
- •Глава 1
- •Цвет поглощаемого излучения Дополнительный цвет (наблюдаемый цвет раствора)
- •1.3. Флюориметры (люминометры)
- •Глава 2
- •2.1. Подготовка посуды к анализам
- •2. Приготовление индикаторов
- •Глава 3
- •3. Материал для исследования, аитикоагулянт, условия хранения образца, сроки анализа
- •Материал для исследования, антикоагулянт
- •2 Нед в замороженном состоянии. Защищают от солнечного света
- •3 Ч проба стабильна в охлажденной крови. Плазму и сыворотку стабилизируют мета-фосфорной кислотой (6 г/100 мл), тху, или три-хлоруксусной (10 г/100 мл) кислотой. Хранят при 20 "с 21 сут
- •Материал для исследования, антикоагулянт
- •6 Ч при комнатной температуре, 1 нед при 4 °с, 6 мес при минус 70 °с
- •4. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у животных
- •Три первые цифры количества эритроцитов в 1 мкл'
- •7 . Рабочие калибровочные растворы для определения калия в эритроцитах
- •NaCl о сновные калибровочные растворы, мл
- •12. Приготовление разведений основного калибровочного раствора
- •13. Содержание иммуноглобулинов (ig) в сыворотке крови в зависимости от оптической плотности
- •Содержание ig, мг/мл
- •Содержание ig, мг/мл
- •VI. Класс зрелых
- •Р 4 5 6 7 ис. VI. Поражение крови:
- •14. Пересчет содержания иммунных белков в сыворотке крови (н. И. Блинов), мг/ мл
- •15. Разведения рабочего калибровочного раствора креатинина
- •16. Смеси реактивов для определения билирубина в сыворотке крови
- •17. Разведения билирубина для построения калибровочного графика
- •18. Схема постановки реакции для определения билирубина
- •19. Разведения для построения калибровочного графика
- •3.3.6.1. Выдел ениелипидов из биологических субстратов
- •20. Приготовление рабочих растворов для построения калибровочного графика
- •Стандартный раствор триолеииа, мл
- •Концентрация общих липидов, мг%
- •3.3.6.2. Количественное определение классов липидов химическими методами
- •21. Приготовление растаоров для ностроеиия калибровочного графика
- •22. Приготовление рабочих калибровочных растворов
- •Концентрация триацилглицеринов, мкг/мл
- •3.3.6.3. Разделение липидов на классы методом тонкослойной хроматографии (тсх)
- •24. Состав подвижных фаз и соотношение в пих отдельных компонентов, объем/объем
- •25А. Значение величины Rf для фосфолипидов нри разделении их в разных системах
- •3.3.6.4. Количественное определение классов липидов инструментальным методом
- •3.3.6.5. Определение жирнокислотного состава липидов методом газожидкостной хроматографии (гжх)
- •30. Пример расчета поправочного коэффициента
- •31. Порядок приготовления растворов для определения активности кф 1.15.1.1
- •Количество мкг рибофлавина в 1 мл стандарта- (л - л)
- •3.3.10. Методы определения микроэлементов
- •33. Разведения натрия пирувата для построения калибровочного графика
- •38. Приготовление стандартных растворов
- •Глава 4
- •42. Зависимость количества соматических клеток от скорости вытекания смеси молока с реактивом «Мастоприм»
- •43. Относительная плотность мочи, г/мл или кг/л
- •44. Приготовление растворов
- •Стандартный раствор альбумина, мл
- •Концентрация белка, г/л
- •Глава 5
- •5.6. Болезни органов пищеварения
- •5.7. Болезни печени и желчных путей
- •Глава 6
- •Глава 7
- •50. Показатели для определения качества искусственно высушенных травяных кормов
- •7.1.7. Оценка качества мучнистых кормов
- •Не допускается
- •5 5. Требования гост р 51551—2000 к питательности добавок, норма на день
- •100 Гост 13496.9
- •7.2.2. Определение гигроскопической воды
