Заготовка гипофизов

При заготовке гипофизов рыб следует руководствоваться следующими правилами:

1. Нельзя производить заготовку гипофизов от неполовозрелых рыб.

2. Нельзя производить заготовку гипофизов от рыб сразу после нереста.

3. Необходимо производить заготовку гипофизов от рыб, половые продукты которых находятся на IV стадии зрелости, в это время в гипофизах накапливается максимальное количество гормонов.

4. Наилучшим периодом заготовки гипофизов является преднерестовая миграция рыб.

5. Для заготовки гипофизов необходимо использовать живую рыбу.

У рыб, из семейства осетровых череп вскрывают трепаном, который представляет собой металлический цилиндр с пилообразными зубцами на одном из его концов. Диаметр цилиндра равен 30 мм. Для получения гипофиза от белуги применяют трепан больших размеров – диаметром 35-40 мм.

Трепан устанавливают посредине головы рыбы, позади глаз. Для точной установки трепана цилиндр поднимают вверх до отказа, после чего вращают рукоятку и, сделав несколько оборотов, поднимают стержень во избежание разрушения гипофиза. Затем трепан ввинчивают до отказа и вырезанную пробку, состоящую из кости и хряща удаляют. В черепной крышке образуется отверстие, которое при правильной установке трепана находится над гипофизарной ямкой. В последнее время для заготовки гипофиза применяют электротрепан. Просверлив отверстие, выталкивают стержнем из цилиндра оказавшийся в нем кусок черепа, в котором содержится часть мозга и гипофиз. Взяв высверленный кусок, срезают с него нижнюю костную пластинку и хрящ, а затем пинцетом извлекают гипофиз.

При заготовке гипофиза карповых (сазан, лещ) и окуневых (судака) срезают крышку черепа рыбы, приподнимают пинцетом мозг и достают гипофиз. При этом у карповых гипофиз лежит в углублении основания черепа и прикрыт пленкой. Подрезав скальпелем пленку, вынимают пинцетом гипофиз. У судака гипофиз прикреплен к мозгу и легко отделяется от него, поэтому он иногда остается в ямке в основании черепа, откуда его извлекают пинцетом.

Взятые у рыб гипофизы помещают в стеклянные банки с притертой пробкой, наполненные безводным химически чистым ацетоном. Объем ацетона должен быть в 10-15 раз больше объема гипофизов. В ацетоне гипофизы постепенно обезвоживаются. Через 12 часов ацетон сливают из банок и наливают другую порцию, объем которой также должен превышать в 10-15 раз объем гипофизов. В этой порции ацетона гипофизы выдерживают еще 6-8 часов.

Затем ацетон сливают из банок, а гипофизы раскладывают на фильтровальной бумаге и высушивают при низкой влажности воздуха и температуре не выше комнатной. Высушенные гипофизы высыпают в сухие банки с притертыми пробками и хранят в холодильнике при температуре от 1 до 5°С.

Для определения активности препарата гипофиза во вьюновых единицах используют несколько групп самок вьюна с гонадами в IV стадии зрелости и индивидуальной массой 35-40 г. При температуре 16-18°С всем им делают одновременно гипофизарные инъекции различной дозировки. Минимальная дозировка препарата гипофиза (мг), которая вызывает у одной самки вьюна, как и других особей, созревание ооцитов и овуляцию, соответствует вьюновой единице.

Таким же образом можно проверить активность препарата гипофиза на самцах лягушки. Положительной реакцией считается появление подвижных сперматозоидов в клоаке самца после инъекции суспензии гипофиза в спинные лимфатические мешки при температуре 18-22°С. При этом гонадотропная активность гипофиза выражается в лягушачьих единицах.