Методы типирования антигенов hla-системы (серологические, клеточно-опосредованные), практические аспекты типирования hla-антигенов.

HLA - антигены тканевой совместимости.

На поверхности практически всех клеток организма представлены молекулы (белки), которые носят название антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA - антигены).

Молекулы HLA выполняют роль своеобразных "антенн" на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма.

Синтез белков HLA - системы определяется генами главного комплекса гистосовместимости, которые расположены на коротком плече 6-й хромосомы. Выделяют два основных класса генов главного комплекса гистосовместимости:

I класс включает гены локусов А, В, С;

II класс - D-область (сублокусы DR, DP, DQ).

Серологическое HLA типирование проводится на выделенных клеточных популяциях. Антигены главного комплекса гистосовместимости несут на себе в основном лимфоциты. Поэтому суспензию Т лимфоцитов используют в качестве основных носителей антигенов I класса, и суспензию В лимфоцитов для определения антигенов HLA II класса. Для выделения необходимых клеточных популяций из цельной крови используют либо центрифугирование, либо иммуномагнитную сепарацию.

Если между клетками и сывороткой происходит реакция, в результате на поверхности клетки образуется комплекс антиген-антитело. После добавления раствора, содержащего комплемент, происходит лизис и гибель клетки.

Механизмы возникновения аутоиммунных процессов (роль первичных и вторичных аутоантигенов, перекрестно-реагирующих и комплексных).

Существуют два основных вида антигенов : экзогенные и эндогенные. Экзогенные антигены попадают в организм из внешней среды. Под эндогенными антигенами понимают собственные аутологичные молекулы (аутоантигены) или их сложные комплексы, нативные или модифицированные под влиянием тех или иных воздействий и способные вызвать против себя иммунный ответ.

Различают первичные и вторичные аутоантигены.

Первичные или истинные аутоантигены – это антигены собственных нормальных тканей организма, которые процессе формирования иммунной системы в эмбриогенезе не имели и во взрослом организме не имеют контакта с иммунокомпетентными клетками т.к. находятся за гистогематическими барьерами(ткани мозга, паращитовидные железы, семенники, хрусталик глаза). При нарушении целостности гистогематических барьеров против первичных аутоантигенов может возникнуть иммунный ответ приводящий к развитию аутоиммунного процесса.

Вторичные или патологические аутоантигены. Компоненты клеток и тканей собственного организма могут становится аутоантигенными под действием различных повреждающих факторов и инфекционных агентов. К ним относятся: ожоговые, холодовые, лучевые антигены. Формирование вторичного аутоантигена может произойти подействуем бактериальных токсинов и вирусных нейраминидаза также вследствие денатурации белковых молекул при изменении рН среды в очагах воспаления и некроза любой этиологии. Против вторичных аутоантигенов возникает иммунный ответ, приводящий к их удалению из организма . что способствует разрешению патологического процесса и послед регенерации поврежденных тканей.

Перекрестнораегирующие антигены – это антигены принадлежащие к разным видам но содержащие близкие по структуре антигенные детерминанты.

Механизмы предотвращения иммунологического конфликта матери и плода.

Специфическая профилактика резус-конфликта осуществляется человеческим антирезусным IgG. Суть его в том, что не более, чем через 3 суток после родов резус-отрицательной матери вводится человеческий анти-D IgG. Механизм профилактики заключается в присоединении этих антител к резус-положительным эритроцитам плода, попавшим в кровоток резус-отрицательной матери, и последующей их элиминации из организма, вследствие чего иммунизации матери не происходит, которая могла бы стать причиной гемолитической болезни ноорожденного при следующей беременности.

Механизмы процессинга и презентации антигенов АПК

В периферической лимфоидной ткани имеются типы специализированных клеток, которые способны усваивать антиген и представлять его в иммуногенной форме на своей поверхности для распознавания. В основном это макрофаги, дендритные клетки и B-клетки. Все они получили название антигенпрезентирующих клеток. Функция этих типов клеток - придание проникшему антигену иммуностимулирующих свойств. Определенные АПК играют центральную роль в индукции функциональной активности хелперных T-клеток, какие-то взаимодействуют с другими клетками иммунной системы.Антигенпрезентирующие клетки локализованы преимущественно в коже, лимфатических узлах, селезенке, эпителиальном и субэпитеальном слоях большинства слизистых оболочек и в тимусе.

