Авторы: И. П. Кондрахин, А. В. Архипов, В. И. Левченко, Г. А. Таланов, Л. А. Фролова, В. Э. Новиков

Редактор В. Н. Сайтаниди

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнос-М54 тики: Справочник / Под ред. проф. И. П. Кондрахина. — М.: КолосС, 2004. — 520 с, [4] л. ил.: ил.

ISBN 5-9532-0165-6

Приведены современные унифицированные методы исследования кро­ви, мочи, молока, рубцового содержимого и кормов, позволяющие оце­нить состояние обмена веществ, функции отдельных органов и систем ор­ганизма и в комплексе с другими методами поставить диагноз. Даны спо­собы оценки качества кормов и их стандарты. Изложены современные методы определения фосфорорганических соединений, синтетических пе-ритроидов, родентицидов и других ядовитых веществ. Описаны лаборатор­ные тесты диагностики болезней органов и систем.

Для специалистов ветеринарного, зоотехнического и биологического профиля.

УДК 619:616-07(03) ББК 48(03)

ISBN 5-9532-0165-6

©Издательство «КолосС», 2004

ВВЕДЕНИЕ

В медицине и ветеринарии широко используются многочислен­ные общие клинические, гематологические, биохимические, био­физические, химикотоксикологические и другие методы исследова­ния крови, мочи, молока, содержимого рубца, желудка, кишечника, печени, почек и т. д. Без этих методов немыслимы оценка состояния обмена веществ, функций отдельных органов и систем, постановка диагноза, контроль за эффективностью лечения. Использование унифицированных методов также необходимо при выполнении на­учных исследований в области ветеринарии, зоотехнии, биологии.

Диспансеризация животных, позволяющая осуществлять конт­роль за состоянием обмена веществ и здоровья в целом по стаду, своевременно выявлять преобладающие и сопутствующие болезни, их причины, основана прежде всего на использовании клинических лабораторных методов исследования. Без лабораторных диагности­ческих тестов невозможно представить сущность патологического процесса, ход течения болезни, ее исход, доказуемость терапии.

Поскольку причины многих неинфекционных болезней живот­ных, которые составляют более 80—85 % в структуре общей заболе­ваемости, — недоброкачественные корма, в справочнике описаны методы оценки качества кормов и их стандарты. Учитывая широ­кое распространение отравлений животных, в справочнике приведе­ны методы определения фосфорорганических соединений (ФОС), синтетических перитроидов, родентицидов, микотоксинов, алкалои­дов, цианогенов и других ядовитых веществ.

Особое место в справочнике отведено методам исследования со­держимого рубца, так как без оценки состояния рубцового пищева­рения невозможно понять исходные механизмы многих патологичес­ких процессов в организме, разобраться в этиологических факторах.

Рекомендуемые унифицированные лабораторные методы иссле­дования отвечают определенным требованиям по специфичности, правильности, воспроизводимости, чувствительности, допусти­мым пределам аналитической погрешности.

Точность и ценность получаемых результатов исследования зави­сят от многих факторов: выбора метода, подготовки посуды, реакти­вов, особенно калибровочных материалов, условий взятия, транспор­тировки, подготовки и хранения образцов биологического или дру­гого материала, использования антикоагулянтов, консервантов, замораживания, оттаивания при его подготовке, работы приборов, качества и добросовестности выполнения анализа. При исследовании учитывают однородность групп животных, их возраст, пол, клиничес­кое состояние, время взятия образца и целый ряд экзогенных факто­ров (условия кормления, климат, температуру и влажность среды, возможное воздействие химических и биологических средств и т. д.).

Введение в практику унифицированных методов исследования упорядочивает работу лаборатории и отдельных исследователей, делает сопоставимыми результаты различных учреждений и отде­льных исследователей, способствует совершенствованию лабора­торного дела в целом.

В настоящей книге обобщены клинические лабораторные мето­ды исследования, применяемые в ветеринарии; представлен пере­чень наиболее информативных показателей для оценки состояния обмена веществ и диагностики различных заболеваний животных; описаны методы подготовки посуды, реактивов, образцов крови, мочи, молока, содержимого рубца к анализам; изложены общие принципы работы основных лабораторных приборов и правила их эксплуатации.

СОКРАЩЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ В СПРАВОЧНИКЕ

АлАТ — аланинаминотрансфераза

АОА — антиокислительная активность

АсАТ — аспартатаминотрансфераза

АТФ — аденозинтрифосфат

БАВ — биологически активные вещества

ГГТ — гамма-глутамилтранспептидаза (гамма-глутамилтранс-

(ГГФ) фераза)

ГЖХ — газожидкостная хроматография

ДДВФ — диметилдихлорвинилфосфат

КК — креатинкиназа

КФК — концентрационный фотоколориметр

ЛДГ — лактатдегидрогеназа

ЛП — липопротеиды

ЛПВП — липопротеиды высокой плотности

ЛПЛ — липопротеидовая липаза

ЛПНП — липопротеиды низкой плотности

ЛПОНП— липопротеиды очень низкой плотности

МДУ — максимально допустимый уровень

НАД — никатинамидадениндинуклеотид

НЭЖК — неэтерифицированные жирные кислоты

ОЭ — обменная энергия (коэффициент)

ПОЛ — перекисное окисление липидов

ПХ — пероксидаза хрена

ТДФ — тиаминдифосфат

ТМБ — тетраметилбензидин

ТСХ — тонкослойная хроматография

ТТГ — тириотропный гормон

ХМ — хилимикрон

ФЛ — фосфолипиды

ЦТК — цикл трикарбоновых кислот

Глава 1

ФИЗИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АППАРАТУРЫ В ЛАБОРАТОРНОЙ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ

В клинической лабораторной диагностике чаще всего применя­ют приборы двух групп: 1) для оптических измерений (оптоэлект-рические); 2) для электрохимических измерений. Во всех случаях аппаратура, предназначенная для получения количественного ре­зультата, должна проходить метрологический контроль.

К приборам первой группы относятся приборы, применяемые для различных измерений:

светопоглощения (абсорбции света) — колориметры и спектро­фотометры;

флуоресценции — флуориметры и спектрофлуориметры;

оптической активности растворов (вращение плоскости поля­ризации света) — поляриметры;

интенсивности светоизлучения (интенсивности окраски пламе­ни, эмиссии) — пламенные фотометры;

поглощения света раскаленными газами — атомные абсорбци-ометры;

светорассеяния (мутные суспензии и эмульсии — нефелометры и турбидиметры).

К приборам второй группы относятся:

различные типы потенциометров, включая рН-метры;

полярографы;

приборы для измерения показателей кислотно-щелочного со­стояния;

группа устройств (датчиков с терминалами) для непрерывного контроля таких параметров внутренней среды организма, как рОг, глюкозы и т. д.

Отдельной группой стоят более сложные приборы, совмещаю­щие две функции: препаративную и измерительную. К таким ап­паратам относятся хроматографы и приборы для электрофореза.

Во многих лабораторных измерительных устройствах имеются приспособления для облегчения работы лаборанта. В некоторых из них эти устройства доведены до уровня автоматических анализа­торов. Последние могут быть или непрерывными, или дискретны­ми. Непрерывный автоматический анализатор обрабатывает все пробы, как на конвейере, дискретный — сериями. В обоих случаях автоматические анализаторы оборудованы компьютерами.

Колориметры, спектрофотометры и турбидиметры работают по одинаковому принципу — принципу фотометрии: сравнению ин­тенсивности падающего на кювету света с измеряемым образцом (раствором, суспензией, эмульсией) с интенсивностью света, про­шедшего через кювету. В нефелометрах используется сравнение интенсивностей падающего и рассеянного («вбок», вследствие эф­фекта Тиндаля) света. Для сравнения используют либо отношение интенсивностей, либо десятичный логарифм их отношения. Сов­ременные фотометры могут быть предназначены как для работы в области видимой части оптического спектра (400—700 нм), так и для УФ — ультрафиолетовой (200—400 нм) и ИК — инфракрасной (700-3000 нм).