- •Объем стандартного раствора фосфора, см3
- •Глава 8
- •8.9. Методы определения алкалоидов
- •8.10. Методы определения цианидов
- •Глава 9
- •Глава 10
- •6 3. Показатели эритроцитопоэза у жеребят (в. И. Головаха, 2003)
- •6 5. Показатели крови цыплят-бройлеров (и. М. Карпуть, 1993)
- •66. Популяционный состав эритроцитов клинически здоровых телят, % (в. П. Москаленко, 1999)
- •68. Динамика морфологического состава крови у клинически здоровых телят (в. И. Головаха, 1995)
- •70. Содержание общего белка и белковых фракций в сыворотке крови телят (в. И. Головаха, 1995)
- •71. Состав белков сыворотки крови телят (р. Б. Флюнт с соавт., 2002)
- •72. Состав белков сыворотки крови телят, г/л (о. М. Дацыив, 2002)
- •73. Содержание белковых фракций в сыворотке крови телят и молодняка (н. И. Блинов, 1985)
- •74. Содержание общего белка и альбуминов у жеребят украинской верховой породы (в. И. Головаха, 2003)
- •75. Содержание белковых фракций в сыворотке крови телят 1—3-месячного возраста, г/л (н. В. Кознй, 2003)
- •7 7. Содержание общего количества иммуноглобулинов п их классов в сыворотке кровп телят, мг/мл (в. И. Головаха, 1995)
- •79. Содержание иммуноглобулинов в сыворотке кровн ягнят, мг/мл (ю. Н. Федоров, 1985)
- •80. Содержание иммуноглобулинов у поросят, мг/мл (т. М. Setcvage, т. В. Kim, 1976; т. Yabiki et al., 1974)
- •1 День 1 мес
- •8 3. Содержание иммуноглобулинов у собак, мг/мл (м. J. Day, w. J. Penhale, 1988; н. Y. Reynolds, j. S. Jonson, 1970)
- •87. Показатели кислотно-щелочного состояния крови телят в неоиатальный период (т. В. Любецкая, 2000)
- •89. Содержание билирубина и мочевины у жеребят (в. И. Головаха, 2003)
- •Дней 11,2-55,0 (24,4 ± 2,4) 10 дней 13,0-26,5 (18,0 ± 0,82) 20дней 8,0-21,0 (17,0 ± 1,25) 30 дней 7,2-20,8 (13,0 ± 0,64) 3 мес 8,4-17,0 (13,7 ± 0,84)
- •9 1. Активность ферментов у жеребят украинской верховой породы (в. И. Головаха, 2003)
- •7 14 21 28 60 90 120 150 180 270 Взрослые
- •93. Некоторые показатели функционального состояния печени у собак служебных пород [9]
- •97. Показатели обмена железа в организме норосят (м. Г. Николадзе, 2002)
- •1. Некоторые единицы международной системы (си) и их обозначения
- •М ккат/л нкат/л Ед/л Ед/л
- •Ед/л Ед/л мккат/л нкат/л
- •Глава 1. Физические и физико-химические принципы использования аппаратуры в лабораторной клинической диагностике. В. Э. Новиков 5
- •Глава 3. Лабораторные клинические методы исследования крови. И. Л. Кондрахин, а. В. Архипов 43
- •3.3.1. Методы определения кислотно-основного равновесия (кор) ... 66
- •3.3.2. Определение резервной щелочности в плазме крови диффузным методом по и. П. Кондрахину 67
- •3.3.3. Методы оценки состояния водно-электролитного
- •3.3.4. Методы оценки состояния белкового обмена 88
- •3.3.5. Методы оценки состояния углеводного обмена 117
- •3.3.6. Методы оценки состояния липидного обмена. А. В. Архипов. . . . 133
- •3.3.6.1. Выделение липидов из биологических субстратов 134
- •3.3.6.2. Количественное определение классов липидов
- •3.3.9. Методы определения витаминов. И. П. Кондрахин 186
- •3.3.10. Методы определения микроэлементов. И. П. Кондрахин 204
- •3.3.11. Методы определения активности ферментов.
- •3.3.12. Определение нитратов и нитритов в кормах, крови
- •Глава 4. Методы клинического анализа. И. П. Кондрахин 253
- •4.1. Исследование молока (молозива) 253
- •4.2. Клинический анализ мочи 260
- •Глава 5. Использование лабораторных и клинических тестов для диагностики внутренних болезней. И. П. Кондрахин 288
- •Глава 6. Методы исследования содержимого рубца.
