- •Глава 1
- •Цвет поглощаемого излучения Дополнительный цвет (наблюдаемый цвет раствора)
- •1.3. Флюориметры (люминометры)
- •Глава 2
- •2.1. Подготовка посуды к анализам
- •2. Приготовление индикаторов
- •Глава 3
- •3. Материал для исследования, аитикоагулянт, условия хранения образца, сроки анализа
- •Материал для исследования, антикоагулянт
- •2 Нед в замороженном состоянии. Защищают от солнечного света
- •3 Ч проба стабильна в охлажденной крови. Плазму и сыворотку стабилизируют мета-фосфорной кислотой (6 г/100 мл), тху, или три-хлоруксусной (10 г/100 мл) кислотой. Хранят при 20 "с 21 сут
- •Материал для исследования, антикоагулянт
- •6 Ч при комнатной температуре, 1 нед при 4 °с, 6 мес при минус 70 °с
- •4. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у животных
- •Три первые цифры количества эритроцитов в 1 мкл'
- •7 . Рабочие калибровочные растворы для определения калия в эритроцитах
- •NaCl о сновные калибровочные растворы, мл
- •12. Приготовление разведений основного калибровочного раствора
- •13. Содержание иммуноглобулинов (ig) в сыворотке крови в зависимости от оптической плотности
- •Содержание ig, мг/мл
- •Содержание ig, мг/мл
- •VI. Класс зрелых
- •Р 4 5 6 7 ис. VI. Поражение крови:
- •14. Пересчет содержания иммунных белков в сыворотке крови (н. И. Блинов), мг/ мл
- •15. Разведения рабочего калибровочного раствора креатинина
- •16. Смеси реактивов для определения билирубина в сыворотке крови
- •17. Разведения билирубина для построения калибровочного графика
- •18. Схема постановки реакции для определения билирубина
- •19. Разведения для построения калибровочного графика
- •3.3.6.1. Выдел ениелипидов из биологических субстратов
- •20. Приготовление рабочих растворов для построения калибровочного графика
- •Стандартный раствор триолеииа, мл
- •Концентрация общих липидов, мг%
- •3.3.6.2. Количественное определение классов липидов химическими методами
- •21. Приготовление растаоров для ностроеиия калибровочного графика
- •22. Приготовление рабочих калибровочных растворов
- •Концентрация триацилглицеринов, мкг/мл
- •3.3.6.3. Разделение липидов на классы методом тонкослойной хроматографии (тсх)
- •24. Состав подвижных фаз и соотношение в пих отдельных компонентов, объем/объем
- •25А. Значение величины Rf для фосфолипидов нри разделении их в разных системах
- •3.3.6.4. Количественное определение классов липидов инструментальным методом
- •3.3.6.5. Определение жирнокислотного состава липидов методом газожидкостной хроматографии (гжх)
- •30. Пример расчета поправочного коэффициента
- •31. Порядок приготовления растворов для определения активности кф 1.15.1.1
- •Количество мкг рибофлавина в 1 мл стандарта- (л - л)
- •3.3.10. Методы определения микроэлементов
- •33. Разведения натрия пирувата для построения калибровочного графика
- •38. Приготовление стандартных растворов
- •Глава 4
- •42. Зависимость количества соматических клеток от скорости вытекания смеси молока с реактивом «Мастоприм»
- •43. Относительная плотность мочи, г/мл или кг/л
- •44. Приготовление растворов
- •Стандартный раствор альбумина, мл
- •Концентрация белка, г/л
- •Глава 5
- •5.6. Болезни органов пищеварения
- •5.7. Болезни печени и желчных путей
- •Глава 6
- •Глава 7
- •50. Показатели для определения качества искусственно высушенных травяных кормов
- •7.1.7. Оценка качества мучнистых кормов
- •Не допускается
- •5 5. Требования гост р 51551—2000 к питательности добавок, норма на день
- •100 Гост 13496.9
- •7.2.2. Определение гигроскопической воды
- •Объем стандартного раствора фосфора, см3
- •Глава 8
- •8.9. Методы определения алкалоидов
