47

НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ БІОРЕСУРСІВ

І ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ УКРАЇНИ

ФАКУЛЬТЕТ ЗАХИСТУ РОСЛИН, БІОТЕХНОЛОГІЙ ТА ЕКОЛОГІЇ

Кафедра молекулярної біології, мікробіології та біобезпеки

КУРСОВА РОБОТА

на тему:

«А-вірус винограду»

Виконала: Володарський Є.В., студент 3 курсу 1 групи

Факультету захисту рослин, біотехнології та екології

Перевірив: к.с.г.н., доцент Антіпов Ігор Олександрович,

к.б.н., асистент Гринчук Катерина Валеріївна

Київ – 2016

Зміст

Список умовних скорочень 3

Вступ 4

Розділ І Огляд літературних джерел 6

1.1 Загальна характеристика А-вірусу винограду 6

1.1.1 Будова віріону А-вірусу винограду 7

1.1.2 Морфологія. Білки та нуклеїнові кислоти 8

1.1.2 Геномна організація 9

1.1.4 Особливості реплікації 11

1.1.5 Біохімічні та біофізичні властивості А-вірусу винограду 12

1.1.6 Симптоматика 13

1.1.6.1 Головні хвороби 13

1.1.6.2 Рослини-господарі і симптоматика 14

1.1.7 Передача А-вірусу винограду 20

1.1.8 Штами 21

1.2 Методи діагностики А-вірусу винограду 21

1.2.1 Серологія 22

1.2.2 ПЛР 24

1.2.2.1 RT-PCR 24

1.2.2.2 IC-RT-PCR 25

1.2.3 Біотест 27

1.3 Заходи боротьби та профілактики вірусних захворювань винограду 27

1.4 Філогенетичні методи діагностики 28

Розділ 2 Проведення філогенетичного аналізу А-вірусу винограду 31

Розділ 3 З ясування ролі вірусів у біотехнології 37

Висновок 40

Список використаної літератури 41

Список умовних скорочень

CP – coat protein (капсидний білок)

ELISA – enzyme-linked immunosorbent assay

GVA - Grapevine virus A – А-вірус винограду

GVB - - Grapevine virus В – Б-вірус винограду

Hel– хелікази

MP – movement protein (транспортний білок)

МТР- метилтрансфераза

ORF – open reading frame (відкрита рамка зчитування)

Pol – полімераза

RdRp - RNA-dependent RNA polymerase

RT – reverse transcription (зворотня транскрипція)

sgRNA - subgenomic RNA

ДНК – Дезоксирибонуклеїнова кислота

дНТФ – дезоксинуклеотидтрифосфат

кДА – кілоДальтон

кДНК – комплементарна ДНК

кпо – кіло пар основ

мкл – мікролітр

мМ – міліМоль

мРНК – матрична РНК

нм - нанометр

олРНК – однноланцюгова рибонуклеїнова кислота

п.н. – пар нуклеотидів

ПЛР – полімеразна ланцюгова реакція

РНК – Рибонуклеїнова кислота

тРНК – транспортна РНК

хв. – хвилина

Вступ

Актуальність роботи. Вірусні хвороби винограду стали об'єктом інтенсивного вивчення в останні 20— 30 років. За цей час на винограді було описано більше 40 вірусних і мікоплазмових захворювань, список яких продовжує збільшуватися. Дослідження вірусних і мікоплазмових хвороб винограду і шляхів їх поширення сприяли розробці науково обґрунтованих захисних заходів. Однак, незважаючи на наявний прогрес, наші знання про вірусних і мікоплазмових захворювань винограду все ще недостатні, так як інфекційність деяких доведена, але збудник не встановлено. Не з'ясовані і переносники ряду збудників вірусних і мікоплазмових захворювань.

За даними Крамера (Cramer Н. Н., 1967), вірусні хвороби знижують урожай винограду в усьому світі на 10 %, однак зустрічаються дані про більш високу їх шкодочинності. Вірусні захворювання істотно знижують кількість і погіршують якість винограду, вихід першосортних саджанців та довговічність виноградних кущів у загальному. Характерною особливістю вірусних захворювань є те, що вони системні і хронічні, тобто тканини, а часом і клітини, колись заражених рослин залишаються хворими протягом усього життя[62].

Відомості про вірусні хвороби винограду в СНД з'явилися в 1946 р., коли було описано коротковузля в Криму (Рижков, 1946) і в Молдові (Вердеревский, 1946). Потім про інфекційний хлороз винограду в Грузії повідомили Канчавели і Еріставі (1949). Однак систематичне вивчення вірусних хвороб винограду в СНД ведеться лише в Молдові і на Україні. Останнім часом розпочато роботи в цьому напрямку в Грузії, Казахстані, на Північному Кавказі і на Дальньому Сході.

В даний час на Україні виявлено 16 вірусних захворювань. Серед виявлених на Україні вірусних захворювань винограду найбільш поширені: коротковузля, інфекційний хлороз, хлороз жилок, мармуровість, некроз жилок, скручування листя, прижилковая мозаїка, борозність деревини [60].

Об’єкт дослідження: А-вірус винограду

Мета курсової роботи. Проаналізувати наявні літературні та електронні джерела щодо A вірусу винограду. Встановити філогенетичне походження обраного ізоляту A вірусу винограду. Дослідити питання використання фіто вірусів у біотехногології.

Завдання курсової роботи:

• дослідити геном А-вірусу винограду;

• розглянути особливості реплікації даного вірусу;

• охарактеризувати фізичні та біофізичні властивості даного вірусу;

• з’ясувати симптоматику А-вірусу винограду;

• проаналізувати особливості діагностики хвороби, викликаної вірусом;

• розібрати філогенетичні методи дослідження вірусів

• навчитися працювати з генетичними базами даних;

• встановити філогенетичне положення обраного ізоляту А-вірусу винограду;