Объем стандартного раствора фосфора, см3

Масса фосфора в 100 см³ раствора сравнения, мг

2 3 4 5 6 7 8

0 3 5

10 20 30 40 50

0

0,6 1,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0

азотной кислоты, 25 см разбавленной (1:1) кислоты хлористоводо­родной, доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают.

Ход определения. В предварительно прокаленный, охлаж­денный в эксикаторе и взвешенный с погрешностью не более 0,001 г тигель берут навеску испытуемой пробы, приготовленной по пункту 1, массой 0,5—2,0 г (для кормов животного происхождения берут навеску массой 0,3—0,4 г) в зависимости от ожидаемого содержа­ния фосфора. Тигель помещают в холодную муфельную печь и по­вышают температуру до 200—250 °С (до появления дыма). Допус­кается предварительное сжигание пробы на электрической плитке, песочной бане или газовой горелке, при этом следует избегать вос­пламенения пробы, помещая тигели на асбестовую сетку.

После прекращения выделения дыма температуру в печи увели­чивают до 525 + 25 "С и ведут прокаливание 4—5 ч, затем тигели с золой охлаждают. Отсутствие несгорающих частиц угля и равно­мерный светло-серый (иногда розовый, зеленоватый или голубова­тый) цвет золы указывают на полное озоление навески. В против­ном случае золу осторожно смачивают несколькими каплями дис­тиллированной воды, приливают 1—2 см³ пероксида водорода (1 : 9) и содержимое тигля с золой снова помещают в печь, прока­ливают при температуре 525 ± 25 "С еще в течение 1 ч. Затем ти­гели охлаждают, золу смачивают несколькими каплями дистилли­рованной воды, добавляют 1 см³ кислоты хлористоводородной (1:1) и 5—10 см дистиллированной воды, тщательно перемешива­ют стеклянной палочкой и переносят, не фильтруя, через воронку в мерную колбу вместимостью 100 см³. Тигель и воронку обмыва­ют водой, доводят раствор водой до метки, перемешивают и дают осадку отстояться. Аликвоту для анализа берут, не взмучивая осад­ка. Подготовка контрольного раствора (холостое определение) включает все стадии анализа, кроме взятия навески.

Золу, полученную при сжигании костной, мясокостной или рыбной муки, смачивают несколькими каплями дистиллирован­ной воды, приливают 1 см³ концентрированной азотной кислоты, затем 5 см³ разбавленного (1:1) раствора кислоты хлористоводород­ной, доводят до кипения, охлаждают и содержимое тигеля перено­сят, не фильтруя, через воронку в колбу вместимостью 100 см , до­водят дистиллированной водой до метки, перемешивают.

Из раствора озолята анализируемых проб пипеткой берут по 10 см³ раствора и переносят в мерную колбу вместимостью 50 см³ добавляют 5 см³ раствора азотной кислоты (раствор № 1) и 15 см³ окрашивающего раствора № 4, доводят дистиллированной водой до метки. После каждого добавления растворов и воды растворы тщательно перемешивают.

Через 30 мин окрашенные растворы сравнения фотометрируют против нулевого раствора шкалы (раствор № 1), не содержащего фос­фор, а испытуемые зольные растворы анализируемых образцов — от­носительно контрольного (холостого) раствора.

Фотометрирование проводят в кювете с толщиной просвечива­емого слоя 5—20 мм, используя синий светофильтр с максимумом светопропускания в области 440—405 нм. Если оптическая плот­ность испытуемого раствора превышает оптическую плотность раствора сравнения, анализируемый раствор разбавляют нулевым раствором шкалы до оптимальной для фотометрирования концен­трации (оптическая плотность 0,2—0,8) и повторяют описанные выше операции в том же порядке. Полученный результат увеличи­вают во столько раз, во сколько был разбавлен раствор анализиру­емой пробы.

По результатам фотометрирования растворов сравнения строят градуировочный график, откладывая на оси абсцисс содержание фосфора в 100 см³ растворов сравнения в миллиграммах, на оси ординат — соответствующее значение оптической плотности.

Для построения каждой точки градуировочного графика вычис­ляют среднее арифметическое значение оптической плотности двух отсчетов на приборе.