- •8.10. Методы определения цианидов
- •Глава 9
- •Глава 10
- •6 3. Показатели эритроцитопоэза у жеребят (в. И. Головаха, 2003)
- •6 5. Показатели крови цыплят-бройлеров (и. М. Карпуть, 1993)
- •66. Популяционный состав эритроцитов клинически здоровых телят, % (в. П. Москаленко, 1999)
- •68. Динамика морфологического состава крови у клинически здоровых телят (в. И. Головаха, 1995)
- •70. Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови телят (в. И. Головаха, 1995)
- •71. Состав белков сыворотки крови телят (р. Б. Флюнт с соавт., 2002)
- •72. Состав белков сыворотки крови телят, г/л (о. М. Дацыив, 2002)
- •73. Содержание белковых фракций в сыворотке крови телят и молодняка (н. И. Блинов, 1985)
- •74. Содержание общего белка и альбуминов у жеребят украинской верховой породы (в. И. Головаха, 2003)
- •75. Содержание белковых фракций в сыворотке крови телят 1—3-месячного возраста, г/л (н. В. Кознй, 2003)
- •7 7. Содержание общего количества иммуноглобулинов п их классов в сыворотке кровп телят, мг/мл (в. И. Головаха, 1995)
- •79. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке кровн ягнят, мг/мл (ю. Н. Федоров, 1985)
- •80. Содержание иммуноглобулинов у поросят, мг/мл (т. М. Setcvage, т. В. Kim, 1976; т. Yabiki et al., 1974)
- •1 День 1 мес
- •8 3. Содержание иммуноглобулинов у собак, мг/мл (м. J. Day, w. J. Penhale, 1988; н. Y. Reynolds, j. S. Jonson, 1970)
- •87. Показатели кислотно-щелочного состояния крови телят в неоиатальный период (т. В. Любецкая, 2000)
- •89. Содержание билирубина и мочевины у жеребят (в. И. Головаха, 2003)
- •Дней 11,2-55,0 (24,4 ± 2,4) 10 дней 13,0-26,5 (18,0 ± 0,82) 20дней 8,0-21,0 (17,0 ± 1,25) 30 дней 7,2-20,8 (13,0 ± 0,64) 3 мес 8,4-17,0 (13,7 ± 0,84)
- •9 1. Активность ферментов у жеребят украинской верховой породы (в. И. Головаха, 2003)
- •7 14 21 28 60 90 120 150 180 270 Взрослые
- •93. Некоторые показатели функционального состояния печени у собак служебных пород [9]
- •97. Показатели обмена железа в организме норосят (м. Г. Николадзе, 2002)
- •1. Некоторые единицы международной системы (си) и их обозначения
- •М ккат/л нкат/л Ед/л Ед/л
- •Ед/л Ед/л мккат/л нкат/л
- •Глава 1. Физические и физико-химические принципы использования аппаратуры в лабораторной клинической диагностике. В. Э. Новиков 5
- •Глава 3. Лабораторные клинические методы исследования крови. И. Л. Кондрахин, а. В. Архипов 43
- •3.3.1. Методы определения кислотно-основного равновесия (кор) ... 66
- •3.3.2. Определение резервной щелочности в плазме крови диффузным методом по и. П. Кондрахину 67
- •3.3.3. Методы оценки состояния водно-электролитного
- •3.3.4. Методы оценки состояния белкового обмена 88
- •3.3.5. Методы оценки состояния углеводного обмена 117
- •3.3.6. Методы оценки состояния липидного обмена. А. В. Архипов. . . . 133
- •3.3.6.1. Выделение липидов из биологических субстратов 134
- •3.3.6.2. Количественное определение классов липидов
- •3.3.9. Методы определения витаминов. И. П. Кондрахин 186
- •3.3.10. Методы определения микроэлементов. И. П. Кондрахин 204
- •3.3.11. Методы определения активности ферментов.
- •3.3.12. Определение нитратов и нитритов в кормах, крови
- •Глава 4. Методы клинического анализа. И. П. Кондрахин 253
- •4.1. Исследование молока (молозива) 253
- •4.2. Клинический анализ мочи 260
- •Глава 5. Использование лабораторных и клинических тестов для диагностики внутренних болезней. И. П. Кондрахин 288
- •Глава 6. Методы исследования содержимого рубца.
- •Глава 7. Методы оценки качества кормов. А. В. Архипов 335
- •Глава 8. Методы токсикологического исследования.
