37. В чем заключается метод иммуноферментной диагностики на основе моноклональных антител? Основные достоинства и недостатки метода.

Важнейшей предпосылкой успешного лечения заболевания любой природы является его ранняя диагностика. Одним из наиболее широко применимым методом ранней диагностики является иммуноферментный анализ (ИФА) и прежде всего его разновидность- ферментный иммуносорбентный анализ (ELISA). Процедура его проведения включает следующие этапы:

1. У человека с подозрение на определенное заболевание берется кровь из вены. Задачей анализа является обнаружение в крови специфических антигенов, в роли которых обычно выступают антитела, вырабатываемые имунной системой в ответ на инфекцию (на наличие антигенных белков) или определенный воспалительный или патологический процесс. О степени протекания процесса судят по количеству определяемых антител в пробе.

2. Анализ проводится на специальной планшетке содержащей несколько десятков микроскопических лунок в каждую из которых добавляются анализируемые пробы. На поверхности каждой лунки иммобилизованы (прикреплены) антитела, специфичные к анализируемому антигену. Если в анализируемой пробе присутствуют молекулы антигена, то они связываются с прикрепленными к поверхности лунки антителами. Затем лунки промывают с целью удаления не связавшихся молекул антигена.

3. На следующем этапе в лунки добавляют раствор антител, специфичных к искомому антигену. Особенностью этих антител является то, что они представляют собой коньюгат (комплекс) с ферментом, катализирующим определенную цветную реакцию, или с определенной хромофорной группой, дающей свечение (люминесценцию) при облучении пробы ультрафиолетовыми лучами. Затем лунки опять промывают с целью удаления не связавшихся молекул антигена.

4. Далее в лунки добавляется бесцветный реагент, который под действием конъюгированного с антителом фермента приобретает цветную окраску. По интенсивности окраски, методом фотокалориметрии, оценивают количество антигена и степень развития болезни.

Благодаря целому ряду несомненных преимуществ: удобства в работе, быстроты, объективности за счёт автоматизации учёта результатов, возможности исследования иммуноглобулинов различных классов (что важно для ранней диагностики заболеваний и их прогноза) в настоящее время иммуноферментный анализ является одним из основных методов лабораторной диагностики.

Однако у этого метода есть свои недостатки. ИФА обладает определенной инерционностью и может давать какложноположительные так и ложноотрицательные результаты.

Например, ложноположительные результаты при определении инфекций могут быть обусловлены наличием в крови антител, образовавшихся в результате ранее уже перенесенной болезни (диагностика малярии, гепатита), или в результате ранее проведенной вакцинации.

Ложноотрицательные результаты при определении антител могут быть обусловлены нарушениями имунной системы, а также техническими ошибками при постановке анализа. Даже у человека с нормальной имунной системой имеется так называемое «cеронегативное окно» - промежуток времени от инфицирования до отклика имунной системы в виде выработки заметных количеств антитет. Этот промежуток времени в зависимости от типа инфекции может занимать от нескольких дней до нескольких недель. Поэтому метод не позволяет диагностировать инфекцию на самых ранних стадиях.