Массовую долю фосфора (х) в процентах вычисляют по формуле

т, ■ 100

где mi — масса фосфора в навеске, найденная по графику, мг; 100 — коэффициент пересчета в проценты; т — масса навески, мг.

Массовую долю фосфора в пересчете на абсолютно сухое ве­щество (Х[) в процентах вычисляют по формуле

где х — массовая доля фосфора в испытуемой пробе, %; W— массовая доля влаги в испытуемой пробе, %, определяется по ГОСТ 27548; 100 — коэффициент пересчета в проценты.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

7.2.8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СЫРОГО ЖИРА (ГОСТ 13496.15-97)

Принцип. Метод основан на экстракции сырого жира из взвешенной анализируемой пробы растворителем и взвешивании обезжиренного остатка. Предназначен для испытания раститель­ных кормов всех видов, комбикормов, комбикормового сырья, кормов животного сырья, кормов животного происхождения (ме­тод не распространяется на кормовые дрожжи).

Для испытания кормов всех типов в качестве растворителя ис­пользуют диэтиловый эфир, для испытания костной и рыбной му­ки, муки из морских млекопитающих и ракообразных наряду с ди-этиловым эфиром допускается использовать петролейный эфир. Для испытания хлопковых жмыхов и шротов используют петро­лейный эфир.

Реактивы: эфир медицинский (диэтиловый);

эфир петролейный (фракция 40—70 %).

Оборудование: аппарат Сокслета вместимостью 150, 250, или 500 см , измельчитель проб растений ИПР-2; мельница лабо­раторная МПР-2; сушильный шкаф с терморегулятором; эксика­тор; сито с отверстиями диаметром 1 мм; ножницы; бюксы стек­лянные; аналитические весы; водяная баня, бумага фильтроваль­ная марки ФНБ.

Готовят пробы к испытанию по ГОСТ Р 51419—99, доводя их до воздушно-сухого состояния. Комбикорма, жмыхи, шроты, брике­ты, гранулы размалывают без предварительного высушивания.

Ход определения. Из фильтровальной бумаги размером 100 х 90 мм делают пакетик, обезжиривают в эфире в аппарате Сокслета в течение 1 ч, затем помещают в стеклянную бюксу и су­шат в сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 1 ч, ох­лаждают в эксикаторе и взвешивают. В высушенный и взвешен­ный пакетик помещают 1—2 г испытуемой пробы с погрешностью не более 0,001 г. Пакетик закрывают, помещают в ту же бюксу и вы­сушивают в сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 3 ч. Затем охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Приготовленные таким образом 8—12 пакетиков с испытуемой пробой помещают в экстрактор аппарата Сокслета вместимостью 250 см³ вертикально по 4 пакетика в ряд. В экстрактор наливают эфир так, чтобы он покрывал пакетики. Эфир наливают и в колбу аппарата Сокслета в таком количестве, чтобы после слива его из экстрактора общий объем растворителя не превышал 2/3 объема колбы. Затем собирают аппарат и оставляют его в таком виде на ночь. Экстракцию проводят на следующий день, предварительно пустив воду в холодильник для охлаждения паров эфира.

Нагревают аппарат Сокслета на водяной бане. При нормальном кипении эфира должно быть 6—7 сливов в 1 ч. Экстракцию про­водят 5—8 ч. В образцах с высоким содержанием жира (костная, мясокостная, рыбная мука и из морских млекопитающих и рако­образных) для более полного его извлечения время экстракции увеличивают до 10—12 ч. По окончании экстракции пакетики вы­нимают из аппарата и раскладывают их так, чтобы дать испариться эфиру (в вытяжном шкафу), и сушат в тех же бюксах при темпера­туре 105 °С в течение 1 ч. Затем их охлаждают в экстракторе и взве­шивают. Последующее взвешивание проводят после повторной сушки в течение 30 мин. Сушку и взвешивание повторяют до тех пор, пока разность результатов двух последних взвешиваний соста­вит не более 0,001 г.

Массовую долю сырого жира в сухом веществе (х) в процентах вычисляют по формуле

^т2 ~ ^т\

где т₂ — масса бюксы с пакетиком и навеской до обезжиривания, г; «з — масса бюксы с пакетиком и навеской после обезжиривания, г; «| — масса высушенной бюксы с пакетиком, г; 100 — коэффициент пересчета в проценты.

За результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисля­ют до третьего знака и округляют до второго десятичного знака.

Источник: 24.

7.2.9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КАРОТИНА (ГОСТ 13496.17-95)

Принцип. Метод состоит в растворении каротина в петро-лейном эфире или бензине и фотометрическом измерении окрас­ки, интенсивность которой зависит от содержания каротина.

Реактивы: кальция оксид безводный (ч., ч. д. а);

алюминия оксид безводный;

натрия сульфат безводный (ч., ч. д. а);

натрия гидрокарбонат (х. ч., ч. д. а);

калия бихромат (х. ч., ч. д. а.);

эфир петролейный, фракция с температурой кипения 40—70 или 70—100 °С, бензин авиационный марки Б-70 или нефрас-С 50/170;

вода дистиллированная.

Оборудование: измельчитель проб растений ИПР-2; мель­ница лабораторная марки МРП-2; фотоэлектроколориметр с си­ним светофильтром и максимумом светопропускания 440—450 нм или спектрофотометр; весы лабораторные 2-го класса точности с пределом взвешивания 200 г; весы лабораторные 3-го и 4-го клас­сов точности с пределом взвешивания 500 г; термостат, обеспечи­вающий поддержание температуры (35 ± 3)°С; ступка фарфоровая с пестиком; колбы мерные; бюретки; цилиндр мерный; карандаш восковой для стекла; банки бытовые вместимостью 200 см или колбы вместимостью 150—200 см , крышки полиэтиленовые для банок или пробки для колб.

Допускается применение импортной лабораторной посуды по классу точности и реактивов по качеству не ниже перечисленных.

Все работы с петролейным эфиром и бензином проводят в вы­тяжном шкафу.

Подготовка реактивов к испытанию:

приготовление окиси алюминия 10%-ной влажности. К 900 г безводного алюминия оксида добавляют 100 см³ дистиллирован­ной воды и тщательно перемешивают. Реактив хранят в гермети­чески закрытом сосуде с притертой пробкой и используют для ана­лиза на следующий день;

приготовление кальция оксида безводного. Готовят путем рас­тирания кальция оксида в фарфоровой ступке до порошкообраз­ного состояния. Реактивы хранят в герметически закрытой банке;

калибровка бытовых банок. Во все банки вносят 5 г чистого кварцевого песка или измельченного стекла (при использовании гомогенизатора их добавлять не нужно), 15 г натрия сульфата, 10 г алюминия оксида, 0,5 г окиси кальция и 100 см³ бензина и наносят метку;

приготовление основного (стандартного) раствора калия бихро-мата. 0,720 г калия бихромата, взвешенного с погрешностью не бо­лее 0,001 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см и затем объем раствора доводят до метки и тщательно перемешивают. Оптическая плотность полученного раствора равна оптической плотности раствора каротина концент­рацией 0,00416 мг/ см³. Раствор хранят в течение одного года пос­ле его приготовления;

приготовление растворов сравнения. В мерную колбу вмести­мостью 100 см из бюретки приливают каждый раз от нуля 10, 20, 30, 40, 50 см³ основного раствора калия бихромата и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемеши­вают. Срок хранения раствора сравнения не более 3 мес.

Фотометрирование растворов сравнения проводят в кювете с толщиной просвечиваемого слоя 5, 10 или 20 мл при длине волны 450 нм. Оптическую плотность растворов калия бихромата измеря­ют относительно дистиллированной воды.

Для подсчета градуировочного графика на миллиметровой бу­маге по горизонтальной оси наносят значения объемов основного раствора калия бихромата, взятых для приготовления растворов хранения, на вертикальной оси — соответствующую оптическую плотность растворов. Градуировочный график строят для каждой кюветы. Проверку градуировочного графика выполняют в день проведения испытаний по второму и пятому растворами сравне­ния. При нестабильной работе прибора фотометрируют все рас­творы сравнения и строят график.