- •Глава 9. Иммуноферментные методы определения
- •Глава 10. Физиологические особенности гомеостаза молодняка. В. И. Левченко 463
- •Иван Петрович Кондрахин, Алексей Васильевич Архипов, Владимир Иванович Левченко, Герман Александрович Таланов, Людмила Александровна Фролова, Виктор Эммануилович Новиков
- •Почтовый адрес: 129090, Москва, Астраханский пер., д. 8. Тел. (095) 280-99-86, тел./факс (095) 280-14-63, e-mail: koloss@koloss.Ru, наш сайт: www.Koloss.Ru
75. Содержание белковых фракций в сыворотке крови телят 1—3-месячного возраста, г/л (н. В. Кознй, 2003)
Фракция белков
Содержание
S-фракция
IgA
IgG
Гаптоглобин
Трансферин
Церулоплазмин
Постальбумины
Альбумины
Преальбумины
1,6-4,0 (2,56 ± 0,19) 4,0-8,5 (5,64 ± 0,27) 8,0-17,0 (11,8 ± 0,5) 1,5-6,0 (3,1 ± 0,30) 2,0-7,5 (4,6 ± 0,42) 1,2-2,0 (1,6 ± 0,06) 2,5-8,5 (5,0 ± 0,40) 20,0-38,0 (28,0 ±1,12) 0,7-1,5 (1,0 ± 0,06)
Фракция а-глобулинов включает две подфракции — ар и а2-глобулины. Количество их определяется суммарно или раздельно (см. табл. 70—72). Суммарное среднее содержание ар и а2-глобули-нов, по данным разных авторов [8, 18, 36], почти не отличается, а-Глобулины называются еще белками «острой фазы», потому что количество их возрастает при острых воспалительных процессах. В эту фракцию относятся С-реактивный белок (в норме его количество составляет 0—10 мг/л), церулоплазмин, гаптоглобин, а^ан-титрипсин, а2-макроглобулин. Содержание некоторых из этих белков приведено в таблице 75 [16].
Церулоплазмин является поздним белком острой фазы воспаления. Он катализирует окисление Fe2+ до Fe . Содержание церу-лоплазмина у телят 1—3-месячного возраста составляет 1,2—2,0 (1,6 ± 0,06) г/л, у больных бронхопневмонией телят количество его увеличивается (Козий Н. В., 2003).
а]-Антитрипсин (ААТ) — ингибитор протеиназ. Он обеспечивает почти 90 % антитрипсиновой активности сыворотки крови, ин-гибирует функции эластазы, которая выделяется сегментоядерны-ми нейтрофилами при фагоцитозе. Среднее количество ААТ в сыворотке крови телят составляет 85,9 ± 2,39 мкмоль/л, а у больных бронхопневмонией — 77,3 ± 2,65 мкмоль/л [16].
аг-Макроглобулин (AMG) — ингибитор таких протеиназ, как трипсин, химотрипсин, тромбин, плазмин и каликреин. Проте-иназы связываются с AMG, и в течение нескольких минут комплекс элиминируется из плазмы крови. Содержание AMG в сыворотке крови телят составляет 3,0 ± 0,2 г/л [16].
Гаптоглобин (НАР) связывает гемоглобин, освобождающийся при гемолизе. Содержание его в сыворотке крови телят, по данным Н. В. Козий, составляет 1,1—6,0 (3,1 + 0,30) г/л, по данным И. М. Карпутя — 1,8 ± 0,1 г/л. У больных бронхопневмонией его количество увеличивается.
Трансферин (TRF) принадлежит к р-глобулинам и выполняет функцию основного белка, транспортирующего железо до костного мозга. Синтезируется преимущественно в печени. Содержание в сыворотке крови телят составляет 2,0—7,5 (4,6 ± 0,42) г/л [16], по данным И. М. Карпутя [29], — 3,7 + 0,3 г/л. Увеличивается при бронхопневмонии телят и дефиците железа.
Фракция р-глобулинов при электрофорезе в агаровом геле подразделяется на две подфракции — Рр и р2-глобулины, суммарное среднее содержание которых по различным источникам в течение первых 3 мес жизни мало отличается (см. табл. 71—73).
Фракция у-глобулинов содержит основное количество иммуноглобулинов, уровень которых определяется морфологической зрелостью и функциональной полноценностью иммунореактивной ткани. Низкий уровень у-глобулинов отмечают у новорожденных телят, особенно в первый день жизни: по данным В. И. Головахи [6], он равен 0,8—6,0 (3,3 ± 0,6) г/л и составляет лишь 8,2 % общего белка. На 2—3-й дни количество у-глобулинов увеличивается в 3 раза и составляет почти 1/4 общего белка. Поддерживается этот уровень в первую декаду жизни. На 20—30-й дни жизни телят их содержание уменьшается по сравнению с 10-дневными, а к 3-месячному возрасту начинают синтезироваться у-глобулины, поэтому общее количество их возрастает (см. табл. 71—73).
