличие фермента плазмокоагулазы является основным идентификационным признаком вида S.aureus, который нередко является возбудителем внутрибольничной инфекции.

IV.ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТАЦИИ МАННИТА

В АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ

Для определения этого признака, подтверждающего принадлежность чистой культуры стафилококка к наиболее агрессивному виду S.aureus, сделан посев в среду с маннитом. При расщеплении маннита образуются кислые продукты, которые изменяют цвет индикатора в среде (индикатор Андреде - дает красную окраску среды, а индикатор ВР - синюю).

№№ П/П	Исследуемый материал	Результаты исследования	Графическое изображение