- •Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Свойства интерферонов
- •Противовирусный иммунитет
- •Реакция гемагглютинации
- •Ртга с типоспецифической сывороткой
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Противомикробный иммунитет (общая схема)
- •Противогрибковый иммунитет
- •Противогрибковый иммунитет
- •Иммунитет к простейшим
- •Иммунитет к гельминтам
- •6. Изучить факторы, участвующие в развитии опухоли
- •Противоопухолевый иммунитет
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •2. Изучить постоянные противопоказания к препаратам календаря прививок (записать в тетрадь).
- •Постоянные противопоказания к препаратам календаря прививок
- •Определение титра токсина
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Классификация аллергенов по происхождению
- •Механизм образования IgE
- •Анафилактический тип реакции
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Антигистаминные препараты второго поколения
- •Антигистаминные препараты третьего поколения
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Цитотоксический тип реакции
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Иммунокомплексный тип реакции
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Гиперчувствительность замедленного типа (гзт)
- •Биологические эффекты основных цитокинов, вовлеченных в патогенез ра
- •Иммунопатогенез ревматоидного артрита
- •Лабораторные признаки ра и скв
- •И измененного в результате ревматоидного артрита (б)
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Механизмы формирования толерантности
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Аутоиммунные реакции
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •1. Изучить иммунопатогенез стоматитов. Аллергический стоматит (составить схему, оформить протокол)
- •Диагностика аллергической реакции на акриловые зубные протезы (по л. Д. Гожая)
- •Проявления аллергического воздействия пластмассовых зубных протезов на слизистую оболочку полости рта (по т. П. Кравец, м. Ю. Кравец)
- •Дифференциальная диагностика аллергического стоматита на акрилаты и металлы
- •4. Изучить методы диагностки аллергических заболеваний in vivo и in vitro
- •Современные методы, применяемые для
- •In vitro-диагностики аллергических заболеваний
- •Концентрация IgE в сыворотке крови здоровых людей
- •5.1. Изучить проявления первичных иммунодефицитов по международной классификации болезней (мкб-10).
- •12. Перечислить проявления атаксии-телеангиоэктазии (Синдром Луи-Барр)
- •13. Перечислить проявления хронической гранулоцитарной (гранулематозной) болезни
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Иммунодефицитные состояния
- •2. Решение задачи
- •Иммунограмма пациент б.
- •5. Изучить анализ и этапы лабораторных иммунологических исследований (записать в тетрадь)
- •Характеристика некоторых этапов диагностического анализа
- •Характеристика терминов и критериев статистических методов, используемых при проведении иммунологических исследований
- •Некоторые процедуры иммунологических исследований и критерии их стандартизации
- •Характеристика наиболее часто встречающихся причин аналитических ошибок при проведении рид и ифа
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •Цитокины – более узкое понятие, гуморальная составляющая межклеточных взаимодействий в иммунной системе. Гормоны тимуса.
- •Система цитокинов
- •Иммуносупрессия
- •Биологические эффекты основных цитокинов (л.В. Ковальчук)
- •Системные проявления (синдромы) токсического Действия цитокинов (а.А.Ярилин)
- •Провоспалительные цитокины (а.А. Тотолян, и.С. Фрейдлин)
- •Противовоспалительные цитокины (а.А. Тотолян, и.С. Фрейдлин)
- •Иммуноглобулины класса g (IgG)
- •Требования к результатам освоения дисциплины
- •Содержание разделов дисциплины, которые формируют компетенции при их изучении
- •Сокращения
Некоторые процедуры иммунологических исследований и критерии их стандартизации
Аналит |
Этап |
Критерии стандартизации процедур |
Иммуно-глобулины сыворотки крови |
Пре- аналитический |
Получение сыворотки из крови. Отсутствие в пробе примесей фибрина, гемолиза, агрегатов Ig, эритроцитов, контаминации микроорганизмами Хранение сывороток не более 3 дней при t = +4°С или длительное хранение при температуре не менее -20°С |
Аналитический |
Использование коммерческих тест-систем или автоматизация метода Использование стандартных растворов с различным содержанием Ig (минимум 3 уровня) Стандартизация температуры инкубации при использовании РИД Концентрация Ig в пробе не должна превышать таковую в стандарте Учет физиологических колебаний Ig (+20%) |
|
Иммуно-глобулины мочи |
Пре-аналитический |
Суточная или утренняя порция Проба на скрытую кровь Центрифугирование, концентрирование не менее чем в 50 раз Хранение при t = -20°С |
Аналитический |
Определение белка в единице объема Определение альбумина |
|
Иммуно-глобулины секретов |
Пре-аналитический |
Центрифугирование, разлив по аликвотам,хранение при t = -20°С При появлении хлопьевидного осадка в результате хранения – центрифугировать при 1500 g 30 мин Использование ингибиторов протеаз |
Аналитический |
Использование стандартов для секреторных и сывороточных форм Ig Использование IgG-фракции анти-сывороток Определение Ig Использование критериев соотношения Ig в сыворотке и секрете (относительные показатели) |
|