Подготовка проб к анализу:

пробу зеленой массы травянистых культур, силоса, сенажа из­мельчают на ИПР-2 или ножницами до отрезков длиной 1—3 см. Измельченную пробу корма тщательно перемешивают на полиэти­леновой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100—200 г, которую размалывают на мельнице в течение 2—4 мин. Кормовые корнеплоды измельчают на мезгообразователе или растирают на терке;

пробу сена (измельченную на ИПР-2 или ножницами до отрез­ков длиной 1—3 см), травяной муки или витаминной муки из дре­весной зелени, гранул или брикетов тщательно перемешивают на полиэтиленовой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100—200 г, которую размалывают на мельнице. Тра­вяную муку размером частиц 1—2 мм анализируют без предвари­тельного размола.

Ход определения. Из подготовленной измельченной про­бы травянистых культур, силоса, сенажа после тщательного ее пе­ремешивания из разных мест берут навеску корма массой 1—5 г с погрешностью не более 0,05 г. Массу навески определяют в за­висимости от ожидаемого содержания каротина. Навеску зеленой массы, силоса, сенажа переносят в фарфоровую ступку, добавляют 5 г песка или мелко измельченного стекла, 15 г натрия сульфата (при навеске 4—5 г добавляют до 20—25 г). В навеску силоса и сенажа, кроме того, добавляют на кончике ножа натрий гидрокарбонат. Смесь тщательно растирают не менее 3—4 мин.

Хорошо растертый и обезвоженный корм без потерь переносят в бытовую банку или колбу вместимостью 200 см, приливают 100 см петролейного эфира или бензина; обмывают ступку и пес­тик его минимальным количеством. Добавляют в банку 10 г алю­миния оксида 10%-ной влажности и 0,5 г растертого до порошко­образного состояния кальция оксида, перемешивают стеклянной палочкой, плотно закрывают банку полиэтиленовой крышкой, а колбу пробкой.

Из измельченной и хорошо перемешанной пробы сена, травя­ной муки, брикетов или гранул из разных мест берут навеску мас­сой около 1—3 г, для сена до 5 г и переносят в бытовую банку или колбу вместимостью 200 см³. Добавляют 5 г безводного натрия сульфата, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, вно­сят 10 г алюминия оксида 10%-ной влажности, 0,5 г кальция ок­сида и 100 см петролейного эфира или бензина и снова переме­шивают.

Измельчение анализируемой пробы можно проводить и на го­могенизаторе. В этом случае после измельчения пробы сена, сило­са, сенажа или зеленой массы травянистых культур на ИПР-2 или ножницами ее тщательно перемешивают и из разных мест берут навеску массой 1—5 г, переносят в стакан гомогенизатора, на дно которого насыпано 15 г натрия сульфата (в навеску силоса и сенажа добавляют натрия гидрокарбонат), приливают 50—60 см³ экстрагента и гомогенизируют 2 мин при частоте вращения 5000 мин^-1. Затем на­веску переносят в бытовую банку (колбу), тщательно обмывая стакан гомогенизатора минимальным количеством экстрагента. Добавляют в банку 10 г алюминия оксида 10%-ной влажности и 0,5 г кальция оксида, доводят экстрагентом до метки и переме­шивают.

Плотно закрытые банки или колбы оставляют в темном месте на 14—18 ч. При проведении экспресс-испытания единичных об­разцов допускается заменять настаивание термостатированием. Для этого плотно закрытые банки или колбы помещают на 2 ч в предварительно нагретый до 35 °С термостат. Затем пробы охлаж­дают до комнатной температуры. В целях безопасности работы сле­дует следить за строгим соблюдением температуры во время термо-статирования. Перед работой необходимо убедиться в исправности термостата и правильности показаний термометра.

После настаивания или термостатирования, не взмучивая, от­бирают шприцем прозрачный отстоявшийся раствор и переносят в кювету фотоэлектроколориметра. Фотометрирование экстрактов каротина проводят относительно петролейного эфира или бензи­на, используя кювету на 5, 10 или 20 мм.

При оптической плотности раствора более 0,7 в мерную колбу вместимостью 50 см³ вносят 25 см³ анализируемой вытяжки, дово­дят до метки петролейным эфиром (или бензином) и перемешива-, ют. При этом полученные результаты определения каротина удва­ивают.

