А. Определение количества эритроцитов в крови человека

При определении количества эритроцитов кровь разводят в пробирке в 201 раз (≈200 раз) изотоническим (0,85%) или гипертоническим (3%) раствором хлорида натрия. В последнем эритроциты сморщиваются, становятся рельефными и лучше видны под микроскопом. Эритроциты считают в 5 больших квадратах (деленных на 16 маленьких), расположенных по диагонали сетки Горяева. Считают эритроциты, находящиеся внутри каждого маленького квадратика, а также на верхней и левой его границах. Найденное количество эритроцитов подставляют в формулу:

где х - количество эритроцитов в 1 л исследуемой крови; а - содержание эритроцитов в 5 больших (80 маленьких) квадратах; 1/4000 мм³ - объем одного маленького квадратика; 200 - степень разведения крови; 10⁶ - коэффициент для пересчета по международной системе единиц СИ.

Для работы необходимы: микроскоп, счетная камера, стеклянные палочки, пипетки от гемометра Сали, резиновая трубка со стеклянным наконечником (мундштук), градуированные пипетки, пробирки длиной 1·10^-1 м и диаметром 1·10^-2 м (10×1 см), скарификатор, спирт, вата, спиртовой раствор йода, 3% (0,85%) раствор хлорида натрия.

Ход работы. 1. В предварительно высушенную, чистую пробирку отмерить 4·10^-3 л (4 мл) разводящей жидкости и закрыть ее пробкой.

2. На тупой конец пипетки от гемометра Сали надеть мундштук. Скарификатором произвести укол в мякоть пальца. Взяв стеклянный наконечник в рот и погрузив кончик капиллярной пипетки в каплю крови, набрать точно 20 мм³ крови.

3. Осторожно выдуть кровь в пробирку с разводящей жидкостью, промыть ею пипетку и закрыть пробирку пробкой. Содержимое пробирки тщательно (но осторожно) перемешать, держа пробирку вертикально.

4. Концом круглой стеклянной палочки взять из пробирки, наклоняя ее, каплю крови и заполнить счетную камеру. После этого камеру надо накрыть покровным стеклом. При заполнении камеры необходимо обратить внимание на то, чтобы под покровным стеклом не было пузырьков воздуха и разведенная кровь не попадала в бороздки камеры. Лучше пользоваться шлифованным покровным стеклом, которое притирают к стеклу камеры до появления ньютоновых колец. Затем камеру заполняют разведенной кровью по принципу капиллярности.

5. Выждать 1 мин и поместить камеру на столик микроскопа. Под малым увеличением найти сетку счетной камеры и перевести тубус микроскопа на большое увеличение.

6. Произвести подсчет эритроцитов в 5 больших (80 маленьких) квадратах, расположенных по диагонали сетки, придерживаясь указанного выше правила.

7. Вычислить количество эритроцитов в 1 л неразведенной крови по формуле.

Б. Определение количества лейкоцитов в крови человека

При определении количества лейкоцитов кровь разводят в пробирке в 21 (≈20) раз разводящей жидкостью, которая состоит из 3-5% раствора уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим (жидкость Тюрка). Лейкоциты подсчитывают в 100 больших (1600 маленьких) квадратах сетки Горяева, неразделенных линиями.

Количество лейкоцитов в 1 л крови вычисляют по формуле:

где х - количество лейкоцитов в 1 л исследуемой крови; а - количество лейкоцитов, найденное при подсчете; ¹/₄₀₀ мкл - объем малого квадрата; 20 - степень разведения крови; 1600 - число малых квадратов; 10⁶ - коэффициент для пересчета по международной системе единиц СИ.

Для работы необходимы: микроскоп, счетная камера, стеклянные палочки, пипетки от гемометра Сали, мундштук, пипетка на 1·10³ л (1 мл), пробирки длиной 1·10^-1 м (10 см) и диаметром 1·10^-2 м (1 см), скарификаторы, спирт, вата, спиртовой раствор йода, разводящая жидкость.

Ход работы. 1. В предварительно высушенную, чистую пробирку отмерить 4·10^-4 л (0,4 мл) разводящей жидкости и закрыть ее пробкой.

2. Сделать укол скарификатором в мякоть пальца и набрать пипеткой от гемометра Сали 20 мм³ крови.

3. Выдуть кровь в пробирку с разводящей жидкостью, промыть ею пипетку, содержимое пробирки закрыть пробкой и осторожно перемешать при вертикальном положении пробирки.

4. Заполнить счетную камеру.

5. Под большим увеличением микроскопа сосчитать лейкоциты в 100 больших (1600 маленьких) квадратах.

6. Вычислить количество лейкоцитов в 1 л крови по формуле.