Антигенпрезентация макрофагами

Макрофаги переработав вирусный белок или аутобелок длинной 8-11 аминокислотных остатков связывается с молекулами HLA 1класса, а пептиды длинной 12-25 аминокислотных остатков с молекулами HLA 2 класса и представляют в виде 1 сигнала Т-хелперам и Т-киллерам

Вторым сигналом к активации Т-хелперов является секреция ИЛ -1

Макрофаги секретируют ИЛ3,6,8,10,12.-ФНО,простогландины,ИНФ, факторы комплемента

Антигенпрезентация В –клетками

В –лимфоциты поглощают белковые антигены и токсины бактерий, перерабатывают и выставляют пептиды в комплексе с белками МНС 2 класса на свою поверхность

Для активации Т-хелперов необходим костимулятор В 7, который экспресируется В-лимфоцитами под воздействием бактериальных компонентов

Моноклональные антитела, получение, применение.

Моноклональные антитела. Каждый В-лимфоцит и его клоны, способны синтезировать антитела с паратопом строго определенной специфичности. Такие антитела получили название моноклональных. В природных условиях макроорганизма получить моноклональные антитела практически невозможно. Дело в том, что на одну и ту же антигенную детерминанту одновременно реагируют до 100 различных клонов В-лимфоцитов, незначительно различающихся антигенной специфичностью рецепторов и, естественно, аффинностью. Поэтому в результате иммунизации даже монодетерминантным антигеном мы всегда получаем поликлональные антитела.

Принципиально получение моноклональных антител выполнимо, если провести предварительную селекцию антителопродуцирующих клеток и их клонирование (т.е. выделение отдельных клонов в чистые культуры). Однако задача осложняется тем, что В-лимфоциты, как и другие эукариотические клетки, имеют ограниченную продолжительность жизни и число возможных митотических делений.

Проблема получения моноклональных антител была успешно решена Д. Келлером и Ц. Милыптейном. Авторы получили гибридные клетки путем слияния иммунных В-лимфоцитов с миеломной (опухоле­вой) клеткой. Полученные гибриды обладали специфическими свойствами антителопродуцента и «бессмертием» раковотрансформированной клетки. Такой вид клеток получил название гибридом. Гибридома хорошо размножается в искусственных питательных средах и в организме животных и в неограниченном количестве вырабатывает антитела. В результате дальнейшей селекции были отобраны отдельные клоны гибридных клеток, обладавшие наивысшей продуктивностью и наибольшей аффинностью специфических антител.

Гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела, размножают или в аппаратах, приспособленных для выращивания культур клеток или же вводя их внутрибрюшинно особой линии (асцитным) мышам. В послед­нем случае моноклональные антитела накап­ливаются в асцитной жидкости, в которой размножаются гибридомы. Полученные как тем, так и другим способом моноклональные антитела подвергают очистке, стандартиза­ции и используют для создания на их основе диагностических препаратов.

Гибридомные моноклональные антитела нашли широкое применение при создании диагностических и лечебных иммунобиологических препаратов.

Определение иммунитета. Основные типы иммунных реакции

Иммунитет — невосприимчивость, сопротивляемость организма к инфекциям и инвазиям чужеродных организмов, а также воздействию чужеродных веществ, обладающих антигенными свойствами

Различаем два основных типа иммунитета: видовой (наследственный) и индивидуальный (приобретенный). Видовой иммунитет одинаков у всех представителей определенного вида животных. Видовой иммунитет человека делает его невосприимчивым по отношению ко многим заболеваниям животных (например, чуме собак), с другой стороны многие животные невосприимчивы к болезням людей. Основу видового иммунитета, видимо, составляет различие микроструктуры. Видовой иммунитет передается по наследству от одного поколения к другому.

Индивидуальный иммунитет формируется на протяжении жизни каждого человека и не передается последующим поколениям. Формирование индивидуального иммунитета происходит, как правило, во время различных инфекционных заболеваний (или отравлений), однако не все болезни оставляют после себя стабильный иммунитет. Так например, после перенесенной гонорей иммунитет очень непродолжителен и слаб, поэтому это заболевание может возникнуть вновь спустя некоторое время после очередного контакта с микробом. Другие заболевания, как, например, ветряная оспа, оставляют стабильный иммунитет, который предотвращает повторное заболевание на протяжении всей жизни. Длительность иммунитета определяется главным образом иммуногенностью микроба (способность вызывать иммунный ответ).