Содержание каротина (лс, мг/кг) в корме натуральной влажнос­ти вычисляют по формуле

_v= У-0,00416 ■ 1000 т

где У — объем основного раствора, найденный по графику, см³; 0,00416 — коэффициент пересчета основного раствора калия бихромата в эквивалентное количество миллиграммов каротина; 1000 — коэффициент пересчета на 1 кг корма; т — масса навески, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Ре­зультаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.

Содержание каротина в сухом веществе (jq, мг/кг) вычисляют по формуле

где х — содержание каротина в 1 кг корма натуральной влажности, мг; W — влажность корма, %.

7.2.10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ КИСЛОТНОСТИ (ГОСТ 13496.12—98)

Принцип. Метод состоит в рН-метрическом титровании вод­ной вытяжки пробы комбикорма или комбикормового сырья рас­твором калия гидроксида до рН 8,20 и последующим расчетом об­щей кислотности, исходя из объема израсходованной на титрова­ние щелочи, и определения градуса Неймана.

Реактивы: калия гидроксид (х. ч.) по ГОСТ 24363 или стан­дарт-титр (использование натрия гидроксида недопустимо);

вода дистиллированная;

бумага фильтровальная.

Оборудование: ионометр ЭВ-74; электрод стеклянный ла­бораторный ЭСЛ-63-07 для измерения лри температуре от 25 до 100 °С; электрод сравнения хлорсеребряный насыщенный образ­цовый 2-го разряда; термокомпенсатор ТКА-7; термометр 1-63 ТЛ-2; мешалка магнитная ММ-3; мельница лабораторная МРП или другие аналогичных марок; сито с отверстиями диаметром 1 мм; ступка фарфоровая с пестиком; ножницы; весы лаборатор­ные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г; набор гирь; колбы мерные вместимостью 25 и 1000 см ис­полнений 1-го, 2-го класса точности; колба мерная вместимостью 500 см ; стакан химический вместимостью 50 см³ или 100 см , ци­линдр мерный вместимостью 250 см³ 2-го класса точности; пипет­ки градуированные вместимостью 1 и 10 см³ 2-го класса точности; воронки стеклянные диаметром 36—56 мм; палочка стеклянная длиной 15—20 см.

Подготовка к анализу. Из средней пробы отбирают около 100 г комбикорма или комбикормового сырья, тщательно измельчают на мельнице и просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм:

Электроды стеклянный лабораторный и сравнения хлорсереб-ряного насыщения готовят к работе в соответствии с паспортами на них. После каждого измерения электроды промывают дистил­лированной водой и осушают фильтровальной бумагой. Хранят их в дистиллированной воде.

Ионометр ЭВ-74 к работе в режиме рН-метра готовят в соот­ветствии с паспортом.

Для приготовления раствора калия гидроксида концентрации с(КОН) = 0,1 моль/дм³ навеску реактива массой 5,611 г переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см , растворяют в дистиллиро­ванной воде, старательно перемешивают и доводят до метки. До­пускается приготовление раствора из фиксанала.

Для определения коэффициента поправки раствора калия гид­роксида около 80 см этого раствора переносят в стакан вмести­мостью 100 см , куда опускают электродную пару, и при постоян­ном перемешивании на магнитной мешалке измеряют рН.

Коэффициент поправки раствора калия гидроксида (К) рассчи­тывают по формуле где Ю^-'¹⁴ ~ ^рН' — точная концентрация раствора калия гидроксида, моль/дм³; рН — показание ионометра; 0,1 — заданная концентрация раствора калия гидроксида, моль/дм³.

Ход определения. Навеску исследуемого продукта массой 26 г помещают в сухую коническую колбу вместимостью 500 см³, приливают 250 см^у дистиллированной воды и, закрыв колбу про­бкой, взбалтывают непрерывно в течение 10 мин. 25 см³ получен­ной таким образом суспензии через воронку отливают по стеклян­ной палочке в мерную колбу на 25 см³. Содержимое колбы коли­чественно переносят в стакан вместимостью 50 или 100 см³, куда опускают электродную пару. При постоянном перемешивании на магнитной мешалке к суспензии пипеткой по каплям добавляют раствор калия гидроксида концентрации с(КОН) = 0,1 моль/дм³ до тех пор, пока рН не достигнет значения 8,2. Используют пипет­ку вместимостью 10 см³, если рН суспензии меньше 6,0, или 1 см³, если рН суспензии больше 6,0.

