Практическая часть работы.
Изучив устройство микроскопа, нужно научиться с ним работать и освоить методику приготовления микроскопических препаратов. Все рассмотренные препараты нужно зарисовать.
Под морфологическими признаками понимают строения клетки, размеры, форму клетки микроорганизмов, спорообразование, подвижность.
В условиях лаборатории можно определить морфологию картофельной и сенной палочки, молочно-кислых бактерий, гнилостных бактерий. Для этого необходимо вырастить различного вида бактерии. Для определения сенной палочки делают настой сена и готовят препарат, рассматривают под микроскопом. Молочно-кислые бактерии можно увидеть в капустном, огуречном и других рассолах/
1. Препарат живых клеток "раздавленная капля".
Если организмы находятся в жидкой среде на обезжиренное предметное стекло поместить каплю живых клеток бактерий и притереть покровным стеклом, для чего покровное стекло ставят сначала на предметное одним ребром, а затем плавно опускают, прижимая «раздавливая» при этом каплю.
Если культура выращена на твердой питательной среде, то на стекло предварительно наносят каплю воды, а затем помещают в неё клетки микроорганизмов бактериологической петлёй, прокалённой в пламени горелки, и тщательно размешивают. Не следует вносить много исследуемого материала, капля должна быть лишь слегка мутной. Материал, оставшийся на петле, сразу же сжигают в пламени горелки.
На поверхность покровного стекла наносят каплю иммерсионного масла и, погрузив в него объектив с увеличением в 100 раз, находят изображение.
2. Фиксированные окрашенные препараты бактерий.
Фиксация имеет цель прикрепить микробы к стеклу, чтобы они не могли смыться при дальнейшей обработке. При этом микроорганизмы погибают, а у мертвых клеток нарушена целостность мембран, и, в результате они прокрашиваются лучше живых.
Чаще всего производят фиксацию жаром, путём быстрого трехкратного проведения предметного стекла мазком к верху над пламенем горелки в верхней его части. Можно применять фиксацию этиловым спиртом в течение 15-20 минут. Хорошо приготовленный мазок должен после фиксации выглядеть на предметном стекле как едва заметный след.
Остывший фиксированный препарат затем заливают раствором краски на определённое время. В качестве красителя применяют метиленовый синий или фуксин. После выдержки препарата с краской 30 сек., краску смывают лёгкой струёй воды. При этом удаляются излишки краски, а краска адсорбированная протоплазмой клеток, остаётся. Промытый препарат просушивают осторожно промокая фильтровальной бумагой и на сухую поверхность наносят каплю иммерсионного масла.
Для рассмотрения бактерий под микроскопом приготовить фиксированные препараты, положить препарат на предметный столик и исследовать его под микроскопом. При выполнении работы все препараты, рассматриваемые под микроскопом, должны быть зарисованы и под ними сделаны соответствующие записи и выводы (название микроорганизмов, описание морфологических признаков, увеличение микроскопа).