2. Иммуноферментный анализ. Принцип выявления антигенов и антител с помощью ифа.

Иммуноферментный анализ или метод — выявление ан­тигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интен­сивность окраски прямо пропорциональна количеству свя­завшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных бо­лезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепати­та В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекар­ственных препаратов и других биологически активных ве­ществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (10¹⁰-10¹² г/л).

Твердофазный ИФА— вариант теста, когда один из компо­нентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или анти­генов. При положительном результате изменяется цвет хромоге­на. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,

I. При определении антител в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сы­воротку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, ме­ченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.

II. При определении антигена в лунки с сорби­рованными антителами вносят антиген (напр., сыворотку кро­ви с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыво­ротку против него и вторичные антитела (против диагностиче­ской сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хро­моген для фермента.

Конкурентный ИФАдля определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.

Другой тест - Конкурентный ИФА для определения антител: искомые анти­тела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с дру­гом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

3. Менингококковая инфекция. Характеристика. Принципы лабораторной диагностики инфекции.

Менингококковая инфекция – острая инфекционная болезнь, поражающая носоглотку, оболочки головного и спинного мозга. Материал для исследования – отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость, кровь.

Бактериоскопическое исследование – обнаружение бобовидных диплококков в цитоплазме лейкоцитов. Окрашивание водным раствором основного фуксина или мителеновым синим, реже – по грамму.

Бактериологическое исследование – остатки спинномозговой жидкости заливают стерильным полужидким сывороточным агаром и помещают в термостат для накопления микробных клеток. На второй день после инкубации изучают культуральные свойства. Менингококки образуют круглые выпуклые прозрачные колонии, в мазках из них находятся полиморфные диплококки и тетракокки. Колонии, розовеющие при нанесении оксидазного индикатора, пересевают на скошенный сывороточный агар. На третий день выделенную культуру агглютинируют с менингококковыми сыворотками.

Реакция преципитации. Применяется для определения серовара выделенной культуры для установления источника инфекции. Густую взвесь микробов наливают в 3 пробирки по 3 капли, затем вносят 3 капли неразведенной менингококковой сыворотки серогрупп А В С. Смесь взбалтываю в течении 2-5 минут,после чего в пробирку доливают 10-20 капель 0,85% раствора натрия хлорида .

При подозрении на менингококкцемию делают посев крови в сахарный бульон или полужидкий сывороточный агар, который через сутки пересевают на сывороточный агар для выделения и идентификации культуры.

Носоглоточнуюслизь высевают на сывороточный агар с ристомицином для подавления грамположительной микрофлоры.

Для обнаружения антител в крови ставят РНГА с эритроцитами, на которых адсорбированы группоспецифические полисахариды менингококков, используют и РИА.