3. Определение влажности

Влажность почвы – содержание в почве влаги в твердом, жидком и газообразном состоянии. Влажность почвы определяется в процентах от массы сухой почвы или от ее объема. От соотношения влаги и воздуха в почве зависит в значительной степени рост и развитие растений.

Для расчета влажности применяется следующая формула:

А% = , где

[А] – влажность почвы

[в] – масса бюкса с влажной почвой

[с] – масса бюкса с сухой почвой

[а] – масса пустого бюкса

Расчеты:

а = 24,9

в = 30,2

с = 28,6

А% = 43,24%

Следовательно, что при такой влажности 1 г сырой почвы имеет 0,43 г абсолютно сухой почвы.

4. Метод учёта численности

При определении численности бактерий сначала готовят суспензии, навеску почвы переносят в колбу ёмкостью 250 мл, содержащую 90 мл стерильной водопроводной воды, интенсивно сбалтывают вращательным движением в течение 10 минут и дают отстояться грубым частицам почвы. Затем методом разведения готовят суспензии, содержащие разное количество почвы. С этой целью из предыдущего разведения стерильной пипеткой переносят по 1 мл суспензии в последующую пробирку, содержащую также 9 мл стерильной водопроводной воды. В первой пробирке 1 мл суспензии, приготовленной по этому методу, соответствует разведению 10^-1 . Последующие составляют 10^-2,10^-3,10^-4 и т.д.

5. Методы посева

Из полученных разведений проводят посев на плотные среды. Используется техника посева в толщу плотной среды. В чашку Петри добавляют 1 мл исследуемой культуры ( в нашей работе несколько разведений), потом приливают 15-20 мл расплавленной и охлажденной до 48°С плотной питательной среды и перемешивают. Культуру и среду смешивают энергичными круговыми движениями чашки и дают затвердеть на ровной горизонтальной поверхности, а после помещают в термостат. Колонии вырастают в толще и на поверхности среды и если среда прозрачная, то могут быть легко подсчитны.

В тех случаях, когда после подсчета колоний может возникнуть необходимость в выделении чистой культуры и ее идентификации для определения количества жизнеспособных микроорганизмов, используют метод поверхностного посева. Питательную среду разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают, переворачивая чашки вверх дном и выдерживая их открытыми в термостате 30 мин при температуре 37°С (или в ламинарном боксе 1-2 ч). В центр маркированной чашки Петри вносят заданное количество исследуемого жидкого материала или его разведения и немедленно равномерно распределяют по поверхности среды стерильным стеклянным или пластиковым шпателем до тех пор, пока на агаре не останется видимых следов жидкости. Чашки с посевами переворачивают, помещают в термостат, установленный на соответствующий температурный режим.

Так же используется метод обрастания комочков. Поверхность геля покрывают стерильным кружком фильтровальной бумаги, по которому раскладывают (по трафарету) 30 комочков почвы (диаметром 1—2 мм).

Плотность обрастания комочков почвы целлюлозе-разрушающими микроорганизмами можно выразить в процентах.

Палочкой с оттянутым концом (предварительно ее слегка проводят над огнем и смачивают водой) захватывают комочек почвы (диаметр 1—2 мм) и по трафарету помещают на поверхность эмалевой пластины.

Через некоторое время в зависимости от активности нитрифицирующих бактерий (спустя 7, 14, 21 день) вокруг отдельных комочков почвы появляются зоны растворения мела, свидетельствующие об обрастании комочков почвы нитрифицирующими бактериями.

Чашки вынимают и подвергают анализу: определяют процент обрастания комочков почвы нитрифицирующими бактериями, изучают по морфологии их представителей и продукты жизнедеятельности.