С пособы окраски

Негативные

С помощью специальных приемов окрашивается фон мазка, и тогда на нем хорошо видны неокрашенные бактериальные клетки

Позитивные

Окрашиваются сами бактериальные клетки, хорошо видимые на неокрашенном фоне мазка

Простые

Используется один краситель

Сложные

Используются два и более

красителей

Дифференциально-диагностические

Специальные

При простом методе используется одно окрашивающее ве­щество (фуксин, метиленовая синька и др.) с экспозицией 1-2 минуты. После окрашивания краситель сливают, препарат про­мывают и высушивают. Окраска простым способом позволяет выявить наличие или отсутствие микроорганизма, его форму, расположение клеток, определить размеры.

Сложные методы окраски выявляют химические и струк­турные особенности микроорганизмов, при этом обычно после­довательно применяют несколько красителей.

Одним из самых распространенных сложных методов яв­ляется окраска микробов по Граму. Этот метод был введен в 1884 году датским микробиологом Гансом Кристианом Грамом и является важным таксономическим признаком. Все бактерии по способности окрашиваться красителями трифенилметанового ряда в сочетании с йодом делятся на две большие группы.

К одной относятся бактерии, в клетках которых комплекс, образуемый генциановым фиолетовым и йодом, удерживается при обработке их спиртом. Такие бактерии называются грамположительными.

К другой группе относятся бактерии, не обладающие свойством удерживать комплекс и обесцвечивающиеся при обработке спиртом. Их называют грамотрицательными. Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианового фио­летового с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.

Самостоятельная работа студента

на практическом занятии

Последовательность действий (этапы)	Способы действия (ориентиры)
I. Ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории	Прочитать и продумать «Правила работы студентов, работающих на кафедре микробиологии».
II. Приготовить и окрасить препараты из бактериальных культур	Внимательно проследите за демон­страцией преподавателем техники приготовления и окраски препаратов; приготовьте мазки-препараты из куль­тур стафилококков и кишечной палоч­ки. Окрасьте приготовленные мазки про­стым способом – водным фуксином и метиленовой синью; ознакомьтесь с наиболее употребительными краска­ми, применяемыми в микробиологической практике.
III. Микроскопировать и зарисовать окрашен-­ ные мазки-препараты различ­ных форм бактерий	Прочитайте «Правила употребления иммерсионной системы»; внимательно проследите за демонстрацией препо­давателем техники микроскопии пре­паратов с помощью иммерсионной си­стемы; самостоятельно промикроскопируйте один из препаратов, проверяя каждый из этапов работы. Промикроскопируйте и зарисуйте мазки-препараты различных форм бактерий: круглые (стафилококк, сарцина, стрептококк), извитые (вибрион, спирилла).
IV. Сдать преподава­телю выполненную работу	Дайте на просмотр преподавателю пре­параты и тетрадь, приведите в порядок рабочее место и сдайте его дежурному студенту.

Тема: «Строение бактериальной клетки. Сложные методы окраски. Обнаружение капсулы и оболочки, спор у бактерий»

Цель:

– научиться различать отдельные структурные элементы

бактерий с использованием сложных методов окраски.

Задачи:

– овладеть навыками сложных методов окраски;

– уметь обнаруживать структурные элементы бактерий при

микроскопировании.

Ультраструктура бактерий изучается с помощью электрон­но-микроскопических и микрохимических исследований. К обя­зательным структурным элементам бактерий относится оболоч­ка, цитоплазма, ядерное вещество (нуклеоид), к необязатель­ным – споры, жгутики, капсула, различные включения.

У грамположительных бактерий наиболее выражен муреиновый слой, у грамотрицательных – липополисахаридный. Под влиянием некоторых факторов (лизоцим, антибиотики, УФЛ и др.) происходит растворение клеточной стенки: частичное (сферопласты) или полное (протопласты). Клеточная стенка определяет форму клетки и обладает прочностью, ригидностью, регулирует осмотическое давление и аэрацию, выполняет трофи­ческую функцию. Цитоплазматическая мембрана прилегает к внутренней поверхности стенки клетки и состоит из трех слоев: липидного, протеинового и полисахаридного. Цитоплазматиче­ская мембрана выполняет функцию разделительной перегородки.

Нуклеоид содержит дезоксирибонуклеиновую кислоту, локализован в центральной части клетки.

Для обнаружения нуклеоида используют микрохимическую реакцию Фельгена с применением слабокислотного гидролиза. При этом освобождающаяся дезоксирибоза переходит в альдегиды, вступающие в реакцию с бесцветной фуксинсернистой кислотой специального реактива Шиффа. При этом нуклеоид окрашивается в красно-фиолетовый цвет.

Ядерную субстанцию можно выявить при электронно-микроскопических исследованиях ультратонких срезов бактерий.

Обнаруживаются споры при окраске по методу Циля-Нильсена.