17. Разведения билирубина для построения калибровочного графика

N° пробир­ки	Рабочий раствор би­лирубина, мл	0,9%-ный рас­твор натрия хлорида, мл	Количество билирубина в пробе		Концентрация би­лирубина в сыво­ротке крови, мкмоль/л
			мг	мкмоль/л
1	0,05	0,45	0,005	0,00855		17,1
2	ОД	0,4	0,01	0,0171		34,2
3	0,15	0,35	0,015	0,02565		51,3
4	0,2	0,3	0,02	0,0342		68,4
5	0,25	0,25	0,025	0,04275		85,5

К полученным разведениям прибавляют по 1,75 мл кофеиново­го реактива и по 0,25 мл диазосмеси. При появлении помутнения можно добавить по 3 капли 30%-ного раствора натрия гидроксида. Измерение проводят при тех же условиях, что и в опытных пробах, через 20 мин. Из компенсационной жидкости готовят разведения аналогично калибровочным (см. табл. 17) и далее обрабатывают их так же, как калибровочные пробы.

Способ 2. Калибровочный график строят по готовым наборам реактивов, выпускаемых отечественными и зарубежными фирма­ми. Калибровочная кривая линейна до 170 мкмоль/л.

Подбор реактивов в коммерческих наборах основан также на диазореакции, положенной в основу метода Ендрассика—Клеггор-на—Грофа.

Примечание. Сыворотка или плазма крови должны быть свежи­ми, свободными от гемолиза, прозрачными. Плазму или сыворотку крови хранят не более двух дней при температуре 4—25 °С. Исследования проводят неза­медлительно. Образцы крови защищают от света.

Источник: 43.

Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клегторна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. Принцип метода и реактивы: условия анализов те же, что в предыдущей методике, принятой в качестве унифицированной.

Ход определения. В4 пробирки вносят по 0,5 мл раз­веденной в 2 раза сыворотки крови. Первая пробирка является кон­тролем для определения общего билирубина. В нее вносят 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида и 1,75 мл кофеинового ре­актива. Во второй пробирке определяют содержание общего били­рубина: вносят 0,25 мл диазореактива и 1,75 мл кофеинового реак­тива. Третья пробирка — контроль для связанного билирубина. В нее вносят 2 мл изотонического (0,9%-ного, 154 ммоль/л) рас­твора натрия хлорида. В четвертую пробирку вносят 1,75 мл изо­тонического раствора натрия хлорида и 0,25 мл диазосмеси и оп­ределяют связанный билирубин (табл. 18).