- •Глава 7. Методы оценки качества кормов. А. В. Архипов 335
- •Глава 8. Методы токсикологического исследования.
- •Глава 9. Иммуноферментные методы определения
- •Глава 10. Физиологические особенности гомеостаза молодняка. В. И. Левченко 463
- •Иван Петрович Кондрахин, Алексей Васильевич Архипов, Владимир Иванович Левченко, Герман Александрович Таланов, Людмила Александровна Фролова, Виктор Эммануилович Новиков
- •Почтовый адрес: 129090, Москва, Астраханский пер., д. 8. Тел. (095) 280-99-86, тел./факс (095) 280-14-63, e-mail: koloss@koloss.Ru, наш сайт: www.Koloss.Ru
Авторы: И. П. Кондрахин, А. В. Архипов, В. И. Левченко, Г. А. Таланов, Л. А. Фролова, В. Э. Новиков
Редактор В. Н. Сайтаниди
Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнос-М54 тики: Справочник / Под ред. проф. И. П. Кондрахина. — М.: КолосС, 2004. — 520 с, [4] л. ил.: ил.
ISBN 5-9532-0165-6
Приведены современные унифицированные методы исследования крови, мочи, молока, рубцового содержимого и кормов, позволяющие оценить состояние обмена веществ, функции отдельных органов и систем организма и в комплексе с другими методами поставить диагноз. Даны способы оценки качества кормов и их стандарты. Изложены современные методы определения фосфорорганических соединений, синтетических пе-ритроидов, родентицидов и других ядовитых веществ. Описаны лабораторные тесты диагностики болезней органов и систем.
Для специалистов ветеринарного, зоотехнического и биологического профиля.
УДК 619:616-07(03) ББК 48(03)
ISBN 5-9532-0165-6
©Издательство «КолосС», 2004
ВВЕДЕНИЕ
В медицине и ветеринарии широко используются многочисленные общие клинические, гематологические, биохимические, биофизические, химикотоксикологические и другие методы исследования крови, мочи, молока, содержимого рубца, желудка, кишечника, печени, почек и т. д. Без этих методов немыслимы оценка состояния обмена веществ, функций отдельных органов и систем, постановка диагноза, контроль за эффективностью лечения. Использование унифицированных методов также необходимо при выполнении научных исследований в области ветеринарии, зоотехнии, биологии.
Диспансеризация животных, позволяющая осуществлять контроль за состоянием обмена веществ и здоровья в целом по стаду, своевременно выявлять преобладающие и сопутствующие болезни, их причины, основана прежде всего на использовании клинических лабораторных методов исследования. Без лабораторных диагностических тестов невозможно представить сущность патологического процесса, ход течения болезни, ее исход, доказуемость терапии.
Поскольку причины многих неинфекционных болезней животных, которые составляют более 80—85 % в структуре общей заболеваемости, — недоброкачественные корма, в справочнике описаны методы оценки качества кормов и их стандарты. Учитывая широкое распространение отравлений животных, в справочнике приведены методы определения фосфорорганических соединений (ФОС), синтетических перитроидов, родентицидов, микотоксинов, алкалоидов, цианогенов и других ядовитых веществ.
Особое место в справочнике отведено методам исследования содержимого рубца, так как без оценки состояния рубцового пищеварения невозможно понять исходные механизмы многих патологических процессов в организме, разобраться в этиологических факторах.
Рекомендуемые унифицированные лабораторные методы исследования отвечают определенным требованиям по специфичности, правильности, воспроизводимости, чувствительности, допустимым пределам аналитической погрешности.
Точность и ценность получаемых результатов исследования зависят от многих факторов: выбора метода, подготовки посуды, реактивов, особенно калибровочных материалов, условий взятия, транспортировки, подготовки и хранения образцов биологического или другого материала, использования антикоагулянтов, консервантов, замораживания, оттаивания при его подготовке, работы приборов, качества и добросовестности выполнения анализа. При исследовании учитывают однородность групп животных, их возраст, пол, клиническое состояние, время взятия образца и целый ряд экзогенных факторов (условия кормления, климат, температуру и влажность среды, возможное воздействие химических и биологических средств и т. д.).
