Определение диастазного числа по правилам ветсанэкспертизы (пробирочным методом)

Диастазное число — показатель активности фермента диастазы. Оно выражается в единицах Готе — количестве см³ 1%-ного раствора крахмала, расщепляемого за 1 час диастазой, содержащейся в 1 г меда (при пересчете на сухое вещество) при 40 °С.

Ход анализа. Готовят 10% раствор меда (с учетом влажности меда, или пересчитывают полученный результат на сухое вещество меда).

Приготовленный раствор разливают в 12 пробирок и добавляют остальные компоненты, как указано в таблице 13. Пробирки закрывают пробками, тщательно перемешивают и ставят в водяную баню на 1 ч при 40+1 °С. Затем в охлажденные до комнатной температуры пробирки приливают по 1-3 капли раствора йода (Люголевского раствора).

Таблица 13 – Определение диастазного числа

Компонент	Номера пробирок
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
10% раствор меда, см3	1,0	1,3	1,7	2,1	2,8	3,6	5,0	6,0	7,1	10	12,5	25
Дистиллированная вода, см3	9,0	8,7	8,3	7,9	7,2	6,4	5,0	4,0	2,9	---	---	---
0,58% раствор хлорида натрия, см3	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
1% раствор крахмала, см3	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0
Диастазное число	50,0	38,0	29,4	23,8	17,9	13,9	10,0	8,0	7,0	5,0	4,0	2,0

В пробирках, где крахмал остался нерасщепленным, содержимое окрасится в синий цвет: диастазы нет. При содержании небольшого количества диастазы - в фиолетовый цвет, при содержании большого количества — раствор имеет желтоватый оттенок.

Отмечают последнюю слабоокрашенную пробирку перед рядом обесцвеченных (с желтоватым оттенком). Определяют диастазное по таблице 13.

Определение диастазного числа по ГОСТ Р 54644-2011

(Колориметрическим методом)

Метод основан на колориметрическом определении количества крахмала, нерасщепленного в условиях проведения ферментативной реакции, и последующем вычислении диастазного числа.

Ход анализа. Готовят 10% раствор меда: 5 г меда растворяют в небольшом количестве воды (около 30 см³), переносят раствор в мерную колбу на 50 см³, доводят до метки водой, перемешивают.

В две сухие пробирки отмеряют по 14,0 см³ комбинированного реактива. Пробирки закрывают резиновыми пробками и помещают на 10 мин в водяную баню при температуре 40°С. Затем в одну пробирку (испытуемую) вносят пипеткой 1,0 см³ раствора меда, а в другую (контрольную) вместо меда вносят 1,0 см³ дистиллированной воды.

Содержимое перемешивают пятикратным перевертыванием, и пробирки вновь помещают на водяную баню, одновременно включая секундомер. Пробирки выдерживают на водяной бане в течение 15 мин при температуре 40 ± 0,2^оС.

Пипеткой отбирают из каждой (контрольной и опытной) пробирки по 2,0 см³ реакционной смеси, вносят смесь при перемешивании в две мерные колбы вместимостью 50 см³ содержащие 40 см³ воды температурой 20°С и 1 см³ раствора йода (одна колба для испытуемого раствора, другая для контрольного).

Раствор доводят водой до метки. Колбу закрывают пробкой, содержимое хорошо перемешивают и выдерживают на водяной бане при 20°С в течение 10 мин.

Оптическую плотность содержимого колб измеряют на фотоэлектроколориметре против воды при светофильтре длиной волны 750 нм, используя кювету рабочей длиной 0,5 см.

Колориметрируя растворы, определяют значения оптической плотности испытуемого раствора Dисп и контрольного опыта Dк с точностью отсчета 0,001.

Обработка результатов. Диастазное число меда Х₄ в пересчете на 1 г безводного вещества вычисляют по формуле:

Х₄= (Dк – Dисп) х 100 х 80

Dк х (100 – W)

где Dк – оптическая плотность раствора, определенная контрольным опытом;

Dисп – оптическая плотность испытуемого раствора;

80 – коэффициент пересчета;

W – массовая доля воды в меде, %.