- •Физические и физико-химические методы анализа
- •4. Температура плавления (офс 42-0034-07)
- •1. Капиллярный метод
- •2. Открытый капиллярный метод
- •3. Метод мгновенного плавления
- •4. Метод каплепадения
- •5. Температура затвердевания (офс 42-0035-07)
- •6. Температурные пределы перегонки и точка кипения (офс 42-0036-07)
- •Определение температурных пределов перегонки
- •Поправочный коэффициент для приведения к нормальному значению
- •Определение точки кипения
- •7. Плотность (офс 42-0037-07)
- •Метод 1
- •Метод 2
- •Метод 3
- •Метод 4
- •8. Вязкость (офс 42-0038-07)
- •Измерение вязкости на капиллярных вискозиметрах
- •Измерение вязкости на ротационных вискозиметрах
- •Измерение вязкости на вискозиметре с падающим шариком
- •Р ис. 8.4. Вискозиметр с падающим шариком
- •10. Комплексонометрическое титрование
- •Методики определения катионов
- •10. Рефрактометрия (офс 42-0040-07)
- •11. Метод сжигания в колбе с кислородом (офс 42-0089-08)
- •11. Поляриметрия (офс 42-0041-07)
- •11. Поляриметрия (офс 42-0041-07)
- •12.2. Спектрометрия в инфракрасной области
- •Идентификация с использованием стандартных образцов
- •Идентификация с использованием эталонных спектров
- •Минимумы пропускания и допустимые пределы для пленки полистирола
- •Примеси в газах
- •Химические методы анализа
- •18. Определение азота в органических соединениях методом къельдаля (офс 42-0052-07)
- •1. Метод Къельдаля
- •2. Микрометод Къельдаля
- •3. Метод Къельдаля (обратное титрование)
- •19. Определение воды (офс 42-0086-08)
- •1. Метод к. Фишера (полумикрометод)
- •2. Микроопределение воды (кулонометрический метод)
- •3. Определение воды методом дистилляции
- •1.2. Тонкослойная хроматография (офс 42-0094-09)
- •Основные приборы и материалы:
- •Хроматографические пластинки
- •Хроматографические камеры
- •Подвижные фазы (пф)
- •Нанесение проб
- •Способы элюирования
- •Восходящая хроматография
- •Горизонтальная хроматография
- •Способы обнаружения
- •Высокоэффективная тонкослойная хроматография (вэтсх)
- •1.3. Газовая хроматография (офс 42-0095-09)
- •Подвижная фаза
- •Ввод пробы
- •Колонки
- •Детекторы
- •Неподвижные фазы
- •Методика
- •1.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография (офс 42-0096-09)
- •Насосная система
- •Смесители
- •Инжекторы
- •Хроматографическая колонка
- •Неподвижная фаза (сорбент)
- •Детекторы
- •Подвижная фаза
- •Система сбора и обработки данных
- •Перечень условий хроматографирования, подлежащих указанию
- •Ионообменная и ионная вэжх
- •Эксклюзионная вэжх
- •Ультраэффективная жидкостная хроматография
- •Общие фармакопейные статьи
- •Физические и физико-химические методы анализа
- •1. ХроматогрАфия (офс 42-0092-09)
- •Хроматограмма и хроматографичеcкие параметры
- •Интерпретация хроматографических данных
- •Расчет содержания определяемого компонента
- •20. Нитритометрия (офс 42-0054-07)
- •Биологические методы контроля
- •25. Аномальная токсичность (офс 42-0060-07) Основной тест
- •Тест для вакцин и сывороток
- •26. Пирогенность (офс 42-0061-07)
- •Материалы и оборудование
- •Проведение испытания
- •Учет результатов
- •27. Бактериальные эндотоксины (офс 42-0062-07)
- •Подтверждение заявленной чувствительности лал-реактива
- •28. Испытание на гистамин (офс 42-0063-07)
- •Подготовка изолированного органа
- •Приготовление разведений стандартного образца и испытуемого лекарственного средства1
- •1. Разведения стандартного образца
- •2. Разведение испытуемого препарата (ип)
- •Регистрирующая система
- •Проведение опыта
- •1. Адаптация изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки к субмаксимальной дозе гистамина
- •2. Испытание ип на гистамин
- •29. Испытание на депрессорные вещества (офс 42-0064-07)
- •Подготовка животного к опыту
- •Приготовление разведений стандартного образца испытуемого препарата (ип)
- •Проведение опыта
- •1. Условия проведения испытания
- •2. Определение антимикробного действия
- •2.1. Устранение антимикробного действия
- •3. Испытание на стерильность
- •3.1. Отбор образцов для анализа
- •3.3. Метод мембранной фильтрации
- •3.3.1. Пробоподготовка водных растворов
- •3.3.2. Пробоподготовка жидкостей, не смешивающихся с водой
- •3.3.3. Пробоподготовка лекарственных средств, растворимых в изопропилмиристате (ипм) (и12)
