Сущность метода

Метод основан на определении количества бактерий и степени распада мышечной ткани путем микроскопирования мазков-отпечатков, а также на обнаружении бактерий коли-тифозной группы и протея.

Из образца мяса готовят не меньше трех мазков - отпечатков: один из поверхностного слоя с глубины 1-2 мм, другой с глубины 2-2,5 см и третий – 3-3,5 см. Стерильно вырезают кусочки мяса, с указанных глубин и к срезанным сторонам прикладывают обожженные предметные стекла.

Полученные препараты – отпечатки после подсушивания и фиксации окрашивают по Грамму и микроскопируют. Просматривают не менее пяти полей зрения. В каждом поле подсчитывают число кокковых и палочковидных микробов и вычисляют их среднеарифметическое количество в одном поле зрения.

Результаты бактериоскопического исследования мяса оцениваются в соответствии с ГОСТ.

Для обнаружения Proteus vulgaris делают посев в конденсационную воду свежескошенного агара. Наличие тонкого налета с голубоватым оттенком, ползущего из конденсационной воды вверх по поверхности скошенного агара и гнилостного запаха, указывает на присутствие протея. Наличие протея подтверждают обнаружением при микрокопировании грамотрицательных подвижных палочек.

Аппаратура, материалы и реактивы

Образцы мяса; весы лабораторные 3-го класса точности; пробирки со скошенным МПА ;предметные стекла; красители по Граму; спирт этиловый; микроскоп марки МБИ-3; скальпель ; термостат; пинцет.

Методика работы

1. Сделать стерильные надрезы на уровнях 2 см, 2,5 см, 3,5 см вырезать стерильно кусочки мяса. Чистое обожженное предметное стекло плотно приложить к исследуемому образцу.

2. Полученный препарат–отпечаток высушить на воздухе, фиксировать пламенем горелки и окрасить по Граму. Если препарат жирный, фиксацию провести смесью спирта и эфира (1:1).

3. Микроскопировать окрашенные препараты не менее чем в 5 полях зрения. Определить число кокков и палочек на 1 поле зрения, количество грамотрицательных палочек.

4. Для обнаружения Proteus vilgaris стерильно отбирают кусочек мяса со спичечную головку и вносят в конденсационную воду свежескошенного агара. Посевы помещают в термостат при 37С°. По истечении 24-48 часов просматривают посевы. Протей образует тонкий налет с голубоватым оттенком, ползущий из конденсационной воды вверх по поверхности скошенного агара. Посев издает гнилостный запах. Наличие протея подтверждают обнаружением при микрокопировании грамотрицательных подвижных палочек.

Обработка результатов

1. Определить среднее число кокковых и палочковидных форм бактерий на 1 поле зрения микроскопа.

2. Отметить отношение обнаруженных бактерий к окраске по Граму и сделать вывод о возможном наличии бактерий коли-тифозной группы.

3. Отметить наличие протея в исследуемом образце мяса по наличию голубоватого тонкого налета, ползущего из конденсационной жидкости по скошенному агару, и гнилостному запаху.

4. Результаты опыта записать.

Оценка результатов

В соответствии с ГОСТ-ом результаты бактериоскопического исследования мяса оцениваются следующим образом:

- мясо свежее – в мазках – отпечатках с поверхностного слоя обнаруживаются единичные кокки и палочки, окрашенные грамположительно, а из глубоких слоев не обнаруживаются;

- сомнительной свежести - из поверхностного слоя обнаруживаются несколько десятков м.о., из глубоких не более 20-30 бактерий, встречаются грамположительные и грамотрицательные;

- мясо несвежее – все поле зрения усеяно м.о. с преобладанием грамотрицательных палочек в мазках, как с поверхностного, так и с глубокого слоя.

- сделать вывод о наличии бактерий коли-тифозной группы и протея.