Требования к индикаторной организмам:

1 Отвечать на воздействие среды (или обеззараживания подобно патогенным микроорганизмам).

2. Постоянно присутствуют в больших количествах по сравнению с патогенными микроорганизмами.

3. Поступают из того же источника что и патогенные микроорганизмы.

4. Легко выделяются и подсчитываются.

Значительная часть патогенных микроорганизмов попадает в водные объекты с фекалиями человека и животных. Эти загрязнения, независимо от наличия в них патогенных микробов, всегда содержат непатогенный микроорганизм - кишечную палочку (Escherichia Coli), постоянно присутствующую в кишечнике человека и теплокровных животных. Количество кишечных палочек в воде характеризует степень ее загрязнения фекальными стоками.

показатели

Микробное число - как критерий бактериологического загрязнения используют подсчет общего числа образующих колонии бактерий (Colony forming Units - CFU) в 1 мл воды. Полученное значение называют общим микробным числом.

• Микробное число артезианских вод не превышает 10-30 в 1 мл.

• В шахтных колодцах показатель составляет 200-400 на 1 мл,

• В чистых водоемах - 1000 на 1 мл,

• В водопроводной воде, после обеззараживания - 100 на 1 мл.

В основном для выделения бактерий и подсчета общего микробного числа используют метод фильтрации через мембрану.

При этом методе анализа воды определенное количество воды пропускается через специальную мембрану с размером пор порядка 0.45 мкм. В результате, на поверхности мембраны остаются все находящиеся в воде бактерии. После чего мембрану с бактериями помещают на время в специальную питательную среду при температуре 30-37 ° С. Во время этого периода, называемого инкубацийним, бактерии получают возможность размножиться и образовать хорошо заметны колонии, которые уже легко поддаются подсчету.

Так как такой метод анализа воды предусматривает только определение общего числа колонии - образующих бактерий разных типов, то по его результатам нельзя однозначно судить о присутствии в воде патогенных микробов. Однако, высокое микробное число свидетельствует об общей бактериологической загрязненности воды и о высокой вероятности наличия патогенных организмов.

Определение E. coli и ее группы является важным, потому что они выделяются с испражнениями людей и животных и является доказательством фекального загрязнения. Это относительный показатель риска кишечных инфекций с водным путем передачи.

Для оценки загрязненности воды патогенными бактериями определяют содержание в ней кишечной палочки. Бактериальное загрязнение измеряют коли-титром и коли-индексу.

Коли-титр - обьем воды, в котором содержится одна кишечная палочка.

Коли-индекс - число кишечных палочек, содержащихся в 1 л воды.

водоисточник	Коли-титр	Коли-индекс
артезианская	500 мл	Не болей 2
шахтные колодцы	100 мл	НЕ более 10
водопровод	НЕ менее 300	3

Для получения более точных данных о наличии фекального загрязнения объектов и его степени считается целесообразным наряду с определением коли-титра (коли-индекса) проводить одновременный количественный учет в исследуемом материале и других санитарно-показательных микроорганизмов (например, протея, энтерококков, споровых анаэробов , кишечных бактериофагов).

Для определения коли-индекса используют метод мембранных фильтров или непосредственный посев различных количеств исследуемого материала на плотные питательные среды. Суть метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры №2 или №3, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируемой при t ° 37 °, а затем исследуют выросшие на поверхности фильтра темно-красные с металлическим блеском, розовые и прозрачные колонии. Из колоний каждого типа готовят мазки и окрашивают их по Граму. Колонии различных типов проверяют на оксидазную активность, которая должна быть отрицательной. Бесцветные и розовые колонии дополнительно засевают в полужидкую среду с глюкозой и индикатором, на котором в течение 24-часовой инкубации при t ° 37 ° должны образовываться кислота и газ. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала.

Коли-титр определяют бродильным методом, заключается в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на среды накопления (глюкозопептонную или лактозопептонную с индикатором и поплавком и другие подобные среды), которые выдерживают t ° 37 °. Большие объемы засевают на концентрированную среду, малые объемы - в пробирки со средой нормальной концентрации. Из всех помутневших пробирок независимо от образования кислоты и газа делают высев на среду Эндо с последующей Индентификация выросших колоний. Ориентировочно за коли-титр принимают то наименьший объем, при посеве которого на среды накопления обнаружены кишечные палочки.