15. Разведения рабочего калибровочного раствора креатинина

№ пробирки	Рабочий ка­либровочный раствор, мл	Раствор пик­риновой ки­слоты, мл	2,5 моль/л раствор на­трия гидро­ксида, мл	Дистиллиро­ванная вода, мл	Концентра­ция креати­нина в пробе, мкмоль/л
1	0,4	3,0	0,2	До объема	40
				10 мл
2	0,8	3,0	0,2	То же	80
3	1,6	3,0	0,2	»	160
4	2,4	3,0	0,2	»	240
5	3,2	3,0	0,2		320

Через 10 мин проводят измерения при тех же условиях, что и опытные пробы. Калибровочная кривая линейна до 260 мкмоль/л креатинина.

Расчет концентрации креатинина в сыворотке ведут по фор­муле

х= §s -0,1 или -1,

где х — содержание креатинина в сыворотке, ммоль/л или мг%; Е_оп — экстинкция опытной пробы; Е_к — экстинкция калибровочной пробы; 0,1 концентрация креатинина в калибровочной пробе, ммоль/л; 1 — концентрация креатинина в калибровочной пробе, мг%.

При переводе в мг% полученную величину умножают на 10. Источник: 43.

Клиническое значение. В организме животных кре-атинин образуется из креатина, источники которого аминокисло­ты аргинин, глицин, метионин. Креатин при фосфорилировании превращается в креатинфосфат, а затем в креатинин. Креатин и креатинфосфат участвуют в процессах, связанных с мышечными сокращениями.

В сыворотке крови содержится в основном креатинин, поэтому его и определяют. Количество его у животных различных видов колеблется от 40 до 160 мкмоль/л (0,45—1,9 мг%), у кур — 120-350 мкмоль/л (1,4-4,0 мг%).

Повышение концентрации креатинина в крови наблюдается при почечной недостаточности, прогрессирующих диффузных заболе­ваниях почек, закупорке мочевых путей, подагре, кишечной не­проходимости, механической желтухе, голодании, мышечной дис­трофии.

Понижение количества креатинина не имеет клинического зна­чения.

Определение билирубина в сыворотке крови по диазореакции (метод Ендрассика—Клеггорна—Грофа). Принцип. Под дейс­твием НО разрывается тетрапирроловая связь билирубина и обра­зуется два дипиррола, которые диазотируются диазобензосульфа-новой кислотой с образованием розово-фиолетового азобилируби-на. Связанный билирубин реагирует быстро, несвязанный — после добавления кофеинового реактива.

Реактивы: кофеиновый реактив. 5 г чистого кофеина, 7,5 г натрия бензоата, 12,5 г натрия ацетата растворяют в 90 мл дистил­лированной воды, нагревают до 50—60 "С, хорошо перемешивают. После охлаждения доводят дистиллированной водой до 100 мл. Срок хранения 2 нед;

натрия хлорид (ч. д. а. или х. ч.), 154 моль/л. 0,9 г натрия хлори­да помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят водой до метки.

НС1 концентрированная (ч. д. а., х. ч.);

сульфаниловая кислота (ч. д. а.);

диазореактив I. 5 г сульфаниловой кислоты растворяют при нагревании в 300—400 мл дистиллированной воды, прибавляют 15 мл концентрированной НС1 (плотность 1,19 кг/м³). Если суль­фаниловая кислота полностью не растворяется, колбу помещают в теплую воду и помешивают. Только после полного растворения сульфаниловой кислоты и охлаждения раствор доливают дистил­лированной водой до 1 л. Реактив стойкий, хранят в посуде из темного стекла;

диазореактив II. Натрия нитрит (NaN02, ч. д. а., х. ч.), 5 г/л (0,07 моль/л). 0,5 г натрия нитрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят водой до метки. Реактив стабилен в течение 2 нед при хранении в посуде из темного стекла. Перед ра­ботой смешивают 10 мл диазореактива I и 0,3 мл диазореактива II;

билирубин для построения калибровочного графика, 800 мг/л, или 1368 мкмоль/л. Коммерческие препараты кристаллического билирубина содержат разные примеси, которые могут мешать ре­акции азосочетания. Рекомендуется использовать наборы отечест­венных или зарубежных фирм, содержащие билирубин высокой степени чистоты. Растворы билирубина нестойкие, поэтому их го­товят с добавлением белка в качестве стабилизатора;

натрия карбонат, 0,1 моль/л. 10,6 г безводного Ыа₂СОз раство­ряют и доводят до 1 л дистиллированной водой;

уксусная кислота, 4 моль/л. 25 мл ледяной уксусной кислоты доводят до 100 мл дистиллированной водой.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; колбы мерные.

Ход определения. ВЗ пробирки (для общего и связан­ного билирубина и для контроля) вносят реактивы, как указано в таблице 16.