10.3. ОСОБЕННОСТИ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ИММУННОЙ РЕАКТИВНОСТИ МОЛОДНЯКА
Устойчивость организма к заболеваниям зависит от состояния естественной резистентности и иммунной реактивности. Резистентность — это состояние защитных и приспособительных механизмов организма, способных противостоять различным неблагоприятным факторам окружающей среды, т. е. вирусам, бактериям, простейшим. Резистентность условно разделяют на неспецифическую и специфическую (иммунитет). Неспецифическая — это общая естественная наследственная устойчивость организма. Она определяется состоянием кожных покровов и слизистых барьеров, наличием бактерицидных субстанций в кожных складках; факторами, которые обеспечивают гомеостаз организма; кислотностью желудочного сока; активностью пищеварительных ферментов; фагоцитозом микро- и макрофагов; наличием в крови и других жидкостях организма комплемента, лизоцима, пропердина, интерферона и других ингибиторов; постоянностью микрофлоры и уровня белка.
Специфическая резистентность — это невосприимчивость организма против возбудителей инфекционных и паразитарных болезней или токсинов [38]. Устойчивость животных к неблагоприятным факторам внешней среды, в том числе и к возбудителям инфекционных болезней, обусловлена комплексом неспецифических и специфических защитных факторов. Естественные факторы резистентности филогенетически появились раньше, позже возникли специфические факторы защиты. Такая же последовательность формирования резистентности имеет место и в онтогенезе.
Резистентность животных обусловлена их реактивностью, которая характеризуется способностью организма отвечать соответствующими реакциями на действие факторов окружающей среды. В основе специфической резистентности лежит иммунная реактивность, т. е. ответная реакция организма на действие специфических антигенов (микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности).
Иммунная реактивность обеспечивается функцией иммунной системы, основной задачей которой является распознавание, взаимодействие и удаление из организма чужеродных клеток и других субстанций, которые проникли из внешней среды или образовались в организме вследствие мутагенеза или патологического процесса в клетках и тканях [38].
К центральным органам иммуногенеза у млекопитающих относится костный мозг, тимус, а у кур — тимус и фабрициева сумка.
У телят закладка тимуса происходит на 6—7-й неделях гестации, в тимусе 3-месячного плода четко разграничиваются кора и мозговая часть, к концу 3-го месяца завершается образование телец Гассаля. У 2,5—3-месячного плода селезенка, костный мозг и лимфатические узлы интенсивно заселяются лимфоцитами [25, 26]. Первые лимфоциты в периферической крови появляются на 2-м месяце гестации, Т-лимфоциты способны распознавать чужеродные антигены на 4-м месяце гестации с появлением на их мембране молекул антигенов гистосовместимости (BoLA).
Естественные килеры (ЛК-клетки) появляются в крови плода на 3-м месяце гестации, но их функциональная активность низкая и недостаточная для элиминации клеток, инфицированных вирусом или другими возбудителями инфекций. Активность цитоток-сичных Т-лимфоцитов также низкая и в крови новорожденных телят не превышает 50 % активности взрослых животных [33].
Зрелые В-лимфоциты в периферической крови плода крупного рогатого скота появляются на 3-м месяце гестации, после 3-го месяца они способны трансформироваться в плазматические клетки, но концентрация IgM — наиболее древнего в эволюционном аспекте иммуноглобулина и появляющегося первым после введения антигенов — в конце 4-го месяца гестации составляет примерно 0,1 г/л, а в конце стельности — 0,4 г/л. Примерно на таком же уровне в неонатальный период содержание IgG—основного защитного белка [26].
Иммунная система плода при его контакте с чужеродными антигенами отвечает увеличенным синтезом IgM, поэтому повышенный уровень его в крови новорожденных свидетельствует об антигенной стимуляции плода или об его внутриутробном инфицировании. Таким образом, у сельскохозяйственных животных лишь незначительное количество иммуноглобулинов может синтезироваться собственной лимфоидной тканью или передаваться через плаценту. Основную массу их новорожденные получают с материнским молозивом.
Трансэпителиальный переход IgG из крови матери в секрет молочной железы в конце беременности, а затем с молозивом — в кровь телят в первые 24—36 ч жизни осуществляется селективно с помощью рецепторного механизма. Молекула IgGj связывается с рецептором к Fc-фрагменту на поверхности эпителия молочной железы и подвергается пиноцитозу, затем переходит в секрет вымени. Подобный механизм транспортировки IgG2 и IgM у коров не выявлен [27].
