III. По степени очистки

По степени очистки препараты инсулина подразделяются:

1.Традиционные препараты инсулина

2. Высокоочищенные препараты инсулина

Антигенные свойства животного инсулина определяются не только отличительными аминокислотами, но и примесями в препарате (проинсулина, инсулиноподобных белков, белков большей молекулярной массы). При использовании традиционных способов очистки полностью освободиться от этих примесей не удается.

Современные методы очистки позволяют получить высокоочищенные препараты свиного инсулина. Примеси инсулиноподобных белков, белков с молекулярной массой 15000 и белков с молекулярной массой от 9000 до 12000 можно удалить в результате дополнительной очистки животного инсулина методом гель-хроматографии с выделением «пика» инсулина.

Монопиковый инсулин содержит незначительное количество проинсулина и инсулиноподобных белков. Лекарственные препараты монопикового инсулина отучественного производства обозначаются «МП», импортного производства «МР». Например: «СМП» - свиной монопиковый инсулин (очистка гелевой хроматографией – Химулин-М).

Монокомпонентные препараты инсулина вообще не содержат примесей белковых соединений, при их получении для выделения инсулина используюют аффинную хроматографию, в которой в качестве лиганда используют монокланальные антитела к инсулину свиньи. Перед этим предварительно инсулин очищают методом ионообменной хроматографии. Препараты высокоочищенного свиного инсулина промышленного производства выпускаются с 1973 года и обозначают «МС» или «МСК» – монокомпонентный (очистка ионообменной хроматографией). При применении монокомпонентных препаратов инсулина многие побочные эффекты устраняются.

Например: Монотард-МС

Актропид-МС

IV. По строению кристаллической решетки

По строению кристаллической решетки инсулины подразделяются на две группы: аморфные и кристаллические. Получение той или иной кристаллической модификации инсулина зависит от рН среды при окончательной очистке инсулина методом перекристаллизации. Как правило, препараты аморфного инсулина имеют среднюю продолжительность действия, препараты кристаллического инсулина имеют большую длительность действия.

Схема выделения инсулина по классической методике:

ВР – 1. Санитарная подготовка производства

Проводится по общим правилам (см. выше).

ВР – 2 Подготовка сырья и экстрагентов

Проводится по общим правилам (см. выше).

ТП – 3 Экстрагирование

Для извлечения инсулина из поджелудочной железы свиней используется способ бисмацерации. На первой ступени экстракции в качестве экстрагента используется спирт этиловый высокой концентрации (80-85%), так как сырье имеет высокую влажность, на второй ступени экстракции спирт этиловый 57% концентрации, подкисленный кислотой серной, хлористоводородной или ортофосфорной.

ТП – 4 Очистка извлечения

ТП – 4.1. Очистка от анионов кислот

Очистка от анионов кислот, используемых на стадии экстракции, проводится с помощью раствора кальция хлорида. Выпавший осадок отфильтровывают или отделяют с помощью центрифугирования.

ТП – 4.2. Очистка от белков

Очистка от белков осуществляется доведением до изоэлектрической точки (при t⁰ = 0⁰С) способом кислотно-щелочной обработки. Выпавший осадок отфильтровывают или центрифугируют.

ТП – 4.3. Очистка от жиров и остатков белков

Данная операция проводится путем упаривания излечения до 1/10 объема (при t⁰ = 30⁰С) и дальнейшем отстаивании его «на холоду» при температуре ниже 4 ⁰ С. От всплывших липидов и остатков белков освобождаются фильтрованием.

ТП – 5. Выделение инсулина сырца

Выделение инсулина сырца проводится путем высаливания 25 % раствором натрия хлоридаl или 40% раствором аммония сульфата. Гормон «сырец» всплывает, после чего его отделяют.

ТП – 6. Очистка инсулина сырца

ТП – 6.1 Растворение

Инсулин «сырец» растворяют в 50% этаноле

ТП – 6.2 Фильтрование

Освобождение от механических примесей проводится путем фильтрования.

ТП – 6.3 Переосаждение (перекристаллизация)

Дальнейшую очистку инсулина проводят также доведением до изоэлектрической точки из подкисленной воды добавлением щелочи, в результате чего инсулин выпадает в осадок.

ТП – 6.4 Фильтрование

Сбор осадка проводят с помощью фильтрования.

ТП – 6.5 Очистка от липофильных веществ

С целью очистки от липофильных веществ осадок промывают холодным эфиром или ацетоном.

ТП – 7 Получение лекарственной формы

ТП – 7.1 Растворение

Препарат растворяют в воде и подкисляют до значения РН 3,0-3,5.

ТП – 7.2 Стандартизация

Стандартизуют на кроликах по способности понижать содержание сахара в крови и др. нормируемым показателям.

ТП – 7.3 Стерилизация

Полученный раствор пропускают через бактериальные фильтры. Добавляют консерванты (фенол 0,25-0,3%) и солюбилизатор (глицерин 1.6-1,8%).

ТП – 7.4 Розлив и укупорка

Раствор разливают во флаконы в асептических условиях 5, 10мл закрывают под обкатку.

УМО – 8 Фасовка, упаковка, маркировка

Данная стадия проводится согласно существующей НД.

Применяют при лечении сахарного диабета (в/м инъекции).