- •3.5. Валидация метода мембранной фильтрации при контроле лекарственных средств, обладающих антимикробным действием
- •3.6. Метод прямого посева
- •3.6.1. Пробоподготовка нефильтрующихся жидкостей
- •3.6.2. Пробоподготовка лекарственных средств, нерастворимых в изопропилмиристате (ипм) (и12)
- •3.6.3. Пробоподготовка твердых лекарственных форм
- •3.7. Условия инкубации посевов
- •3.8. Интерпретация результатов испытания
- •4. Питательные среды
- •4.1. Состав и приготовление питательных сред
- •4.2. Стерильность питательных сред
- •4.3. Определение ростовых свойств питательных сред
- •4.4. Хранение питательных сред
- •1. Определение антимикробного действия лекарственного средства
- •1.2. Работа с тест-микроорганизмами
- •1.3. Проведение испытания
- •1.4. Учет и интерпретация результатов
- •1.5. Способы устранения антимикробного действия лекарственных средств
- •2. Особенности отбора и подготовки образцов для анализа
- •2.1. Твердые лекарственные формы
- •2.2. Мягкие лекарственные формы
- •2.3. Жидкие лекарственные формы
- •2.4. Аэрозоли
- •2.5. Трансдермальные пластыри
- •2.6. Лекарственные растительные средства
- •3. Методы количественного определения аэробных бактерий и грибов
- •3.2. Количественное определение микроорганизмов
- •3.2.2. Метод мембранной фильтрации
- •3.2.3. Метод наиболее вероятных чисел (нвч)
- •4. Определение отдельных видов бактерий
- •4.1. Энтеробактерии и подобные им грамотрицательные микроорганизмы
- •4.2. Выявление Escherichia coli
- •4.3. Выявление бактерий рода Salmonella
- •4.4. Выявление Pseudomonas aeruginosa
- •4.5. Выявление Staphylococcus aureus
- •5. Биохимические тесты для идентификации микроорганизмов
- •5.1. Тест на наличие цитохромоксидазы
- •5.2. Тест на наличие индола
- •5.3. Тест на наличие коагулазы (реакция плазмокоагуляции)
- •6. Питательные среды. Определение ростовых и селективных свойств
- •6.1. Рекомендуемые растворы и питательные среды
- •6.2. Ростовые и селективные свойства питательных сред
- •Характеристика культуральных свойств тест-микроба
- •Тест-микроорганизмы и условия для биологического определения активности антибиотиков
- •Состав буферных растворов
- •Приложение 1
- •Приложение 2
- •3. Спектрометрия в ближней инфракрасной области (офс 42-0099-09)
- •Факторы, влияющие на результаты измерений
- •Идентификация
- •Количественный анализ
Характеристика культуральных свойств тест-микроба
Название тест-микроба |
При росте на плотной питательной среде |
При росте на жидкой питательной среде |
При микроскопическом изучении мазка агаровой культуры, окрашенной по Граму |
||
условия выращивания |
описание культуры |
условия выращивания |
описание культуры |
||
Staphylococcus aureus 209 Р |
Среда № 1, Т° (36 ± 1) °С, 18-20 ч, затем при комнатной темпе- ратуре 24 ч |
Гладкие с ровными краями колонии, с рав- номерной золотистой пигментацией |
Мясо-пептонный бульон, рН 7,2-7,4, 18-20 ч |
Равномерное помутне- ние бульона без пленки и слизистого осадка на дне |
Однородные по величине и расположению в виде гроздьев кокки с хорошо выраженной грамположи- тельной окраской |
Candida utilis ЛИА-01 |
Среда № 3, Т° (30 ± 1) °С, 48 ч |
Круглые, кремового цвета с матовой по- верхностью колонии с ровными краями |
МПБ, рН 7,2-7,4 с 1 % глюкозой, 18-20 ч |
Рост в виде равномер- ной мути и осадка на дне |
Овальные, иногда с отростками клетки; распо- ложены отдельно, цепоч- ками или группами |
Bacillus subtilis, var. Л2 |
Среда № 1, Т° (36 ± 1) °С, 18-20 ч |
Колонии желтоватого цвета, круглой формы, влажно блестящие с шагреневой поверхно- стью, слегка зазубрен- ными краями и приподнятым центром |
МПБ, рН 7,2-7,4, 18-20 ч |
Рост в виде пленки с осадком на дне |
Палочки с закругленными краями, располагающиеся отдельно и цепочками c хорошо выраженной грам- положительной окраской |
Bacillus subtilis ATCC 6633 |
Среда № 1, Т°(36 ± 1)°С, 18-20 ч |
Мелкие сероватые ко- лонии с зубчатым краем |
МПБ, рН 6,8-7,0, 18-20 ч |
Рост в виде пленки с осадком на дне |
Тонкие палочки, распо- лагающиеся отдельно или цепочками, с хорошо вы- раженной грамположи- тельной окраской |
Продолжение таблицы 33.1 |
|||||
Bacillus cereus, var. mycoides 537 |
Среда № 2, Т°(36 ± 1) °С, 18-20 ч |
Шероховатые колонии с краем, сформирован- ным из переплетаю- щихся волокон |
МПБ, рН 7,8-8,0, 18-20 ч |
Морщинистая пленка; вся среда прозрачная, без осадков |