Объем израсходованной на титрование щелочи фиксируют в ла­бораторном журнале.

Общую кислотность комбикорма или комбикормового сырья (х), выраженную в градусах Неймана (°Н), рассчитывают по формуле

х = 4- УК,

где 4 — коэффициент пересчета на 100 г продукта; У — объем раствора калия гидроксида, израсходованный для достижения рН 8,2, см³; К — коэффициент поправки раствора калия гидроксида, рассчитанный ранее (см. предыдущую формулу).

За конечный результат анализа принимают среднее арифмети­ческое результатов двух параллельных определений. Результаты округляют до второго десятичного знака.

7.2.11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КИСЛОТНОГО ЧИСЛА ЖИРА (ГОСТ 13496.18—85)

Принцип. Метод заключается в потенциометрическом титро­вании свободных жирных кислот, извлеченных из продукта экс­трагированием смесью хлороформа и этилового спирта.

Реактивы: калия гидроксид. Раствор концентрации с(КОН) = = 0,1 моль/дм³ (0,1 н.) или фиксанал;

кислота серная. Раствор концентрации с (1/2 H2SO4) = 0,1 моль/дм³ (0,1 н.) или фикданал;

хлороформ технический;

спирт этиловый технический или спирт этиловый для бутадие­на, или спирт этиловый ректификованный технический; фенолфталеин, раствор с массовой долей 1%; вода дистиллированная.

Оборудование: мельница лабораторная марки ЛЗМ; сито металлическое с отверстиями диаметром 1 мм; весы лабораторные не ниже 2-го класса точности с пределом взвешивания 200 и 500 г или другие весы того же класса точности; аппарат для встряхивания жидкости в сосудах АВУ-1; вакуум-насос Комовского; мешалка маг­нитная ММ-ЗМ; рН-метр рН-673 или ионометр универсальный ЭВ-74; электрод стеклянный ЭСЛ-43-07; электрод вспомогательный хлорсеребряный ЭВЛ-1МЗ; баня песчаная или лампа инфракрасная мощностью 50 Вт; эксикатор; бюксы металлические диаметром 50 мм, высотой 38 мм; бюретки исполнений 1, 2, 3 вместимостью 10 и 25 см 2-го класса точности; колба с тубусом вместимостью 250 см ; колбы конические вместимостью 250 см , стаканы стек­лянные вместимостью 50 см³; колбы мерные исполнений 1, 2, 3, 4 вместимостью 100 и 1000 см³ 2-го класса точности; пипетки испол­нений 2, 3 вместимостью 50 см 2-го класса точности; воронка Бюх-нера 4 или 5; ступка фарфоровая с пестиком; бумага фильтровальная.

Подготовка к испытанию. Из объединенной пробы ком­бикорма или сырья выделяют среднюю пробу, масса которой должна быть не менее 500 г. Измельчают ее на мельнице и просеивают через сито. Хранят в стеклянной или пластмассовой банке в сухом месте.

Для приготовления раствора калия гидроксида концентрации с(КОН) = 0,1 моль/дм³ (0,1 н.) навеску калия гидроксида массой 5,611 г переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см , раство­ряют в этиловом спирте и доводят объем спиртом до метки.

Коэффициент поправки спиртового раствора КОН устанавли­вают по раствору серной кислоты концентрации с(1/2 H2SO4) = = 0,1 моль/дм³. Для этого в колбу приливают 20 см³ серной кис­лоты, добавляют 2 капли фенолфталеина и титруют приготовлен­ным раствором калия гидроксида до бледно-розовой окраски. Объем раствора калия гидроксида, израсходованный на титрова­ние раствора серной кислоты, вычисляют как среднее арифмети­ческое результатов трех определений.

Коэффициент поправки раствора калия гидроксида (К) вычис­ляют по формуле

где К[ — объем раствора серной кислоты, взятой для титрования, см, К\ — коэффициент поправки раствора серной кислоты; V — объем раствора калия гидроксида, израсходованный на титрование 20 см³ раствора серной кислоты, см³.

