Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
bilety_po_mikre.docx
Скачиваний:
1
Добавлен:
01.07.2025
Размер:
336.46 Кб
Скачать

Билет 45

1) Структура бактериальной клетки. Жгутики, типы их расположения, значение. Способы выявления жгутиков. Ворсинки (пили, фимбрии).

Жгутик - нить из белка флегеллина, прикрепленная к ЦПМ посредством базального тельца (комплекс дисков и крючка). Является аппаратом движения.

по расположению выделяют: монотрихи (1 жгутик), лофотрихи (пучок жгутиков), амфитрихи (жгутики или пучки жгутиков с двух сторон), перитрихи(по всей пов-ти)

выявляется методом серебрения+ иммерсионная микроскопия ил косвенно по активному движению клеток в нативном препарате.

ворсинки(пили и фимбрии): сост. из белка пилина. выявляются электрон. микроскопией. делятся на F-пили (обесп. конъюгацию) и фимбрии общего порядка (обесп. адгезию)

2) Молекулярная гибридизация. Полимеразная цепная реакция (пцр).

Метод молекулярной гибридизации основан на способности ДНК к денатурации (при 80-100 градусах или обработке щелочью) и ренатурации (при охлаждении до 40-60 градусах, т.н. отжиг). Для обнаружения в исследуемом материале нуклеиновых кислот-мишеней используются молекулярные зонды, получаемые из виурсов или микробных клеток. После отжига зонд оказывается включенным в ренатурированную нуклеиновую кислоту и может быть оьнаружен по имеющейся метке методами РИА, ИФА и МИФ.

Можно проводить в растворе или на фильтрах путем прямого нанесения растворов нуклеиновых кислот на фильтр (дот или слот-боты) или после их фракционирования в агарозном геле (Саузерн- и Нозерн-боты).

В растворе и блот-гибридизация используются при дигностике инфекционных заболеваний для обнаружения в материале от больного нуклеиновой кислоты возбудителя.

Саузерн- и Нозерн-блоты позволяют обнаружить структурные изменения в молекулах нуклеиновых кислот. Метод применяется для выявления генетических нарушений на уровне макроорганизма.

Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить микроб в ис­следуемом материале (воде, продуктах, ма­териале от больного) по наличию в нем ДНК микроба без выделения последнего в чистую культуру.

Для проведения этой реакции из исследу­емого материала выделяют ДНК, в которой определяют наличие специфичного для дан­ного микроба гена. Обнаружение гена осу­ществляют его накоплением. Для этого необ­ходимо иметь праймеры комплементарного З'-концам ДНК. исходного гена. Накопление (амплификация) гена выполняется следую­щим образом. Выделенную из исследуемого материала ДНК нагревают. При этом ДНК распадается на 2 нити. Добавляют праймеры. Смесь ДНК и праймеров охлаждают. При этом праймеры, при наличии в смеси ДНК искомо­го гена, связываются с его комплементарными участками. Затем к смеси ДНК и праймера добавляют ДНК-полимеразу и нуклеотиды. Устанавливают температуру, оптимальную для функционирования ДНК-полимеразы. В этих условиях, в случае комплементарное™ ДНК гена и праймера, происходит присоединение нуклеотидов к З'-концам праймеров, в резуль­тате чего синтезируются две копии гена. После этого цикл повторяется снова, при этом ко­личество ДНК гена будет увеличиваться каждый раз вдвое. Проводят реакцию в специальных приборах — амплификаторах. ПЦР применяется для диагностики вирусных и бактериальных инфекций.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]