Билет 49

1) Генная инженерия.

Генная инженерия - раздел молекулярной генетики, связанный с конструированием несуществующих в природе сочетаний генов при помощи генетических и биохимических методов. Метод генетической инженерии относится к числу перспективнейших при получении многих белковых биологических веществ, представляющих ценность для медицины.

Генно-инженерные вакцины – это препараты, полученные с помощью биотехнологии, которая по сути сводиться к генетической рекомбинации .

Для начала получают ген, который должен быть встроен в геном реципиента. Небольшие гены могут быть получены методом химического синтеза. Для этого расшифровывается число и последовательность аминокислот в белковой молекуле вещества, затем по этим данным узнают очерёдность нуклеотидов в гене, далее следует синтез гена химическим путем.

Крупные структуры, которые довольно сложно синтезировать получаются путем выделения(клонирования), прицельного выщепления этих генетических образований с помощью рестриктаз.

Полученный одним из способов целевой ген с помощью ферментов сшивается с другим геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в клетку. Вектором могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека и животных. Экспрессируемый ген встраивается в бактериальную или животную клетку, которая начинает синтезировать несвойственное ей ранее вещество, кодируемое эксперссируемым геном.

В качестве реципиентов экспрессируемого гена чаще всего используется E. coli, B. subtilis, псевдомонады, дрожжи, вирусы. некоторые штаммы способны переключаться на синтез чужеродного вещества до 50% своих синтетических возможностей – эти штамм называются суперпродуцентами.

Иногда к генно-инженерным вакцинам добавляется адъювант.

Примерами таких вакцин служат вакцина против гепатита В (энджерикс), сифилиса, холеры, бруцеллёза, гриппа, бешенства.

Есть определённые сложности в разработке и применении:

- длительное время к генно-инженерным препаратам относились настороженно.

- на разработку технологии для получения вакцины затрачиваются значительные средства

- при получении препаратов данным способом возникает вопрос об идентичности полученного материала природному веществу.

2) Дисбактериоз. Билет 50

1) Стерилизация и дезинфекция, основные методы и характеристика. Аппаратура.

Стерилизация – полное уничтожение м/о и их спор на предметах и в веществах. Является основой асептики. Бывает: физическая (тепловая и холодная) и химическая. Тепловая: 1. Прокаливание. Аппарат – горелка. В её пламени (5-7сек) уничтожаются вегетативные формы бактерий и их споры (на бактериальных петлях, пинцетах) 2. Кипячение. Аппарат – стерилизатор с дистиллированной водой (или 1% р-ром соды). кипятят 30-40 мин; уничтожаются вегетативные формы, споры остаются жизнеспособными (шприцы, стеклянные предметы, металлические инструменты) 3. Стерилизация паром под давлением, уничтожает всё живое. Аппарат – автоклав. Способы: основной режим – 130*С, Р=2 атм,20 мин (металл, стекло, текстиль - всё, кроме резиновых изделий); щадящий режим – 120*, Р=1 атм., 45 мин (металл, резина, текстиль, стекло); особо щадящий режим – 110*, Р=0,5 атм., 180 мин (питательные среды). 4. Стерилизация текучим паром. Аппарат Коха или автоклав с отрытой крышкой и выпускным краном. Пар Т=100*С образуется при кипячении воды. Уничтожает вегетативные формы, для уничтожения спор используется дробная стерилизация (в течение 3 дней по 30 мин с перерывом 1 сут, за которые в термостате прорастают споры, и проросшие споры уничтожают при повторной стерилизации). Стерилизуют питательные среды и лекарства. 5. Сухожаровая стерилизация (=воздушная). Аппарат – печь Пастера=сухожаровой шкаф=воздушный стерилизатор. Т=180*, 60 мин. Т=160*, 150 мин. Уничтожают м/о и их споры. (на силиконовых , стеклянных и металлических изделиях; нельзя стерилизовать то, что содержит воду). 6. Пастеризация – неполная стерилизация, погибают м/о (туберкулезные микобактерии, бруцеллы, энтеробактерии), споры остаются. Нагревают до температур ниже 100* и быстро остужают. Способы: длительная – 65*, 30 мин; краткосрочная – 75*, 20 мин; мгновенная – 85-90*, 1 сек. Пастеризуют питательные продукты (молоко, молочные продукты, пиво, соки, рыбные изделия)

Холодная: 1. УФ облучение: кварцевые лампы с длиной волны 300 мкм в течение 20-120 мин; воздух и поверхности в помещениях; уничтожают м/о(кроме резистентных), споры сохраняются. 2. Радиационная стерилизация: гамма-облучение в специальных установках, доза 2,5 Мрад; уничтожают всё; стерилизуют пластмассовые и другие изделия и сыворотку крови, лекарства. 3. Фильтрование: мелкопористые бактериальные фильтры (мембранные – тонкие пластинки из полиамида и сложных эфиров целлюлозы; глубинные – толстые асбестовые диски/пористые стеклянные или керамические фильтры) и насосы, создающие вакуум или повышенное давление; стерилизуют лекарства, плазму крови, анатоксины и др. жидкости, не выдерживающие нагревания. Задерживают многие м/о и споры, но не задерживают вирусы, микоплазмы, L-формы бактерий.

Химическая: 1. Газовая - в герметичных газовых камерах, этиленоксидом; формальдегидом (с вакуумом). 6-10 часов с последующей дегазацией (проветриванием) в течение нескольких сут. Погибает всё. Стерилизуют мед. Аппаратуру. 2. Хим.растворы- в стерильных контейнерах, 6% р-р перикиси водорода, раствор формальдегида в этаноле, на 5-6 часов с последующим асептичным промыванием дистиллированной водой (возможно вторичное обсемение во время промывания). Эндоскопы, маски для анестезии.

Дезинфекция – уничтожение или снижение численности патогенных и условно-патогенных м/о в окружающей среде(обычно с сохранением спор). Бывает: профилактическая (предотвращение инфекций в общественных местах) и дезинфекцию в эпидемическом очаге (направлена против определенного возбудителя). Физические методы: высокие температуры (кипячение, прогревание ЕТС.), облучение (УФ, ионизирующее, инфракрасное, лучи солнца), механические (мытье водой, растворами соды и моющих средств, уборка пылесосами и влажная уборка). Химические методы: используют дезинфектанты (дезинфицирующие средства) – хлорамин, ххлорная известь, карболовая кислота, спирты, растворы перикиси водорода, формальдегид. Они должны быт эффективны в малых концентрациях, длительно сохранять активность, малотоксичны.