- •Содержание
- •Раздел I
- •Правила работы в учебной микробиологической лаборатории
- •Самостоятельная работа студентов
- •Занятие 2 Методы микроскопического исследования микроорганизмов (продолжение). Структура бактериальной клетки. Сложные методы окраски
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Занятие 3 Морфология спирохет, риккетсий, хламидий, микоплазм,
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Занятие 5
- •Контрольное занятие по разделу
- •«Морфология микроорганизмов»
- •Тематические опросы к контрольному занятию
- •Раздел II
- •Физиология микроорганизмов
- •Занятие 6
- •Питание микроорганизмов. Условия культивирования.
- •Методы выделения чистых культур (аэробов и анаэробов)
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методы выделения чистых культур
- •Занятие 7
- •Основные механизмы обмена веществ.
- •Культуральные свойства бактерий. Пигменты.
- •Бактериальные ферменты, классификация, методы определения
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Занятие 8
- •Самостоятельная работа студентов Задание 13. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с применением бумажных дисков:
- •Задание 14. Определение чувствительности выделенной культуры микроорганизмов методом серийных разведений.
- •Задание 15. Дезинфекция.
- •Классификация антибиотиков по механизму действия
- •Пользуясь значениями диаметров зоны задержки роста эталонных штаммов, необходимо заполнить следующую таблицу:
- •Занятие 9
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов Задание 16. Исследование микрофлоры воздуха. Результаты отразить в следующей таблице:
- •Задание 17. Определение микробного числа воды. Результаты внести в таблицу:
- •Задание 18. Исследование микрофлоры кожи и слизистой носа. Результаты отразить в следующей таблице:
- •Задание 19. Изучение количественного и качественного состава микрофлоры толстого отдела кишечника. Результаты внести в таблицу:
- •Занятие 10 Общая вирусология. Бактериофаги. Применение бактериофагов в медицине
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методические указания к выполнению работы
- •Занятие 11 Генетика микроорганизмов. Медицинская биотехнология. Генетическая инженерия
- •Вопросы для проверки исходного уровня знаний
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методические указания к выполнению работы
- •Опыт коньюгации проводят в чашках с селективной средой – минимальным агаром с добавлением глюкозы и стрептомицина. Постановка опыта коньюгации:
- •2) Культуру e.Coli gal- реципиент.
- •Постановка опыта трансдукции:
- •Занятие 12
- •Контрольное занятие
- •По разделу «Физиология микроорганизмов»
- •Тематические вопросы к контрольному занятию
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
- •Раздел III иммунология
- •Основные вопросы занятия
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методические указания к заданию 26
- •Методические указания к заданию 29
- •Методические указания к практическому заданию 30
- •Методические указания к заданию 33
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методические указания к практическому заданию 38
- •Методические указания к практическому заданию 39
- •Методические указания к практическому заданию 40
- •Основные вопросы занятия
- •Методические указания к выполнению задания 42
- •Методические указания к выполнению заданий 43 и 44
- •Методические указания к выполнению задания 46
- •Методические указания к выполнению задания 47
- •Методические указания к занятию 16
- •Занятие 17 Иммунный статус организма человека, методы оценки. Иммунопатология. Иммунотерапия и иммунопрофилактика инфекционных болезней. Иммунобиологические препараты
- •Основные вопросы занятия
- •Методические указания к занятию 17
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
- •Занятие 18
- •Контрольное занятие по разделам:
- •«Учение об инфекции», «Иммунитет»
- •Вопросы к контрольному занятию
- •Иммунограмма
- •Общая микробиология и иммунология Методические указания
- •628400, Россия, Ханты-Мансийский автономный округ,
- •Методические указания
Занятие 2 Методы микроскопического исследования микроорганизмов (продолжение). Структура бактериальной клетки. Сложные методы окраски
Студент должен:
знать:
ультраструктуру бактериальной клетки;
способы выявления структурных компонентов клетки;
уметь:
окрашивать мазки сложными методами (по Циль-Нильсену, Ожешки, Нейссеру, Бурри-Гинсу, Романовскому-Гимзе) для выявления клеточных структур;
окрашивать мазки по методу Грама (для отличия одних видов бактерий от других, что является важным таксономическим признаком).
Вопросы для проверки исходного уровня знаний
Принципы классификации микроорганизмов. Особенности систематики бактерий. Систематизация бактерий в определителе Берджи.
Понятия «вид», «штамм», «культура», «клон», «популяция».
Основные анатомические структуры клетки прокариотов.
Клеточная стенка, ее строение у грамположительных и грамотрицательных бактерий, значение. Выявление клеточной стенки по методу Грама.
Строение цитоплазматической мембраны и мезосом бактериальной клетки, их роль в жизнедеятельности бактерий.