Введение в практику унифицированных методов исследования упорядочивает работу лаборатории и отдельных исследователей, делает сопоставимыми результаты различных учреждений и отдельных исследователей, способствует совершенствованию лабораторного дела в целом.
В настоящей книге обобщены клинические лабораторные методы исследования, применяемые в ветеринарии; представлен перечень наиболее информативных показателей для оценки состояния обмена веществ и диагностики различных заболеваний животных; описаны методы подготовки посуды, реактивов, образцов крови, мочи, молока, содержимого рубца к анализам; изложены общие принципы работы основных лабораторных приборов и правила их эксплуатации.
СОКРАЩЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ В СПРАВОЧНИКЕ
АлАТ — аланинаминотрансфераза
АОА — антиокислительная активность
АсАТ — аспартатаминотрансфераза
АТФ — аденозинтрифосфат
БАВ — биологически активные вещества
ГГТ — гамма-глутамилтранспептидаза (гамма-глутамилтранс-
(ГГФ) фераза)
ГЖХ — газожидкостная хроматография
ДДВФ — диметилдихлорвинилфосфат
КК — креатинкиназа
КФК — концентрационный фотоколориметр
ЛДГ — лактатдегидрогеназа
ЛП — липопротеиды
ЛПВП — липопротеиды высокой плотности
ЛПЛ — липопротеидовая липаза
ЛПНП — липопротеиды низкой плотности
ЛПОНП— липопротеиды очень низкой плотности
МДУ — максимально допустимый уровень
НАД — никатинамидадениндинуклеотид
НЭЖК — неэтерифицированные жирные кислоты
ОЭ — обменная энергия (коэффициент)
ПОЛ — перекисное окисление липидов
ПХ — пероксидаза хрена
ТДФ — тиаминдифосфат
ТМБ — тетраметилбензидин
ТСХ — тонкослойная хроматография
ТТГ — тириотропный гормон
ХМ — хилимикрон
ФЛ — фосфолипиды
ЦТК — цикл трикарбоновых кислот
Глава 1
ФИЗИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АППАРАТУРЫ В ЛАБОРАТОРНОЙ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ
В клинической лабораторной диагностике чаще всего применяют приборы двух групп: 1) для оптических измерений (оптоэлект-рические); 2) для электрохимических измерений. Во всех случаях аппаратура, предназначенная для получения количественного результата, должна проходить метрологический контроль.
К приборам первой группы относятся приборы, применяемые для различных измерений:
светопоглощения (абсорбции света) — колориметры и спектрофотометры;
флуоресценции — флуориметры и спектрофлуориметры;
оптической активности растворов (вращение плоскости поляризации света) — поляриметры;
интенсивности светоизлучения (интенсивности окраски пламени, эмиссии) — пламенные фотометры;
поглощения света раскаленными газами — атомные абсорбци-ометры;
светорассеяния (мутные суспензии и эмульсии — нефелометры и турбидиметры).
К приборам второй группы относятся:
различные типы потенциометров, включая рН-метры;
полярографы;
приборы для измерения показателей кислотно-щелочного состояния;
группа устройств (датчиков с терминалами) для непрерывного контроля таких параметров внутренней среды организма, как рОг, глюкозы и т. д.
Отдельной группой стоят более сложные приборы, совмещающие две функции: препаративную и измерительную. К таким аппаратам относятся хроматографы и приборы для электрофореза.
Во многих лабораторных измерительных устройствах имеются приспособления для облегчения работы лаборанта. В некоторых из них эти устройства доведены до уровня автоматических анализаторов. Последние могут быть или непрерывными, или дискретными. Непрерывный автоматический анализатор обрабатывает все пробы, как на конвейере, дискретный — сериями. В обоих случаях автоматические анализаторы оборудованы компьютерами.
Колориметры, спектрофотометры и турбидиметры работают по одинаковому принципу — принципу фотометрии: сравнению интенсивности падающего на кювету света с измеряемым образцом (раствором, суспензией, эмульсией) с интенсивностью света, прошедшего через кювету. В нефелометрах используется сравнение интенсивностей падающего и рассеянного («вбок», вследствие эффекта Тиндаля) света. Для сравнения используют либо отношение интенсивностей, либо десятичный логарифм их отношения. Современные фотометры могут быть предназначены как для работы в области видимой части оптического спектра (400—700 нм), так и для УФ — ультрафиолетовой (200—400 нм) и ИК — инфракрасной (700-3000 нм).
