Исследование № 2. Подсчёт количества лейкоцитов

а) Определение количества лейкоцитов в крови человека в покое.

Цель работы: ознакомится с методикой подсчёта лейкоцитов у человека и найти различия числа лейкоцитов до и после мышечной работы.

Оборудование: камера Горяева; смеситель для лейкоцитов; раствор уксусной кислоты 1-3% подкрашенной в голубой цвет метиленовой синью; скарификатор; покровные стёкла; спирт; эфир; вата; йод; дистиллированная вода.

Ход исследования. Для определения числа лейкоцитов кровь разбавляет­ся в 10 или 20 раз. Для этого применяют специальный смеситель (смеситель для белой крови). Для разведения крови служит 1—3-процентный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синью. Уксусная кислота разрушает эритроциты, а метиленовая синь окрашивает ядра лейкоцитов. При подсчете лейкоцитов применяют те же приемы, что и при определе­нии числа эритроцитов, но подсчет нужно производить в 25 больших квадратах или 400 маленьких квадратиков камеры Горяева, последовательно передвигая камеру при помощи крестообразного столика. Полученное число умножают на 100 при разведе­нии крови в 10 раз и на 200 при разведении в 20 раз, исходя из следующего. Допустим В — число лейкоцитов в 400 маленьких квадратиках камеры, следовательно, на 1 квадратик приходится в среднем В / 400 телец; объем 1 квадратика = 1 / 4000 мм³. В 1 мм³ жидкости будет содержаться: В * 4000 / 400 лейкоцитов. Кровь была разведена в 10 раз. Следовательно, в 1 мм³ крови число лейкоцитов (Х) будет:

Х = В * 4000 * 10 / 400 = В * 100 лейкоцитов.

В норме у человека в 1 мм³ крови содержится 6—8 тыс. лейкоцитов.

б) Определение количества лейкоцитов при мышечной работе.

Ход исследования. Испытуемый производит бег на месте в течение 3-х минут (частота шагов 180 в минуту). После этого быстро делаем забор крови из пальца аналогично исследованию № 1 и определяем количество лейкоцитов выше указанным методом.

Исследование № 3 определение количества гемоглобина в крови

Ц ель работы: ознакомится с методикой определения количества гемоглобина в крови у человека.

Определение гемоглобина в крови производится колориметрическим способом. Этот способ основан на сравнении окраски водного раство­ра исследуемой крови с определенным раствором химически чистого гемо­глобина или с каким-либо другим красящим веществом, окраска которо­го соответствует определенной концентрации гемоглобина. Для опреде­ления количества гемоглобина имеются специальные приборы гемо­метры. Чаще используется гемометр Сали.

Гемометр Сали состоит из трех пробирок одинакового диаметра, помещенных в штативе, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. Одна из пробирок (средняя) пустая, градуированная, предназначена для исследуемой крови. Две другие (боковые) запаяны и наполнены стандарт­ным раствором солянокислого гематина, имеющего коричневую окраску, интенсивность которой соответствует 16,7% содержания гемоглобина по отношению к высшему пределу нормы, что принимается за 100%. К гемометру приложена капил­лярная пипетка емкостью (до метки) в 20 мм³.

Оборудование: гемометр Сали; пипетка для взятия воды и соляной кислоты; игла скарификатор; 0,1% раствор соляной кислоты; спирт; эфир; вата; йод; дистиллированная вода.

Ход исследования. Определение количества гемоглобина производится следующим образом. В градуированную пробирку наливают децинормальный раствор соляной кислоты до метки 10. Делают укол пальца скарификатором. К выступившей (второй) капле крови подводят отверстие капиллярной пипетки, которая вследствие капиллярности наполняется кровью. Кровь набирают до метки (20 мм³) и выдувают ее на дно пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты остался прозрачным. После этого жидкость тщательно переме­шивают стеклянной палочкой и оставляют в штативе на 5 мин. За это время полностью произойдет превращение гемоглобина в со­лянокислый гематин и жидкость примет бурый цвет.

Далее, пипеткой, приложенной к гемометру, прибавляют в пробирку с исследуемой кровью дистиллированную воду до тех пор, пока цвет ее раствора не будет одинаков с цветом жидкости стандарт­ных пробирок. Теперь процент гематина, а, следовательно, и гемоглобина, бу­дет одинаков и в стандартном растворе, и в исследуемой крови. Цифра, стоящая на уровне полученной жидкости, показы­вает процентное содержание гемоглобина в исследуемой крови по сравнению со стандартной или сразу абсолютное количество гемоглобина в граммах в 100 г крови.

Если гемометр показывает процентное содержание гемоглобина, то можно вычислить и абсолютное со­держание гемоглобина в крови. Метка 100% по шкале градуированной пробирки в при­боре Сали соответствует 16,7 г гемогло­бина. Отсюда абсолютное содержание ге­моглобина в исследуемой крови - (Х) может быть вычислено, исходя из пропорции:

100% - 16,7 г

А% - Х тогда Х=А х 16,7 / 100;

где А — найденный процент по прибору Сали. В норме абсолютное содержание гемоглобина составляет у мужчин 13,3 — 15,6%, у женщин 12,1—13,8%, что составляет по прибору Сали от 70 до 90%.