Групповые лиганды, широко используемые в различных вариантах аффинной хроматографии

Лиганд	Определяемый продукт
Алкильная или арильная группировка Функциональные группы органических красителей Агенты хелирующие металлы Активированные SH-группы	Различные белки То же То же Белки с SH-группами

При этом одни и те же вещества могут выступать и в роли лигандов и в роли определяемых продуктов.

Различают несколько вариантов аффинной хроматографии:

1.Аффинная хроматография или аффинная адсорбция на геле (достаточно широко используется);

2.Аффинная преципитация – внедряется;

3.Аффинное разделение – внедряется.

1.Аффинная хроматография или аффинная адсорбция на геле (достаточно широко используется)

Данная разновидность аффинной хроматографии в настоящее время используется наиболее широко. Так, например, при выделении ферментов, сорбентом служит гель типа агарозы, к которому ковалентно присоединен подходящий лиганд, например субстрат фермента. При пропускании через колонку извлечения фермент взаимодействует с содержащимся субстратом, что приводит к его удерживанию. После насыщения колонки фермент элюируют с нее подходящим растворителем. Разделение по методу афинной хроматографии может быть основано на других специфических взаимодействиях: фермента с ингибитором, гормона с рецептором и т.д.

2. Аффинная преципитация

В данном случае лиганды прикрепляют к растворимому носителю. При добавлении к данной системе смеси, содержащей соответствующий белок, образуется его комплекс с лигандом, который выпадает в осадок сразу после его формирования или после введения раствора электролита. Осадок отделяется и при необходимости из комплекса выделяется чистое вещество.

3.Аффинное разделение

Основано на использовании двух водорастворимых полимеров. Один полимер (например, полиэтиленгликоль) несет специфические лиганды, другой полимер обладает сродством к остальным, примесным компонентам. Так например, необходимо отделить ферменты от смеси белков, нуклеиновых кислот, фрагментов клеточных структур. Для этого используют смесь полиэтиленгликоля, несущую молекулы лиганда (субстрат, кофактор, ингибитор) и полярный декстран:

Ф, Б, НК + ПЭГ (Л) + ПД = ПД•Б•НК + ПЭГ (Л)•Ф

Где:

ПЭГ (Л) - полиэтиленгликоль, несущий молекулы лиганда (субстрат, кофактор, ингибитор);

Ф, Б, НК – ферменты, белки, нуклеиновые кислоты;

ПД - полярный декстран (растворимый);

Дальнейшее разделение на основании различной растворимости образованных комплексов.

Аффинное разделение является самым эффективным способом аффинной очистки.

ТП – 6. Стандартизация

Стандартизация максимально очищенных органопрепаратов для парентерального применения проводится по тем же показателям, что и других химических соединений. Особенностью является то, что очень часто применяются биологические методы стандартизации, основанные на специфическом действии соединений. Например: препараты инсулина стандартизуют по способности снижать содержание сахара у кроликов; препараты питуитрина – по способности вызывать сокращение изолированного рога матки морской свинки.

УМО – 7. Фасовка, упаковка, маркировка

Является предварительной стадией, т.к. ввиду нестойкости соединений сразу идет передача готового, стандартного продукта на изготовление лекарственных форм.