Приготовление экстрагирующей смеси. Смешивают 1 часть этилового спирта и 2 части хлороформа. В смесь добавляют 5 капель раствора фенолфталеина и для устранения примесей, возмож­ных в экстрагирующей смеси, нейтрализуют раствором калия гидрок­сида до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 30 с.

Ход определения. При испытании комбикормов или шро­тов берут навеску массой 25 г, при испытании мясокостной муки — массой 10 г, при испытании белково-жирового концентрата или рыбной муки — массой 2 г. Навеску переносят в колбу вместимос­тью 250 см³, приливают 80 см³ спирто-хлороформенной смеси. Полученную суспензию встряхивают в течение 5 мин на аппарате для встряхивания, затем фильтруют с помощью вакуумного насо­са, используя при этом воронку Бюхнера с бумажным фильтром и колбу с тубусом.

Профильтрованный экстракт переносят в колбу на 100 см³ В нее добавляют остатки экстракта, смывая их два раза по 10 см³ спирто-хлороформенной смеси со стенок колбы с тубусом. Содержи­мое колбы тщательно перемешивают. Для титрования в стакан вмес­тимостью 50 см³ пипеткой вносят 30 см³ экстракта и опускают туда же смесительный стержень. Стакан устанавливают на магнитную ме­шалку, включают ее и затем опускают в стакан электроды рН-метра.

Титруют экстракт раствором калия гидроксида до эквивалент­ной точки в интервале рН от 10,0 до 12,0.

После каждого определения электроды обмывают спирто-хло­роформенной смесью.

Для определения массы жира одновременно с отбором экстра­кта для титрования отбирают еще 15 см³ экстракта и помещают его в предварительно высушенную до постоянной массы металличес­кую бюксу. Бюксу с экстрактом помещают на песчаную баню, на­гретую до 200 "С, и выпаривают до полного исчезновения запаха хлороформа (8—10 мин). Наружную поверхность бюксы тщательно очищают от песка, бюксу охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Для сушки жира используют также инфракрасную лампу. Для этого бюксу с экстрактом помещают на асбестовый лист под центр лампы на расстоянии 90 мм от нее и сушат в течение 15 мин. Затем бюксы закрывают крышкой, выдерживают в эксикаторе в течение 10—15 мин и взвешивают.

Массу жира, содержащуюся в 30 см³ экстракта, взятого для тит­рования, вычисляют по разности бюксы с высушенным жиром и пустой бюксы и умножают на 2.

Кислотное число жира (х) в миллиграммах калия гидроксида на 1 г жира вычисляют по формуле

_х= 5,611 KV т '

где 5,611 — массовая концентрации калия гидроксида в растворе молярной концентрации 0,1 моль/дм³, мг/см , К — коэффициент поправки раствора калия гидроксида; V— объем раствора калия гидроксида, пошедший на титрование, см , т — масса жира, г.

За результаты испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

Вычисление производят с точностью до второго знака и округ­ляют до первого.

Погрешность методики выполнения измерений составляет +0,4 мг.

7.2.12. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ УРЕАЗЫ В ЖМЫХАХ И ШРОТАХ (ГОСТ 13979.9-69)*

Принцип. Метод основан на изменении рН фосфатного бу­ферного раствора, которое образуется в результате воздействия уре-азы на содержащуюся в растворе мочевину.

Реактивы: мочевина;

известь натронная;

раствор фосфатный буферный образцовый с рН около 7,0;

калия фосфат однозамещенный (КН7РО4) или натрия фосфат однозамещенный 2-водный (NaH₂P04 • 2Н₂0);

калия фосфат двузамещенный 3-водный (К1НРО4' ЗН₂0) или натрия фосфат двузамещенный безводный (Na₂HP04), или натрия фосфат двузамещенный 12-водный (Na₂HP04 • 12Н₂0);

вода дистиллированная, не содержащая углекислого газа (про­кипяченная).

