Задание 4. Определение времени свертывания крови а. Определение времени свертывания венозной крови

Ход работы. 1. Сухой иглой без шприца из локтевой вены выпустить первые капли на ватный тампон.

2. Набрать в две сухие стеклянные пробирки по 1·10^-3 л (1 мл) крови. Тотчас при соприкосновении крови с пробирками включить секундомер.

3. Поместить пробирки с кровью на 2 мин на водяную баню при температуре 37°С.

4. Через 2 мин, а затем через каждые 30 с пробирки наклонять на 45-60°. При этом если кровь не свернулась, то она растекается по стенкам пробирки. Свертывание считают законченным, когда кровь не выливается при переворачивании пробирок вверх дном. В этот момент секундомер выключают.

Примечание. Время свертывания крови выражают в минутах (среднее значение из двух определений). Пределы колебаний времени свертывания крови в стеклянных пробирках у здоровых людей составляют 5-10 мин.

Б. Определение времени свертывания капиллярной крови

Ход работы. 1. Продезинфицировать спиртом мякоть ногтевой фаланги пальца руки. Произвести скарификатором укол, первую выступившую каплю крови удалить.

2. Набрать столбик крови высотой 20-30 мм в сухой капилляр Панченкова и включить секундомер.

3. Перевести столбик крови на середину капилляра и наклонять его в обе стороны на 30-45°. Начало свертывания отмечают от момента замедления движения крови при наклоне капилляра и появления на внутренней стенке капилляра небольших сгустков. Момент полной остановки движения крови соответствует полному свертыванию крови.

Примечание. Время свертывания капиллярной крови в норме: начало 30 с - 2 мин, конец 3-5 мин.

Задание 5. Исследование рН и буферных свойств сыворотки крови а. Определение рН сыворотки крови с помощью рН-метра

Потенциал некоторых электродов зависит от концентрации водородных ионов в растворе, т. е. связан с рН раствора. Определив потенциал такого электрода, можно рассчитать рН раствора, в который он погружен. Обычно в качестве электродов для определения рН используют стеклянные электроды, что позволяет определять рН в широком диапазоне. Стеклянная мембрана обладает достаточно высоким сопротивлением, поэтому для определения потенциала стеклянного электрода ток усиливают с помощью электронных усилителей, которые вводят в схему современных рН-метров. Шкала таких приборов обычно градуируется в милливольтах и единицах рН.

Для работы необходимы: центрифужные пробирки, шприц на 5·10^-3 л (5 мл), центрифуга, рН-метр.

Ход работы. 1. Включить прибор в сеть и прогреть его в течение 20 мин.

2. Залить в стакан микроячейки насыщенный раствор хлорида калия и закрыть стакан крышкой.

3. Вставить в гнездо крышки электролитический ключ и залить в него 1·10^-3 л (1 мл) сыворотки крови.

4. Закрепить измерительный и вспомогательный электроды на штативе.

5. Поставить микроячейку на подвижный столик и подвести под электроды.

6. Опустить измерительный электрод в электролитический ключ, а вспомогательный электрод - в гнездо крышки.

7. Подключить выводы электродов к соответствующим клеммам.

8. Переключатель рода работы поставить на рН.

9. Переключатель значений рН перевести в диапазон 4-9. По верхней шкале произвести отсчет показаний прибора, найденная величина будет характеризовать рН сыворотки крови.

Примечание. Получение сыворотки крови: в сухую центрифужную пробирку набрать 3,0·10^-3 л (3 мл) крови без стабилизатора. Поместить пробирку на водяную баню при температуре 37°С на 30-40 мин. Через 30-40 мин отсосать отделившуюся сыворотку.