Самостоятельная работа студента на практическом занятии

1. Приготовление чашек Петри с мясопептонным агаром.

2. Приготовление скошенного мясопептонного агара.

3. Посев культуры стафилококка на скошенный агар и в мясопептонный бульон.

4. Просмотр демонстрации, оформление и подпись протоко­лов.

5. Произвести посев смеси бактерий на чашку с питательной средой, обосновать цель высева.

Методические указания Работа 1

Для приготовления скошенного агара пробирки с 3-4 мл расплавленного мясопептонного агара оставьте до полного за­стывания в наклонном положении. Угол наклона 25-30° достигается путем подкладывания под пробирки рейки.

Работа 2

Для приготовления чашек Петри с агаром фламбируйте над горелкой горлышко колбы с расплавленным мясопептонным агаром и разлейте в стерильные чашки Петри расплавленный агар. Толщина слоя агара 0,5-0,7 см.

Работа 3

При пересеве культуры на жидкие и плотные питательные среды необходимо соблюдать стерильность. В левую руку возь­мите обе пробирки (с ростом культуры и питательной средой), поместите их на 2 пальца левой руки в полугоризонтальном по­ложении и придерживайте их большим пальцем так, чтобы все манипуляции осуществлять под контролем глаза. Прокалите петлю на пламени горелки перед взятием культуры. Затем тремя пальца­ми правой руки (как писчее перо) возьмите бактериологическую петлю, а мизинцем над пламенем выньте пробки из пробирок.

1. При посеве культуры на скошенный агар пробирку со средой держите в руке скошенной поверхностью вверх. Простерилизованной и охлажденной петлей возьмите материал для по­сева (в данном случае культуру стафилококка) и осторожно вве­дите петлю в конденсационную жидкость скошенного агара. За­тем скользящим движением по скошенной поверхности среды нанесите штрихи от одной стенки пробирки к другой снизу вверх; после посева прокалите петлю.

2. Посев культуры в агаровый столбик (уколом) про­изводят в плотную среду (МПА) при помощи бактерио­логической петли. Для этого прокаленной и остуженной петлей прикасаются к культуре микроба и вносят ее в пробирку с питательной сре­дой. Посев производят уколом в столбик среды до дна пробирки.

3 При посеве культуры бактерий в жидкие питательные среды необходимо учесть следующее: не допускать, чтобы жидкая среда выливалась и смачивала пробку при полугоризонтальном положении пробирки.

Бактериологический метод исследования

Это основной метод, используемый при лабораторной ди­агностике инфекционных заболеваний. Сущность бактериологи­ческого метода исследования – посев патологического материа­ла от больных и выделение чистой культуры возбудителя с по­следующей идентификацией его по морфологическим, культуральным, тинкториальным, биохимическим и антигенным приз­накам.

Метод выделения чистых культур, позволяющий изолиро­вать отдельные виды микробов из той или иной естественной среды их обитания, является важнейшим методом микробиоло­гического исследования. Первым, кто предложил метод выделения чистой культуры, был Л. Пастер.

Способ Пастера, основанный на применении жидких пита­тельных сред, обеспечивал выделение чистой культуры преиму­щественно из материала, содержащего один вид микроба (например, из крови при септицемии и др.). Он был менее эффек­тивен в тех случаях, когда необходимо было изолировать от­дельные виды микроорганизмов из их смеси. Между тем, в есте­ственных условиях материал для бактериологического исследования (мокрота, гной, почва, вода и др.) чаще всего содержит смесь разнообразных микроорганизмов.

Успешное выделение бактериальных смесей и изолирован­ное изучение отдельных видов стало возможным благодаря усо­вершенствованию метода выделения чистых культур Робертом Кохом (R. Косh), применившим для этой цели в 1881 году плот­ные питательные среды, на которых при посеве удается распре­делить материал таким образом, что отдельные микробные клет­ки располагаются изолированно друг от друга. При соответ­ствующих условиях (питательная среда, оптимальная температу­ра) размножение изолированных клеток дает потомство одного и того же вида, т.е. чистую культуру данного вида микробов.

Через известный период (чаще всего через сутки) на тех мес­тах плотной питательной среды, на которых оказались изолиро­ванные клетки, образуются популяции размножившихся микро­бов – так называемые колонии, видимые невооруженным гла­зом. Они не представляют собой хаотического скопления микро­бов, о чем можно судить уже по тому, что для многих видов мик­робов колонии имеют характерную структуру, в силу чего можно ориентировочно определить флору исследуемого материала и выбрать те колонии, которые подлежат дальнейшему изучению. Пересев таких колоний на соответствующую питательную среду и представляет собой выделение чистой культуры.

Выделение чистых культур с последующей их идентифика­цией имеет первостепенное значение в диагностике инфекцион­ных заболеваний, обеспечивая быстрое их распознавание, свое­временное лечение и профилактику. Оно не менее важно в определении микрофлоры при исследовании санитарно-гигиенического состояния объектов внешней среды (воздух, вода, почва и т.д.), а также при выполнении научных исследований.

В настоящее время имеются многочисленные методы выде­ления чистых культур. Некоторые из них используются ограни­ченно, другие находят широкое применение. Наиболее универ­сальными являются излагаемые ниже методы выделения чистых культур бактерий (метод Дригальского). В то время как другие микроорганизмы – спирохеты, простейшие – требуют применения специальных методов выделения или совсем не могут быть выделены на искусственных питательных средах (некоторые простейшие, риккетсии, вирусы).

Методы выделения чистых культур из микробных смесей принято делить на две основные группы: методы, основанные на принципе механического разобщения микробов в питательной среде, и методы, основанные на использовании биологических свойств микробов. Первая группа включает методы изолирова­ния отдельных клеток: 1) в глубине питательной среды; 2) на поверхности среды и 3) под контролем глаза. Во второй группе ис­пользуют такие свойства микробов, как их подвижность, отно­шение к температуре, кислороду и их патогенные свойства.