2 . Цветные реакции на белки.
Реактивы и оборудование: раствор белка, реактив Миллона, 10% раствор сахарозы, конц. серная кислота, уксусная кислота ледяная, 0,2% раствор нингидрина в спирте, пробирки, спиртовки, пипетки.
2.1. Реакция Миллона.
Реактив Миллона состоит из нитратов ртути (I) и (II) в HNO3 с примесью HNO2. Реакция реактива Милона с белками обусловлена присутствием в них остатка тирозина. При нагревании раствора белка с реактивом Миллона образуется нитросоединение тирозина, которое превращается в ртутную соль нитротирозина:
В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и 0,5 мл реактива Миллона. Образуется белый осадок под действием соли ртути и азотной кислоты, входящих в состав реактива Миллона. Пробирку осторожно нагревают на спиртовке.
2.2. Реакция Шульце – Распайля.
Реакция Шульце - Распайля обусловлена наличием в белке остатков триптофана. Они, взаимодействуя с оксиметилфурфуролом, дают продукты конденсации, окрашенные в вишнево-красный цвет. Оксиметилфурфурол образуется из фруктозы в присутствии концентрированной серной кислоты:
К 0,5 мл раствора белка добавляют 1-2 капли 10% раствора сахарозы и по стенке пробирки наслаивают 1 мл конц. серной кислоты.
3. Реакции осаждения белков.
Реактивы и оборудование: раствор белка, конц. азотная кислота, конц. соляная кислота, конц. серная кислота, 20% раствор сульфосалициловой кислоты, 5% раствор трихлоруксусной кислоты, насыщенный раствор сульфата аммония, сульфат аммония кристаллический измельченный, 5% раствор сульфата меди, 5% раствор ацетата свинца, пробирки, пипетки, спиртовки, воронки, фильтровальная бумага.
3. 1. Осаждение белков солями тяжелых металлов.
Белки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (медь, ртуть, свинец и др.) денатурируют и образуют нерастворимые в воде комплексные соединения вследствие адсорбции тяжелого металла на поверхности белковой молекулы. На этой способности белков основано использование их в качестве противоядия при отравлении тяжелыми металлами.
В две пробирки наливают по 0,5 мл раствора белка. В первую добавляют 2 капли 5% раствора сульфата меди, во вторую – 2 капли 5% раствора ацетата свинца.
3.2. Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами.
Выпадение белка в осадок при взаимодействии с концентрированными минеральными кислотами обусловлено дегидратацией белковых молекул, образованием нерастворимых комплексных солей белка и кислот и др. В избытке серной и соляной кислот происходит растворение первоначально выпавших осадков белка. Избыток азотной кислоты не растворяет осажденный белок. Реакция с азотной кислотой используется при клинических исследованиях мочи на присутствие в ней белка (проба Геллера).
В пробирку наливают 1 мл концентрированной азотной кислоты и затем, наклонив пробирку, осторожно приливают по стенке равный объем раствора белка. Встряхивают пробирку и добавляют избыток азотной кислоты. Повторяют опыт с концентрированными соляной и серной кислотами.
3.3. Осаждение белков органическими кислотами.
Реакции с трихлоруксусной и сульфосалициловой (2-гидрокси-5-сульфобензойной) кислотами являются весьма специфическими и чувствительными. Их используют в клинических лабораториях при обнаружении белка в моче и других биологических жидкостях. Сульфосалициловая кислота способна осаждать продукты распада белков - пептиды. Трихлоруксусная кислота осаждает только белки. Ее используют при определении небелкового (остаточного) азота крови, в состав которого входят продукты распада и обмена белков.
В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка. В одну пробирку добавляют 1-2 капли сульфосалициловой кислоты, а в другую - трихлоруксусной кислоты.