Палочки с закруглен- ными концами, распола- гающиеся отдельно или цепочками, с хорошо вы- раженной грамположи- тельной окраской |
Bacillus cereus, var. mycoides HB |
Среда № 1, Т° (36 ± l) °C, 18-20 ч |
Гладкие колонии с ровными краями и сферической поверхностью |
МПБ, рН 6,8-7,0, 18-20 ч |
Равномерное помутне- ние бульона без образования пленки и осадка |
Тонкие с закругленными концами палочки, распо- лагающиеся отдельно или короткими цепочками, с хорошо выраженной грам- положительной окраской |
Bacillus pumilus NCTC 8241 |
Среда № 1, Т°(36 ± 1) °С, 18-20 ч |
Мелкие серовато-голу- бого цвета колонии с зазубренными краями и приподнятым центром |
МПБ, pН 7,2-7,4, 18-20 ч |
Равномерное помутне- ние бульона без образо- вания пленки и осадка |
Тонкие, мелкие палочки с закругленными концами, располагающиеся от- дельно или короткими цепочками, с хорошо вы- раженной грамположи- тельной окраской |
Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 |
МПА, рН 7,2-7,4 Т°(36 ± 1) °С, 18-20 ч |
Мелкие, мутные, белые, слегка выпу- клые, фарфоровидные колонии |
МПБ, рН 7,2-7,4 |
Заметное помутнение, серая пленка, тягучий осадок |
Одиночные, короткие, тонкие палочки с хорошо выраженной грамотрица- тельной окраской |
Pseudomonas aeruginosa NCTC 2134 |
МПА, рН 7,2-7,4, Т°(36 ± 1) °С, 18-20 ч |
Широкие, расплывча- тые, прозрачные с неровным краем колонии |
МПБ, рН 7,2-7,4 |
Заметное помутнение, толстая пленка, среда может приобретать жел- товато-зеленую окраску |
Одиночные палочки либо короткие цепочки с хорошо выраженной грамотрицательной окраской |
чашки при комнатной температуре в течение 1-2 ч. Затем чашки инкубируют при температуре (36 ± 1)°С в течение 16-18 ч.
Диаметры зон угнетения роста тест-микроба при помощи соответствующих приборов измеряют с точностью до 0,1 мм.
Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием трехдозного варианта метода диффузии в агар. Для проведения испытания готовят три раствора стандартного образца (С1, С2, С3) и три раствора испытуемого образца (И1, И2, И3). Концентрации растворов, содержащих малую, среднюю и большую дозы, должны находиться между собой в кратном соотношении (1:2:4).
При необходимости это соотношение может быть изменено. Концентрация раствора С2 должна быть близка к контрольной концентрации раствора стандартного образца, указанной в табл. 33.2.
Все растворы стандартного и испытуемого образцов вносят в цилиндры или лунки одной чашки Петри таким образом, чтобы растворы с большими концентрациями не соприкасались между собой. Предлагаемый вариант закапывания – C1И3C2И1С3И2.
Число чашек, используемых в каждом опыте, должно быть достаточным для обеспечения статистической достоверности результатов, но не менее 6 чашек.
Последовательность внесения растворов стандартного и испытуемого образцов в цилиндры или лунки каждой чашки должна быть следующей: первым вносят раствор с малой концентрацией стандартного образца (C1) и соответствующий раствор испытуемого образца (И1). Затем растворы со средней концентрацией (С2 и И2), последними вносят растворы с большими концентрациями (С3 и И3).
Расчет активности и дисперсионный анализ при использовании трехдозного варианта метода диффузии в агар осуществляется в соответствии со статьей «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний». Растворы определенных концентраций стандартного (С) и испытуемого (И) образцов обозначены Ds и Du соответственно.
Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием стандартной кривой. Постановка о п ы т а. В день постановки анализа из основного раствора готовят пять рабочих растворов стандартного образца C1, С2, С3, С4, С5 с концентрациями, увеличивающимися в геометрической прогрессии (Z), обычно в соотношении 1:1,25. Средняя концентрация (С3) является контрольной и должна быть близка к концентрации, указанной в табл. 33.2: концентрация C1 – наименьшая, C5 – наибольшая. Для исследования растворов каждой концентрации (кроме контрольной) используют по три чашки. Раствор контрольной концентрации С3 закапывают в три цилиндра (или лунки) каждой из взятых в опыт чашек, в три другие цилиндра (лунки) закапывают раствор одной из концентраций стандартного образца, чередуя его с раствором контрольной концентрации. Таким образом, для построения стандартной кривой используют 12 чашек.
Таблица 33.2