Ход работы

1. На полоску хроматографической или фильтровальной бумаге (2х12см) карандашом нанести стартовую линию (от края полоски 1-1,5 см), погрузить этим концом в вытяжку пигмента на глубину 1-1,5 см, затем высушить на воздухе. Операцию повторить 3-4 раза, до тех пор пока зона погружения не приобретет достаточно зеленый цвет. Далее опустить этот конец несколько раз в чистый ацетон на глубину 2 мм, согнать все пигменты в стартовую полосу (ширина 2-3 мм), просушить и вставить противоположным концом в разрез пробки. Закрыть пробкой пробирку, на дно которой налит бензин или петролейный эфир.

Полоска бумаги должна находиться в вертикальном положении, а ее нижний край надо погрузить в растворитель так, чтобы последний не касался стартовой полосы (рис. 1, а). До и после погружения хроматограммы пробирка должна быть закрыта плотно пробкой и находиться на слабом свету во избежания фоторазрушения пигментов. Когда растворитель достигнет верхнего края хроматограммы, полоску бумаги вынуть и просушить на воздухе. На хроматограмме отметить положение полос, соответствующих определенным пигментам.

2. На лист фильтровальной или хроматографической бумаги (15х15см) нанести пипеткой с оттянутым концом полосу пигментов на расстоянии 1,5 см от края. Ширина полосы должна быть около 1см, цвет ^__ интенсивно зеленый. Хроматограмму свернуть трубочкой, сколоть скрепкой и опустить нижним концом в банку, на дно которой налит слой бензина высотой около 1 см (рис.1, б). Стартовая полоса не должна касаться бензина. Если разделение пигментов происходит медленно и нечетко, следует вынуть хроматограмму и добавить к бензину 1-2 мл какого-либо полярного растворителя (спирт, ацетон). Снова погрузить в смесь хроматограмму и плотно закрыть крышкой. Когда пигмент, движущийся с фронтом растворителя, поднимется до верхнего края хроматограммы, ее вынимают, просушивают на воздухе и отмечают положение полос пигментов.

3. На круглом обеззоленном химическом фильтре сделать по радиусу 2 надреза, не доходя до центра, и полученный «язычок» немного отогнуть вниз. В центр с помощью пипетки нанести стартовое пятно пигментов и следить, чтобы оно не расплывалось. Пятно должно иметь интенсивно зеленый цвет, что достигается 2-3 кратным нанесением вытяжки. Затем просушить хроматограмму, положить ее на края чашки Петри, куда налит слой бензина (0,5 см), опустить «язычок» в растворитель и плотно закрыть чашку крышкой. На хроматограмме пигменты будут расположены концентрическими кругами со стартовым пятном в центре (рис. 1 в).

На хроматограммах, полученных каждым из трех способов, пигменты располагаются в одинаковом порядке. Слабо-зеленая зона, которая иногда и наблюдается на месте стартовой полосы или пятна, представляет собой хлорофиллид – бесфитольное производное хлорофилла, нерастворимое в бензине. Непосредственно над стартовой полосой находится хлорофилл б желтовато-зеленого цвета, над ним ^__ хлорофилл а голубовато-зеленого цвета. Далее следуют ксантофиллы, не разделяющиеся на отдельные компоненты при данном способе хроматографии, а затем с фронтом растворителя ^__ каротины.

Отдельным группам провести хроматографию пигментов по одному из указанных способов. На полученных хроматограммах отметить зоны расположения пигментов, обозначить их цифрами и слегка подкрасить в соответствующий цвет, так как на воздухе они быстро выцветают. Вклеить хроматограмму в лабораторную тетрадь. Стрелкой указать направление движения растворителя. Объяснить расположение пигментов на хроматограмме исходя из их химического строения и растворимости. Сделать вывод, какие пигменты можно выделить с помощью данного метода хроматографии и какой из способов пригоден для демонстрации состава пигментов листа в средней школе.

Подписать и расшифровать хроматограмму. В рабочей тетради зарисовать все способы хроматографического распределения пигментов.

Работа 3. Физические свойства пигментов листа

Цель: изучить физические свойства фотосинтетических пигментов

Объекты, реактивы, оборудование: свежие листья фуксии и бальзамина, концентрированная спиртовая вытяжка пигментов; плоские флаконы или кюветы, спектроскопы, настольная лампа, ступка с пестиком, пробирки, воронка, бумажный фильтр, медицинский шприц, дистиллированная вода, пинцеты.