1.1. КОЛОРИМЕТРЫ

Наиболее просты по конструкции и правилам эксплуатации ко­лориметры — приборы, предназначенные для измерения интен­сивности окраски растворов и решения некоторых близких задач. При фотометрировании цветных растворов в диапазоне оптиче­ских плотностей, не превышающих 2 (иногда 0,4), оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации окрашивающего раствор вещества.

Во всех современных колориметрах используется фотоэлектричес­кая регистрация интенсивности света, прошедшего через кювету с образцом, поэтому их называют фотоэлектроколориметрами (ФЭК) или концентрационными фотоколориметрами (КФК). В большинс­тве случаев фотоэлектроколориметры оборудованы комплектом сменных светофильтров, что позволяет проводить измерения в широком диапазоне фиксированных значений длин волн света па­дающего на кювету с образцом. Возможность выделения нужного участка спектра в некоторых колориметрах решена путем исполь­зования широкополосных светофильтров, в других — узкополос­ных — интерференционных (10—20 нм).

Фотоэлектрический сигнал с фотодетекторов через усилитель обычно поступает либо на аналоговый терминал (показывающий стрелочный прибор), либо на цифровой; во многих современных ко­лориметрах также предусмотрена возможность сопряжения с цифро­вым вольтметром, аналоговым регистрирующим прибором (само­писцем), цифропечатающим устройством (ЦПУ), а также с ПЭВМ. В последнем случае в позициях каталога, соответствующих таким приборам, указывается «с RS-232-интерфейсом». Обычно допол­нительные регистрирующие устройства используют в тех случаях, когда требуются кинетические измерения.

Для сравнения интенсивностей падающего и прошедшего света используют сравнение интенсивностей света, прошедшего через кювету с образцом (Г) и кювету сравнения (1$), в которой находит­ся чистый растворитель. Кюветы, разумеется, должны быть иден­тичны. Поэтому сами измерения сводятся к тому, что сначала под луч света помещают кювету сравнения и специальными органами регулировки добиваются значения сигнала, соответствующего 100 % шкалы прибора. Затем под луч помещают исследуемый образец, и в этом случае показание прибора уже соответствует величине пропус­кания контролируемого раствора (Т, %), т. е.

т= у ■ 100.

Во многих случаях аналоговые терминалы снабжены второй шкалой, оцифрованной не в процентах, а в единицах оптической плотности (D). Оптическая плотность с пропусканием связана со­отношением

D = -lg (Г).

Разумеется, здесь пропускание выражается не в процентах, а в виде десятичной дроби. С концентрацией поглощающего вещества при условии, что в растворе нет других веществ, поглощающих в той же спектральной области, оптическая плотность связана соотноше­нием

D = КС,

где К — коэффициент пропорциональности, зависящий от размеров кюветы и свойств поглощающего вещества; С — молярная концентрация.

Поэтому для количественного анализа колориметрическим ме­тодом (точнее фотометрическим, так как измерения могут прово­диться в ультрафиолетовой или ближней инфракрасной областях, где никакой видимой окраски нет) удобнее пользоваться калибро­вочными графиками, заранее построенными с помощью колори-метроэталонных растворов.

При определении светофильтра для колориметрии окрашенного раствора следует выбирать такую длину волны падающего света, ко­торая соответствует максимальному поглощению пигмента. Можно воспользоваться таблицей 1. При работе с растворами, поглощаю­щими в ультрафиолетовой или инфракрасной областях, данные таблицы 1 непригодны и следует руководствоваться либо готовой методикой, либо предварительным экспериментальным поиском подходящей спектральной области. При этом следует учитывать, что при работе в области длин волн ниже 340 нм обычные стек­лянные кюветы непригодны и необходимы кюветы из специаль­ных сортов стекла (увиолевые) или кварцевые.

Наиболее распространены отечественные колориметры КФК-2 — однолучевой, с аналоговым терминалом, дополнительным выходом для подключения цифрового вольтметра и КФК-3, отличающийся от КФК-2 цифровым терминалом, выходом для подключения

Длина волн поглощаемого света, нм