Оборудование: весы аналитические; рН-метр и аналогич­ный прибор, с пределами измерений от минус 1 до 14 единиц рН с ценой деления индикатора от 0,01 до 0,1; электрокофемолка бы­товая или аналогичное измельчающее устройство; баня водяная с терморегулятором или другое термостатирующее устройство, поз­воляющее поддерживать температуру 30±2 °С; электроплитка бы­товая; термометр жидкостный стеклянный, позволяющий изме­рять температуру в диапазоне 0—50 "С, с ценой деления 1—2 °С; колба мерная; стаканы В-1-100 или В-1-150ТС; колбы конические или колбы плоскодонные; цилиндр; сито с отверстиями диаметром 0,5 мм из набора лабораторных сит.

Подготовка к измерениям. Дистиллированную воду кипятят на электроплитке в течение 15 мин для удаления углекис­лого газа и охлаждают в колбе, закрытой пробкой и снабженной трубкой с натронной известью.

При отсутствии стандарт-титров (фиксаналов) буферный рас­твор готовят следующим образом. Предварительно калий одно- и двузамещенный подвергают перекристаллизации. С этой целью от­дельно в химические стаканы помещают соли, добавляют немного дистиллированной воды (делают перенасыщенный раствор), нагре­вают на электрической плитке до полного растворения солей, ох­лаждают в холодильнике (кристаллы выпадают в осадок через 15 мин), сливают воду и кристаллы высушивают в сушильном шкафу при температуре 110°С, охлаждают в эксикаторе.

Фосфатный буферный раствор с концентрацией 0,05 моль/л го­товят из смеси двух растворов одно- и двузамещенного калия фос­фата аналогичной концентрации. Для приготовления первого бе­рут 3,40 г и второго — 4,35 г соответствующей соли, полученной

* С изменениями, утвержденными в 1983, 1987 и 1995 годах (ИУС 7-83, 10-87, 6-95).

после перекристаллизации, переносят в мерные колбы на 500 см³,

растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, тщательно перемешивают и содержимое доводят дистиллирован­ной водой до метки. Фосфатный буфер с рН 7,0 получают путем

смешивания 233,4 см³ первого и 366,6 см³ второго растворов в

мерной колбе на 1000 см³ с добавлением до метки дистиллирован­ной водой. Водородный показатель (рН) полученного буферного раствора проверяют на рН-метре (раствор А). Полученный раствор А хранят в темном месте не более 1 мес.

Для приготовления буферного раствора Б с мочевиной раство­ряют мочевину в растворе А в колбе вместимостью 500 или 1000 см³ из расчета 1,5 г мочевины на 50 см³ раствора А. Раствор Б хранят в темном месте не более 10 дней.

Для подготовки образца из средней пробы методом диагональ­ного деления отбирают пробу для анализа массой около 10 г. Из­мельчают ее до прохода не менее 60 % через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм. Остаток на сите вновь измельчают и просеива­ют через сито. Просеянный материал вновь смешивают с остатка­ми на сите и используют для взятия пробы. При масличности про­дукта более 2 % после измельчения его обезжиривают.

Ход определения. На аналитических весах взвешивают 3 пробы тщательно измельченного материала массой 1 + 0,01 г и помещают в стеклянные стаканы вместимостью 100 или 150 см³. В один стакан приливают 50 см³ раствора А и помещают в водя­ную баню с температурой 30 + 2° С. Во второй и третий стаканы с интервалом в 5 мин приливают по 50 см раствора Б, помещают их немедленно после приливания раствора в ту же водяную баню. Время термостатирования 30 мин, при этом следует каждые 5 мин перемешивать содержимое стакана стеклянной палочкой, заканчива­ют перемешивание за 5 мин до конца нагрева. По истечении 30 мин выдержки жидкость над осадком из каждого стакана декантируют в стаканчики прибора и определяют рН каждого раствора в соответ­ствии с прилагаемой к прибору инструкцией.

Активность уреазы (А) в единицах рН вычисляют по формуле

А = рН[ - рН_0>

где рН[ — значение рН в основном измерении (с раствором Б); рН₀ — значение рН в контрольном измерении (с раствором А).

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений, рас­хождение между которыми не должно превышать 30 % от среднего арифметического значения рН при доверительной вероятности 0,05. Все вычисления проводят с записью результатов до второго десяти­чного знака.

Источник: 59.