1.1. КОЛОРИМЕТРЫ
Наиболее просты по конструкции и правилам эксплуатации колориметры — приборы, предназначенные для измерения интенсивности окраски растворов и решения некоторых близких задач. При фотометрировании цветных растворов в диапазоне оптических плотностей, не превышающих 2 (иногда 0,4), оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации окрашивающего раствор вещества.
Во всех современных колориметрах используется фотоэлектрическая регистрация интенсивности света, прошедшего через кювету с образцом, поэтому их называют фотоэлектроколориметрами (ФЭК) или концентрационными фотоколориметрами (КФК). В большинстве случаев фотоэлектроколориметры оборудованы комплектом сменных светофильтров, что позволяет проводить измерения в широком диапазоне фиксированных значений длин волн света падающего на кювету с образцом. Возможность выделения нужного участка спектра в некоторых колориметрах решена путем использования широкополосных светофильтров, в других — узкополосных — интерференционных (10—20 нм).
Фотоэлектрический сигнал с фотодетекторов через усилитель обычно поступает либо на аналоговый терминал (показывающий стрелочный прибор), либо на цифровой; во многих современных колориметрах также предусмотрена возможность сопряжения с цифровым вольтметром, аналоговым регистрирующим прибором (самописцем), цифропечатающим устройством (ЦПУ), а также с ПЭВМ. В последнем случае в позициях каталога, соответствующих таким приборам, указывается «с RS-232-интерфейсом». Обычно дополнительные регистрирующие устройства используют в тех случаях, когда требуются кинетические измерения.
Для сравнения интенсивностей падающего и прошедшего света используют сравнение интенсивностей света, прошедшего через кювету с образцом (Г) и кювету сравнения (1$), в которой находится чистый растворитель. Кюветы, разумеется, должны быть идентичны. Поэтому сами измерения сводятся к тому, что сначала под луч света помещают кювету сравнения и специальными органами регулировки добиваются значения сигнала, соответствующего 100 % шкалы прибора. Затем под луч помещают исследуемый образец, и в этом случае показание прибора уже соответствует величине пропускания контролируемого раствора (Т, %), т. е.
т= у ■ 100.
Во многих случаях аналоговые терминалы снабжены второй шкалой, оцифрованной не в процентах, а в единицах оптической плотности (D). Оптическая плотность с пропусканием связана соотношением
D = -lg (Г).
Разумеется, здесь пропускание выражается не в процентах, а в виде десятичной дроби. С концентрацией поглощающего вещества при условии, что в растворе нет других веществ, поглощающих в той же спектральной области, оптическая плотность связана соотношением
D = КС,
где К — коэффициент пропорциональности, зависящий от размеров кюветы и свойств поглощающего вещества; С — молярная концентрация.
Поэтому для количественного анализа колориметрическим методом (точнее фотометрическим, так как измерения могут проводиться в ультрафиолетовой или ближней инфракрасной областях, где никакой видимой окраски нет) удобнее пользоваться калибровочными графиками, заранее построенными с помощью колори-метроэталонных растворов.
При определении светофильтра для колориметрии окрашенного раствора следует выбирать такую длину волны падающего света, которая соответствует максимальному поглощению пигмента. Можно воспользоваться таблицей 1. При работе с растворами, поглощающими в ультрафиолетовой или инфракрасной областях, данные таблицы 1 непригодны и следует руководствоваться либо готовой методикой, либо предварительным экспериментальным поиском подходящей спектральной области. При этом следует учитывать, что при работе в области длин волн ниже 340 нм обычные стеклянные кюветы непригодны и необходимы кюветы из специальных сортов стекла (увиолевые) или кварцевые.
Наиболее распространены отечественные колориметры КФК-2 — однолучевой, с аналоговым терминалом, дополнительным выходом для подключения цифрового вольтметра и КФК-3, отличающийся от КФК-2 цифровым терминалом, выходом для подключения
Длина волн поглощаемого света, нм