Цитохимические биологические исследования

Эти методы представляют собой варианты описанных биологиче­ских исследований in vitro. Они обычно обладают большей чув­ствительностью, чем радиоиммунологические методы, но значи­тельно более громоздки и дороги при расчете на одно определение. Результаты цитохимических биологических исследований количе­ственно оценивают на гистологических срезах с помощью специ­ального устройства — микроденситометра. Гистологические срезы готовят из специфических для данного гормона тканей или клеток-мишеней, до того подвергшихся воздействию разных концентра­ций стандартного и испытуемого гормона. С помощью денситомет­ра сканируют область диаметром 250—300 нм для количественной оценки цветной реакции, обусловленной изменением редокс-состояния объекта под влиянием гормональной стимуляции. Для коли­чественного анализа используют гистологические красители, чув­ствительные к этим изменениям.

Первая система цитохимического биологического исследования была разработана для АКТГ, и тканью-мишенью в этой системе служила кора надпочечников [8]. Другие способы биологического определения АКТГ либо слишком малочувствительны, либо требу­ют больших объемов плазмы. Таким образом, цитохимическое определение редокс-состояния ткани является ценным средством анализа нормальной и измененной функции системы гипотала­мус—гипофиз—надпочечники по уровню АКТГ. Разработан цито­химический метод определения и Л Г, но при этом встретились су­щественные трудности, связанные со значительными колебаниями результатов разных определений и непостоянной чувствительно­стью объекта, что, возможно, отражает известные биологические расхождения у разных животных [9]. Чувствительные специфиче­ские цитохимические методы предложены для определения парат­гормона, АД Г и тиротропина [10, 11]. При дальнейшем усложнении оборудования, которое позволит увеличить число исследова­ний в одном определении, этот метод может найти более широкое применение. Он особенно привлекателен потому, что не требует использования радиоактивных соединений. Цитохимические мето­ды нешироко применяются в клинике и используются в основном в качестве чувствительного способа в научных исследованиях.

Таблица 5—1. Биологические методы определения гормонов in vivo и in vitro

Гормон	Метод	Показатель	Ссылка
АКТГ	In vivo (гипофизэктомированные крысы)	Снижение уровня аскор­биновой кислоты в надпочечниках	[12]
АДГ	In vivo (голодные кры­сы с водной нагруз­кой)	Снижение скорости мочевыделения или уве­личение удельной мас­сы мочи	[13-16]
Холецистокинин	In vitro (полоски желч­ного пузыря кролика)	Сокращение полосок	[17]
ФСГ	In vivo (неполовозре­лые самки крыс)	Увеличение массы яич­ников	[18]
СТГ	In vivo (гипофизэктомированные крысы)	Ширина некальнифицированного эпифизарно­го хряща большебер­цовой кости	[19j
ЛГ/ХГЧ	In vivo (21-дневные гипофизэктомированные крысы)	Увеличение массы вент­ральной части пред­стательной железы	[1,2]
ЛГ/ХГЧ	In vitro (изолированные клетки Лейдига)	Увеличение синтеза и секреции тестостерона в культуральную среду	[6]
Паратгор­мон	In vitro (корковый слой почек крыс)	Образование цАМФ	[20]
Пролактин	In vitro (эксплантаты молочной железы мы­ши)	Активность лактозаминсинтетазы или синтез фосфопротеина	[21]
Ренин	In vitro (активность ре­нина)	Образование ангиотензи­на I из субстрата ре­нина	[22]
Соматоме­дин	In vitro (тазовые руди­менты 11-дневных ку­риных эмбрионов)	Включения 35S-сульфата	[24]
ТТГ	1. In vivo (интактные мыши, получившие предварительно 131I и тироксин)	1. Высвобождение 131I из щитовидной железы в кровь	[25]
	2. In vitro (цитохимиче­ский, сегменты щито­видной железы мор­ской свинки)	2. Активность лизосом­ной нафтиламидазы	[11]

В табл. 5—1 перечислены различные биологические методы in vivo и in vitro, применяемые для определения полипептидных гормонов. Для многих гормонов специфические чувствительные методы биологического определения не разработаны.