Нуклеоид бактерий, его отличия от ядер эукариотических клеток. Биологическая функция нуклеоида, его химическая природа, строение. Метод выявления нуклеоида по Романовскому-Гимзе.
Рибосомы бактерий, их химический состав, строение, функции.
Метод Циля-Нильсена, его сущность и техника окраски, практическое применение. Примеры кислоустойчивых патогенных бактерий.
Споры бактерий, образование, значение. Ультраструктура споры, ее прорастание. Окраска по методу Ожешко.
Капсулы и микрокапсулы бактерий, условия образования, химическая природа, значение, примеры патогенных капсулообразующих бактерий. Выявление капсул методом Бурри-Гинса.
Внутриплазматические включения бактерий, химическая природа, значение, примеры. Выявление включений валютина у дифтерийных палочек, сущность окраски по Нейссеру.
Жгутики бактерий, их строение, химический состав. Подразделения жгутиковых бактерий, примеры бактерий с различным типом расположения жгутиков. Методы выявления жгутиков (прямой; косвенный метод полужидких сред).
Ворсинки (фимбрии) бактерий, их строение, подразделение, значение. Хеморецепторы. Примеры.
Самостоятельная работа студентов
Задание 2. Сложные методы окраски. Результаты отразить в следующей таблице:
Материал |
Ход исследования |
Результат |
Смесь из двух культур для окраски (Грам+ и Грамм– бактерии) |
а) приготовление препарата; б) окраска по Граму; в) микроскопия |
|
Культура спорообразующих бактерий |
а) приготовление препарата, окраска по Ожешко и простым методом; б) микроскопия |
|
Мокрота больного (для выявления кислотоустойчивых микобактерий) или демонстрационный препарат. Работа с клиническим материалом проводится под руководством преподавателя |
а) приготовление препарата, окраска по Циль-Нильсену; б) микроскопия; в) зарисовка |
|
Культура бактерий рода Klebsiella, демонстраци-онный препарат, окрашен-ный по Бурри-Гинса |
а) приготовление препарата, окраска по Бурри-Гинсу; б) микроскопия; в) зарисовка |
|
Характеристика метода Грама представлена в следующей таблице:
Цель применения |
Для отличия грамположительных и грамотрицательных, что является важным таксономическим признаком |
Реактивы: - красящие раст-воры; - протрава; - дифференциру-ющее вещество |
1. Карболовый генцианвиолет или фильтро-вальная бумага, пропитанная раствором этой краски. 2. Водный раствор фуксина или пропитанная раствором карболового фуксина фильтровальная бумага. 3. Раствор Люголя (300 мл дистилированной воды 1,0 йода и 2,0 KI). 4. Этиловый спирт |
Способ фиксации |
В пламени горелки |
Этапы окраски |
1. На фиксированный мазок поместить филь-тровальную бумагу, пропитанную генцианвио-летом, смочить ее водой, выдержать 2–3 мин. 2. Снять бумагу, слить с препарата оставшу-юся краску и налить раствор Люголя на 1 мин. 3. Слить раствор Люголя, слегка просушить препарат. Провести дифференциацию спиртом, налив спирт на мазок. 4. Тщательно промыть препарат водой. 5. Дополнительно докрасить препарат с помощью карболового фуксина в течение 2 мин. 6. Промыть водой, просушить |
Сущность метода |
При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствором Люголя образуется комплексное соединение краски с йодом, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных бактерий (остаются фиолетовыми) и удаляются из грамотрицательных (при дополнительной ок-раске фуксином приобретают красный цвет) |
Результат (описа-ние микроскопической картины) |
Например: грамположительные микрококки, стафилококки (сине-фиолетового цвета), грамотрицательные палочки (красного цвета) |
По этой же форме ведется запись и других сложных методов окраски. Схемы заполняются дома при подготовке к занятию.
В следующей таблице представлены методы определения подвижности бактерий:
Прямой |
Косвенный |
Приготовление и мик-роскопия из живых культур микроорганизмов: 1) висячая капля (световая и фазово-контрастная микроскопия); 2) раздавленная капля |
Культивирование в полужидких средах (0,4 %-й агар). Засев производят: а) уколом прямой петли до середины агарового слоя. В процессе роста подвижные бактерии мигрируют от линии инокуляции, образуя диффузную мутную зону, тогда как неподвижные растут только по ходу петли; б) в полужидкую среду помещают открытую с обоих концов стерильную стеклянную трубочку, в которую вносят инокулят. Подвижные бактерии мигрируют вниз, выходят из нижнего конца трубочки и начинают двигаться вверх к поверхности среды, где усиленно растут. Этот метод пригоден и для селекции высокоподвижных штаммов, например, для приготовления Н-Аг |