ЦИК, идентификация структуры |
Пре- аналитический |
Контроль на присутствие криосвойств Концентрация рН ПЭГ и используемых растворов |
Аналитический |
Продолжительность времени и температуры инкубации Отмывание осадка ЦИК Использование адекватных стандартов (полимерных и мономерных молекул Ig при исследовании разных изотипов) |
|
Криоглобулины |
Пре- аналитический |
Наличие криосвойств белков сыворотки Выделение осадка криоглобулинов при t = 4°С Температурный режим, продолжи-тельность |
Аналитический |
Идентификация типа криоглобулинов с использованием адекватных стандартов и антисывороток |
|
Компоненты комплемента |
Пре-аналитический |
Использование свежих образцов сывороток крови |
Аналитический |
Использование откалиброванных стандартных образцов комплемента Содержание комплемента в образце не должно быть больше, чем в стандарте |
|
Популяции и субпопуляции лимфоцитов (иммунофено- типирование) |
Пре-аналитический |
Выбор адекватного антикоагулянта (цитрат натрия, гепарин, ЭДТА или смесь гепарина с ЭДТА) Использование коммерческого раствора градиента плотности Выбор адекватного градиента плотности Контроль режима центрифугирования (скорость, время, температура) Контроль рН всех используемых растворов Использование цитратного гемостабилизатора (освобождение от тромбоцитов) Хранение не более 8 ч при комнатной температуре Контроль разведения МкАт |
|
Аналитический |
Контроль чистоты выделенной популяции клеток (не менее 80%) Контроль жизнеспособности клеток (не менее 80%) Контроль концентрации реагентов, модифицирующих мембрану клеток |
Фагоцитарная активность (гранулоцитов) |
Пре-аналитический |
Контроль значений градиента плотности Использование цитратного гемостабилизатора (удаление тромбоцитов) Контроль чистоты популяции – не менее 80% Контроль полноценности лизиса эритроцитов Количество выделенной субпопуляции клеток не менее 1 х 106 в 1 мл Контроль концентрации объектов фагоцитоза (латексные частицы, микробные антигены, химические модификаторы мембран) и т.д. Контроль качества раствора Хенкса, люминала и его концентрации при методе хемилюминесценции |
Аналитический |
Калибровка используемых приборов Постановка контролей (положительных и отрицательных) |
Для проведения исследований на данном этапе необходима полная подготовка к работе приборов и наличие контрольных материалов
Контрольные материалы должны быть адаптированы к применяемым методикам и должны включать:
- контрольные сыворотки с различным содержанием исследуемых компонентов (неспецифические и специфические; IgA, IgM, IgG, IgE; СЗ, C4 и др.);
- калибраторы с известным и желательно различным содержанием исследуемого компонента (не менее 3);
- контрольные образцы суспензий клеток (лимфоцитов при иммунофенотипировании);
- контрольные мазки (нормальные и патологические);
- референс-контроли (эталонные контроли) для оценки работы тест-системы в целом.
Контрольные материалы исследуют так же, как и образцы пациентов. Принципиальным для получения сопоставимых и надежных результатов является использование стандартизованных контрольных материалов и реагентов, унифицированных методов с критериями надежности, сведение к минимуму влияния человеческого фактора. Всем этим требованиям отвечает автоматизирование системы анализа с программой контроля качества.
Таким образом, для получения надежных результатов при использовании иммунологических методов оптимальным представ-ляется путь максимальной автоматизации аналитического процесса и стандартизации пре- и постаналитического этапов. Стандартизация преаналитического этапа, как было указано выше, включает стандартизацию способов доставки и хранения проб (контейнер с диапазоном температурного режима), унификацию пробирок (вакутейнеры, микроветы с различными антикоагулянтами), стандартизацию маркировки проб, растворов для подкисления или подщелачивания используемых в работе буферных растворов, универсальность коагулянтов, отмывающих и разводящих растворов и т.д.
Постаналитический этап связан с анализом результатов исследования контрольных материалов, проб пациента их статистической обработки, построения контрольных карт. Наиболь-шее распространение получила карта Шухарта (контроль правиль-ности и воспроизводимости). Помимо непосредственной работы по контролю качества, необходимо проведение работы по оформлению результатов исследования проб пациентов (отражение в рабочем журнале, направительных бланках или использование компьютерной программы). Контроль качества включает следующие этапы:
1-й этап ̶ постановка и ежедневное измерение контрольного материала исследуемых образцов пациентов в течение 20 дней.
2-й этап – статистическая обработка данных: вычисление средней (межсерийная воспроизводимость).
3-й этап – по результатам статистической обработки данных построение контрольной карты Шухарта.
4-й этап – по мере постановки анализов внесение результатов измерения контрольных материалов на карте Шухарта.
8. Проанализировать характеристику и причины возможных ошибок при постановке лабораторных исследований (записать в тетрадь).
При получении неудовлетворительных результатов контрольных измерений необходимо проанализировать возможные ошибки и устранить их. В таблице 24 представлена характеристика наиболее часто встречающихся причин аналитических ошибок при проведении, например, методов РИД и ИФА.
Таблица 24