Визначення вмісту креатиніну в біологічних рідинах

Завдання 1. Визначити вміст креатиніну в сироватці крові.

Принцип. Креатинін при взаємодії з пікриновою кислотою в лужному середовищі утворює сполуки оранжево-червоного кольору, інтенсивність якого визначають фотометрично.

Хід роботи. Дослідна проба - вносять 0,5 мл досліджуваної сироватки крові, 1 мл дистильованої води та 0,5 мл трихлороцтової кислоти; калібрувальна проба (еталонна) - вносять 0,5 мл калібрувального розчину (концентрація креатиніну — 177 мкмоль/л), 1 мл дистильованої води та 0,5 мл трихлороцтової кислоти. Вміст обох пробірок перемішують, залишують стояти протягом 5 хв, потім центрифугують при 2500-3000 об/хв протягом 5 хв. Надосадову рідину зливають. У дві центрифужні пробірки вносять по 1 мл надосадової рідині з кожної проби, додають по 0,5 мл пікринової кислоти (0,04 моль/л) і 0,5 мл NaOH (0,75 моль/л). Перемішують і точно через 20 хв фотометрирують в 1 см кюветі при 505 нм проти розчину порівняння. Розчин порівняння: у центрифужну пробірку вносять 1,5 мл дистильованої води та 0,5 мл трихлороцтової кислоти; перемішують. З цього розчину беруть 1 мл і переносять в окрему пробірку, додають 0,5 мл пікринової кислоти та 0,5 мл натрію гідроксиду.

Концентрацію креатиніну (Х) в мкмоль/л у сироватці крові розраховують за формулою: Х=(Сет.×Ед.)/Еет., де Сет. - концентрація креатиніну в еталонній пробі (177 мкмоль/л); Ед. - оптична щільність дослідної проби; Еет. - оптична щільність еталонної проби. У нормі вміст креатиніну у сироватці крові (натще) складає: для чоловіків - 61-115 мкмоль/л, жінок - 53-97 мкмоль/л.

Увага! При роботі необхідно строго дотримуватися правил роботи з отруйними речовинами в хімічних лабораторіях, тому що пікринова кислота - отрута, а трихлороцтова кислота та NaOH - їдкі речовини!

Завдання 2. Визначити вміст креатиніну в сечі.

Принцип. Той же.

Хід роботи. Визначення проводять в центрифужних пробірках, які заповнюють відповідно до схеми:

	Дослідна проба	Розчин порівняння
Сеча розведена 1:100 (мл)	0,5	-
Вода дистильована (мл)	0,25	0,75
Трихлороцтова кислота (мл)	0,25	0,25
Пікринова кислота (мл)	0,5	0,5
NaOH (мл)	0,5	0,5

Перемішують вміст пробірок і точно через 20 хв вимірюють оптичну щільність дослідної та калібрувальної проби проти розчину порівняння в 1 см кюветі при 505 нм. Еталонний (калібрувальний) розчин готовлять як й у випадку визначення креатиніну в сироватці крові. Кількість креатиніну (У) у ммоль/добу в сечі розраховують за формулою:

У=(Сет.×Ед.×Д×50)/(Еет.×1000), де Сет. - концентрація креатиніну в еталонній пробі (177 мкмоль/л); Ед. - оптична щільність дослідної проби; Еет. - оптична щільність еталонної проби; Д - добовий діурез (1,5 л); 1000 - перевід мкмоль в ммоль; 50 - розведення сечі. У нормі вміст креатиніну в сечі складає: для чоловіків - 8,8-17,7 ммоль/добу (1,0-2,0 г); жінок - 7,1-15,9 ммоль/добу (0,8-1,8 г).

Клініко-діагностичне значення. Концентрація креатиніну в сироватці крові здорових людей відносно постійна в результаті строгої залежності між його утворенням та виділенням. Креатинін відноситься до безпорогових речовин, він фільтрується тільки клубочками, але не реабсорбується. Його секреція канальцями можлива тільки при високій концентрації в крові. Визначення вмісту креатиніну проводять для дослідження функції нирок. Концентрація креатиніну в плазмі є зворотно пропорційною до величини фільтрації. Критичною верхньою границею встановлена концентрація на рівні 115 мкмоль/л. За її наростанням в крові визначають ступінь хронічної ниркової недостатності. Також підвищення вмісту креатиніну в крові (гіперкреатинінемія) може спостерігатися при кишковій непрохідності, гіперфункції надниркових залоз, сечокам’яній хворобі.

Підвищена екскреція креатиніну з сечею спостерігається при вживанні в їжу великої кількості м’ясних продуктів, синдромі тривалого роздавлення м’язової тканини, тяжкій фізичній праці, лихоманках, пневмоніях. Зниження виділення креатиніну з сечею спостерігається при хронічному нефриті з уремією, м’язовій атрофії, лейкемії та ін.