Аналогично рассматривается механизм транспорта иммуноглобулинов из молозива через эпителий тонкого кишечника в кровоток теленка. Иммуноглобулины на поверхности энтероцита связываются с помощью Fc-фрагмента собственной молекулы с белковым рецептором апикальной мембраны, образуя комплекс Ig-рецептор. Вследствие интенсивных процессов пиноцитоза у новорожденных животных, которые обусловлены, в том числе, низкой вязкостью плазматической мембраны, комплекс Ig-рецептор транспортируется через энтероциты в кровь теленка в составе эндоцитозного пузырька или самостоятельно [27].
Интенсивность усвоения иммуноглобулинов и напряженность колострального иммунитета зависят от качества молозива (кислотности, концентрации белка, иммуноглобулинов, количества лейкоцитов, активности ингибитора и блокатора трипсина, температуры молозива), своевременной выпойки молозива, способа выпойки, состояния энтероцитов и кислотно-щелочного баланса у новорожденных, температуры внешней среды и т. д. [39]. Абсорбируются иммуноглобулины быстро. Если теленок получил молозиво в первые 1—2 ч жизни, то в сыворотке крови иммуноглобулины появляются через 2—3 ч, а максимальное содержание их устанавливают через 16—18 ч, IgM — через 24—48 ч, IgA — 48 ч.
Спустя 8 ч после рождения интенсивность резорбции иммуноглобулинов уменьшается в 2 раза, у некоторых животных и вовсе прекращается через 12 ч, а в отдельных случаях — даже через 4—6 ч после рождения. Количество абсорбированных иммуноглобулинов в значительной степени определяет уровень постнатального формирования и функционирования иммунной системы.
Полученные новорожденными животными колостральные иммуноглобулины представляют собой антитела к антигенам, встречающимся в окружающей среде и возникающим эндогенно, а также к антигенам, которыми иммунизировались матери. Период полураспада IgM у телят и поросят составляет 3—5 дней, IgA — 4—6, IgG — 10—14 дней. Из-за распада иммуноглобулинов уровень ко-лостральных антител начинает постепенно снижаться [29].
После рождения организм молодняка подвергается антигенной стимуляции через кожу, дыхательные и пищеварительные пути вследствие заселения их микроорганизмами. Это стимулирует развитие лимфоидной системы: происходит заселение лимфоцитами периферических лимфоузлов, особенно мезентериальных, увеличивается их масса, интенсивно развиваются центры размножения и формирования плазматических клеток.
В первые дни жизни увеличивается абсолютное количество лимфоцитов, в том числе Т-лимфоцитов, хотя относительное количество лимфоцитов, которые образуют розетки с эритроцитами овцы (Е-РОК), у новорожденных телят меньше, чем у взрослых животных. Поэтому считается, что Т-система иммунитета полностью сформирована в неонатальный период жизни телят. Способность Т-лимфоцитов к сенсибилизации с последующим ответом на митогенную стимуляцию у новорожденных животных не ниже, чем у взрослых [37].
В первую неделю жизни телят относительное количество С04+-Т-хелперных клеток составляет 44,2 ± 1,3 %, CD8+-T-cyn-рессорных — 29,8 ± 1,4, В-лимфоцитов — 14,8 ± 0,9 % [33].
Количество В-лимфоцитов в крови новорожденных телят больше, чем у взрослых животных, но их функциональная активность ограничена. Они характеризуются низкой чувствительностью к интерлейкинам, которые синтезируются Т-хелперами, и в первые 20 дней жизни не реагируют на специфические антигены пролиферацией и увеличением синтеза антител. Такое состояние иммунитета у телят и поросят раннего возраста определено как временный иммунодефицит [37].
Уровень иммуноглобулинов и связанных с ними специфических антител — наиболее важный и решающий механизм защиты организма в течение индивидуального развития. В многочисленных исследованиях показано, что содержание их в крови зависит от возраста животных. Наиболее выражены эти изменения в течение первых дней и недель после рождения. У новорожденных телят до первой выпойки молозива общее количество иммуноглобулинов в сыворотке крови, определяемое по реакции с 18%-ным раствором безводного натрия сульфита, составляет 1,5—5 (2,28 ± + 0,39) мг/мл, в том числе количество IgG (по методу Манчини) — 1,33 ± 0,25 мг/мл. У многих телят IgG вообще не обнаруживается (табл. 76 и 77). Еще меньшее количество иммуноглобулинов отдельных классов установлено Р. П. Маслянко (табл. 78). После двух-трех выпоек молозива содержание иммуноглобулинов увеличивается: IgG до 11,2 ± 1,8 мг/мл, IgM — 2,08 ± 0,3 мг/мл (см. табл. 77), на 3-й день жизни количество IgG составляет 15,0 ± 0,54 мг/мл (см.
