1.1. Выделение дезоксирибонуклеопротеинов из селезенки.

В ступке растирают 5 г селезенки с равным количеством песка, добавляют 5 мл охлажденного 2 М раствора хлорида натрия, а затем постепенно небольшими порциями 25 мл охлажденного 1 М раствора хлорида натрия. Растирание продолжают 10-15 мин в ступке, охлаждаемой льдом. Полученную массу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 15 мин. Измеряют объем центрифугата и вливают его в шестикратный объем воды тонкой струей, медленно размешивая жидкость деревянной палочкой. Нуклеопротеин в виде нитей наматывается на палочку.

Если выделился хлопьевидный осадок, то ему дают отстояться, а остаток жидкости подвергают центрифугированию. Осадок после центрифугирования исследуют на содержание в нем ДНК.

1.2. Реакция с дифениламином.

Дезоксирибонуклеиновую кислоту обнаруживают по ее реакции с дифениламином, который с дезоксирибозой дает синее окрашивание. Рибонуклеиновая кислота (или рибоза), в отличие от ДНК, дает с этим реактивом зеленое окрашивание.

В пробирку переносят немного осадка ДНК и растворяют его в 1-2 мл 0,4%-ного раствора гидроксида натрия. К раствору добавляют равный объем раствора дифениламина и смесь нагревают в кипящей водяной бане около 10-15 мин.

2. Хромопротеины.

Хромопротеины состоят из простого белка и связанного с ним окрашенного небелкового компонента. Различают гемопротеины, магнийпорфирины и флавопротеины. Представителем хромопротеинов является белок эритроцитов крови млекопитающих гемоглобин. Его белковой частью является глобин, а небелковой – гем (протопорфирин, пиррольные кольца которого связаны с атомом железа). К группе гемопротеинов относят также миоглобин, цитохромную систему, каталазу, пероксидазу. Хромопротеины участвуют в окислительно-восстановительных реакциях, дыхательной цепи и внешнем дыхании, фотосинтезе, свето- и цветовосприятии и др.

2.1. Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина.

Бензидиновая проба применяется при клинических и судебно-медицинских исследованиях для обнаружения минимальных количеств крови в биологических объектах. При действии на гемоглобин концентрированной уксусной кислоты гем переходит в гемин, который и катализирует окисление в дифенохинондиимин пероксидом водорода.

Дифенохинондиимин конденсируется с молекулой неокисленного бензидина с образованием окрашенного комплекса сине-зеленого цвета.

В пробирку наливают 0,5 мл сильно разведенной крови и кипятят несколько минут, затем охлаждают. Добавляют 0,5 мл раствора бензидина и несколько капель 3% раствора пероксида водорода.

Задания

1. Цитохром с содержит 0,426% железа. Рассчитайте минимальную молярную массу этого белка.

2. После пожара обнаружен труп. Каким простым способом можно определить, погиб ли человек во время пожара или он умер до пожара?

3. Приведите формулы углеводов, входящих в состав ДНК и РНК.

Контрольные вопросы

1. Перечислите функции хромопротеинов в организме.

2. Рассмотрите структуру и функции гемоглобина А.

3. Почему гемоглобин зародыша и взрослого обладает разным сродством к кислороду?

4. Что лучше растворяется в воде: НК или НП? Почему?

5. Какой связью связываются нуклеотиды в ДНК и РНК?

6. Какие связи удерживают полидезоксирибонуклеотидные цепи в биспиральной молекуле ДНК?